目的 构建前列腺特异性膜抗原启动子增强子靶向性调控的 U PRT基因真核表达重组质粒 (p PS-MAenhancer/ promoter- U PRT)。方法 采用 PCR技术从大肠杆菌 JM10 9基因组中扩增 U PRT基因 ,通过分子克隆技术将其克隆到包括前列腺特异性膜抗原启动子增强子靶向性调控的 p EGFP- 1的质粒。利用重组质粒 p PS-MAenhancer/ promoter- U PRT)转染 L Ncap细胞 ,MTT法检测 5 -氯尿嘧啶 (5 - FU)对转染 L Ncap细胞存活率的影响。结果 质粒 p PSMAenhancer/ promoter- EGFP双酶切去除 EGFP,连接上 U PRT基因 ,成功构建 p PSMAenhancer/ promoter- UPRT,并转染 L Ncap细胞 ,使 L Ncap细胞对 5 - FU的杀伤敏感性大大提高。结论 p PSMAenhancer/ promoter- U PRT的构建和表达 ,为进一步研究 UPRT基因对 5 - FU的靶向性杀伤前列腺癌细胞增强作用和对前列腺癌自杀基因系统 (CD/ 5 -FC系统 )的放大效应奠定了基础。
