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贵州省自然科学基金(J[2005]2061)

作品数：4 被引量：2H指数：1
相关作者：詹文芳李红蔡善君谢兵宿罡更多>>
相关机构：遵义医学院附属医院福建医科大学更多>>
发文基金：贵州省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 4篇抑素
  • 4篇内皮
  • 4篇内皮抑素
  • 3篇微囊
  • 3篇微囊化
  • 3篇内皮抑素类
  • 2篇人内皮抑素
  • 2篇细胞
  • 1篇性状
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇生理
  • 1篇生理学
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学性状
  • 1篇体外
  • 1篇体外表达
  • 1篇投药
  • 1篇脐静脉内皮

机构

  • 4篇遵义医学院附...
  • 1篇福建医科大学

作者

  • 4篇宿罡
  • 4篇谢兵
  • 4篇蔡善君
  • 4篇李红
  • 4篇詹文芳
  • 3篇刘锐
  • 1篇张鹏飞

传媒

  • 2篇中华眼底病杂...
  • 1篇中华眼科杂志
  • 1篇眼科研究

年份

  • 1篇2011
  • 1篇2010
  • 2篇2009
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
微囊化内皮抑素球周注射的实验研究被引量：1
2009年
目的检测乳化-内部凝胶化制得的海藻酸钙-壳聚糖（CAC）内皮抑素微囊的体外释放情况，大鼠眼球周注射后眼内组织分布情况及生物相容性。方法实验研究。采用乳化-内部凝胶化方式制备微囊，紫外分光光度法、考马斯亮蓝法检测内皮抑素囊外释放情况；32只SD大鼠随机分成4组，每组8只。A组：微囊化ES组，球周注射微囊化内皮抑素20μl（2．5g/L）；B组：单纯内皮抑素组，球周注射内皮抑素蛋白20μl（2．5g／L）；C组：空微囊组，球周注射空微囊20μl；D组：生理盐水组，球周注射生理盐水20μl。免疫组织化学法、ELISA法、Western—blot法检测内皮抑素分布、浓度和蛋白表达；观察SD大鼠的日常活动，进食情况和体重，以断颈法将大鼠处死取心、肝、脾、肺、。肾及球周组织（球周注射部位周围组织）行病理学检查。采用独立样本设计定量资料t检验对数据进行分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测可见内皮抑素蛋白条带，3、7、14、21d各时点上清液中内皮抑素蛋白质浓度逐渐增加。A组：球周注射后7、14d，内外核层和RPE层见内皮抑素蛋白阳性表达；B组：7d时，以上组织可见内皮抑素蛋白阳性表达，14d后无蛋白阳性表达；C组和D组7、14d以上组织均未见内皮抑素蛋白阳性表达，表明内皮抑素蛋白经CAC微囊化后通过球周注射可以穿过巩膜壁进入球内。A组7、14d，眼球组织匀浆内皮抑素蛋白浓度分别为每只眼（63．16±7．64）μg/L和（33．2±5．77）μg/L，而B组分别为（33．2±2．89）μg/L，（15．73±2．08）μg/L，A组明显大于B组且差异具有统计学意义（t=6．364、4．920，P=0．003、0．008）；大鼠日常活动和进食情况均正常，14d后病理学检查心肝、脾、肺、肾及球周组织未见异常。结论微囊化内皮抑素具有缓控释功能，球周注射微囊化内皮抑素，
詹文芳蔡善君刘锐谢兵李红宿罡
关键词：壳聚糖内皮抑素类投药
微囊化人内皮抑素／293细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞增生的抑制作用
2011年
目的观察不同细胞密度的微囊化人内皮抑素／293（hES／293）细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增生的抑制作用。方法采用聚电解质络合法制作不同密度微囊化hES／293细胞，分为1×10^4个／ml组（A组）、1×10^6个／ml组（B组）、1×10^8个／ml组（C组）；同时将微囊内不包裹hES／293细胞者设为对照组（D组）；每组6个样本。培养后1、3、7、14、35d，锥虫蓝染色计数微囊囊内细胞总数、活细胞数和存活率；噻唑蓝（MTT）比色法检测各组微囊化hES／293细胞的生长情况；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测微囊化hES／293细胞囊外内皮抑素（ES）蛋白释放量。取生长状态良好的HUVEC分别与A、B、C、D组微囊化hES／293细胞共同培养。于共同培养后24、72、120h，MTT比色法检测微囊化hES／293细胞对HUVEC增生的抑制作用。结果A、B、C组微囊囊内hES／293细胞总数和活细胞数均随时间延长而增多，囊内细胞存活率于培养后3d最高。A、B、C组微囊化hES／293细胞生长速率比较，培养后1d时组间差异无统计学意义（P〉0．05）；培养后3d，A组较B、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养后7、14、35d，B组较A、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。A、B、C组微囊化hES／293细胞囊外ES蛋白释放量比较，培养后1、14d时组间差异无统计学意义（P〉0．05）；培养后3d，A组较B、C组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；培养后7、35d，B组较A组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。共同培养后24h，A、B、C组对HUVEC均未表现出抑制作用（P〉0．05）；共同培养后72、120h，A、B、C组均明显抑制HUVEC增生，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论细胞密度为1×10^6个／ml的微囊化hES／293细胞生长稳定、存活率较高，可持续稳定的释放ES蛋白。不同密度的微囊化hES／293细胞均可抑制HUVEC增生
张鹏飞蔡善君詹文芳谢兵李红宿罡
关键词：内皮细胞细胞
pEGFP-N1-Endostatin重组质粒的构建及其体外表达
2009年
目的构建分泌型人内皮抑素(ES)的真核表达载体pEGFP-N1-Endostatin重组质粒,鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以pcDNA3-Endo质粒为模板,通过PCR扩增获得人ES基因片段,且在基因前加信号肽序列,将其定向插入真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒pEGFP-N1-ES。采用HindⅢ和BamHⅠ双酶切法、PCR法及插入片段序列测定法鉴定该质粒。利用阳离子脂质体介导法,将其转染到人胚胎肾HEK-293细胞中,采用免疫组织化学法和Westernblot法检测转染细胞内及培养上清液中ES蛋白的表达。结果通过HindⅢ和BamHⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证明构建出了含ES基因的真核表达载体,且插入片段正确。采用免疫组织化学法和Western blot法检测表明HEK-293细胞内及培养上清中存在相对分子质量为20 000的人ES蛋白表达。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-ES真核表达载体,转染HEK-293细胞后可稳定有效地分泌人ES蛋白。
詹文芳蔡善君刘锐谢兵李红宿罡
关键词：内皮抑素真核表达载体WESTERNBLOT
分泌人内皮抑素的微囊化基因工程细胞系的构建被引量：1
2010年
目的 建立能稳定分泌人内皮抑素（hES）的基因工程细胞系，观察内皮抑素（ES）蛋白和hES的表达。方法以hES重组质粒pcDNA3．0（pcDNA3-Endo）为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增获得hES基因片段，且在基因前加信号肽序列，将其定向插入真核表达载体绿色荧光蛋白（pEGFP—N1）质粒中，获得重组质粒pEGFP—N1-ES；利用阳离子脂质体介导将其转染到人胚胎肾细胞（HeK-293）细胞中，G418筛选后得到阳性克隆hES／293，采用蛋白免疫印迹（Westernblot）法检测转染细胞上清中ES蛋白的表达；用海澡酸钠壳聚糖（ACA）微囊包裹hES／293细胞，分别收集培养3、7、21、35d的AcA微囊化hES／293细胞的培养上清液，Westernblot法检测包裹后培养液上清中hES的表达。结果重组质粒pEGFP-N1-ES经限制性核对内切酶HindⅢ和限制性核酸内切酶BamHI双酶切得到4700碱基对（bp）和600bp2条带；PCR扩增出600bp条带；测序结果与NCBI上序列比对软件（BLAST）比对，同源性达到100％。pEGFP—N1-ES转染HeK-293细胞，经G418筛选后获得阳性克隆，选取筛选的10株单克隆细胞培养上清液进行Westernblot分析，在相对分子质量为20×10。处出现蛋白条带。在ACA微囊内hES／293细胞随着培养时间的延长，细胞团逐渐长大，充满整个囊内空间。培养3、7、21、35d时，在相对分子质量为20×10^2处出现蛋白条带。结论重组pEGFP—N1-ES真核表达载体构建正确，转染HeK-293细胞后可有效的表达hES蛋白，并能分泌到细胞外；微囊化hES／293细胞产生的ES蛋白可以自由扩散出微囊膜外，并呈持续性表达。
蔡善君詹文芳刘锐谢兵李红宿罡
关键词：细胞系
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