广东省兽医生物技术重点实验室
- 作品数：13 被引量：66H指数：5
- 相关作者：张春红更多>>
- 相关机构：中山大学华南农业大学国家海洋局更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 1997年
- 将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。
- 宋长绪刘福安杜伟贤
- 关键词：NDV融合蛋白重组杆状病毒
- RT-PCR快速检测口蹄疫病毒被引量：14
- 2002年
- 根据口蹄疫病毒VP1基因的序列 ,设计了 1对引物 ,建立了检测口蹄疫病毒的RT -PCR方法。对FMDV各毒株检测 ,结果均为阳性 ,而对猪病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性 ;检测 19份已知阳性样品 ,检出率 10 0 % ;与动物接种试验比较 ,符合率 10 0 % ,证明该方法特异。与经典方法动物接种试验比较 ,其灵敏度提高10 0倍左右 ;对O3I3株的细胞毒进行检测 ,其敏感度达 10个TCID50 。初步结果表明所建立的RT
- 娄高明杜伟贤杨傲冰周秀蓉张春红谢明权
- 关键词：RT-PCR口蹄疫病毒
- 伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gC基因全序列的克隆与分析
- 根据伪狂犬病病毒Becker株的gC基因序列,设计并合成了1对特异性引物,通过PCR方法从我国伪狂犬病病毒代表毒株Fa株的基因组DNA中扩增到了1条约1.6kb的片段。将PCR扩增产物纯化后克隆到pMD18-T载体中,转...
- 敖敬群娄高明陈新华廖筱萍杨林杜伟贤龙綮新王珣章谢明权
- 关键词：伪狂犬病病毒GC基因PCR扩增基因克隆
- 文献传递
- 伪狂犬病防制策略及我国应采取的对策被引量：5
- 2001年
- 伪狂犬病病毒 (PRV)是α疱疹病毒属的一个成员 ,为伪狂犬病的病原。猪是伪狂犬病病毒的自然宿主。该病原一旦感染猪 ,则产生潜伏感染 ,其致死率随猪年龄的增加而降低。由于伪狂犬病的暴发引起畜牧业的巨大经济损失 ,许多国家都进行免疫接种预防该病。而该病在不同的国家或地区危害不同 ,所造成的经济损失也不一样 ,另外各国的经济发展不平衡 ,因此对该病所采取的防制策略亦有所不同。文章综述了美国、日本、欧共体及其成员国之间对伪狂犬病采取的防制策略及取得的进展 ,并根据我国伪狂犬病的流行现状 ,提出了应采取的控制策略。
- 娄高明杜伟贤
- 关键词：伪狂犬病防制策略
- 猪附红细胞体病的调查及诊治被引量：6
- 2002年
- 杨傲冰梁昭平周秀蓉杜伟贤娄高明
- 关键词：症状病理变化附红细胞体病
- PRV广东株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定
- 2001年
- 根据伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株gE基因的序列设计并合成了 1对引物 ,以我国PRV地方毒株广东株的基因组DNA为模板 ,通过PCR方法获得了一大小约 1 6kb的DNA片段 ,并将其克隆到pMD18_T载体上进行测序 .序列测定结果显示 ,该片段长 16 6 5bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与PRVRice株gE基因的核苷酸序列同源性为 97 7%,氨基酸序列同源性为 95 9%
- 敖敬群娄高明杨林龙綮新王珣章
- 关键词：伪狂犬病病毒PCR扩增基因克隆
- 猪附红细胞体病流行病学调查及诊治被引量：2
- 2002年
- 通过对广东、海南、江西等地110个猪场送检的2 450份血液的检测,结果发现猪附红细胞体病阳性场为102个,阳性率为92.7％,结合生产实际对猪附红细胞体病的流行病学和诊治方法进行阐述。
- 杨傲冰杜伟贤娄高明周秀蓉
- 关键词：附红细胞体病流行病学诊治
- 伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段在Pichia pastoris中的表达被引量：1
- 2003年
- 伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白E是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白 .将伪狂犬病病毒闽A株 gE基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαA中 ,获得的重组表达载体pPICZαA FL电击转化野生型酵母菌SMD116 8后 ,得到多株酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL .经高浓度ZeocinTM筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定 ,最后得到高效表达 gE基因去信号肽片段的酵母工程菌SMD116 8/ pPICZαA FL 7.工程菌 72h培养上清的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示 ,gE基因去信号肽片段表达产物大小约为 80ku ,比预期的 6 3 8ku大 .凝胶薄层扫描结合Bradford蛋白质总含量测定结果表明 ,表达产物占工程菌培养上清总蛋白的 13 4 9% ,表达量可达 11 7mg/L .间接ELISA结果表明重组表达产物具有良好的抗原性 。
- 敖敬群王瑾雯陈新华王珣章龙綮新娄高明
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因信号肽
- PCR检测伪狂犬病病毒DNA被引量：22
- 2001年
- 根据伪狂犬病病毒 (PRV)gB基因的序列 ,设计并合成了一对引物 ,以闽A株细胞培养毒为模板 ,筛选最佳反应条件 ,建立了检测PRV的PCR方法 应用该方法对Fb、Bartha、BJ、GD、V2F4、S、S3、SR、Buk、Shope、Norden、MinkⅢ、HB、F8、F9、F12等毒株的细胞培养液进行基因扩增 ,均获得了分子量为 2 81bp的特异性目的DNA片段 ,而对Vero细胞与FMDV、SVDV、HCV、PRRSV、JEV、PPV等病毒进行检测 ,结果均为阴性 ,没有出现交叉反应 对PRV毒株扩增的产物测序 ,结果序列与文献报道一致 ,证明PCR扩增产物和方法的特异性 对 1994～ 2 0 0 0年期间送检的临床样品和保存的PRV毒种 ,用病毒分离、双抗体夹心ELISA和PCR等 3种方法进行检测 ,结果前 2种方法检测为阳性的 ,PCR检测均为阳性 ;PCR检测为阴性 ,前 2种方法检测也为阴性 ;可是 ,前 2种方法检测为阴性的 ,PCR却检测出部分阳性 ;经x2 检验 ,证明PCR检出率明显高于前 2种方法的检出率 对PRV闽A株细胞毒提取物DNA进行检测 ,其最低检出量为 15 8pg 对 1999～ 2 0 0 0年期间广东、福建、海南等省的 31个大中型猪场送检的 191份病料进行检测 .结果病料阳性率为 2 6 2 % ( 50 191) ,猪场阳性率为 71% ( 2 2 31) 实验结果表明 ,所建立的PCR技术可用于伪狂犬病的快速诊断?
- 娄高明杜伟贤廖筱萍谢明权
- 关键词：伪狂犬病病毒DNA检测PCR
- 伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定被引量：3
- 2001年
- 根据已经发表的伪狂犬病病毒 (PRV) Rice株的 g E基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,通过 PCR方法扩增到了PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,并克隆到 p MD18- T载体中 ,转化大肠杆菌 XL1- blue菌株。重组质粒 p MD18- T- FL经酶切和 PCR鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,重组质粒 p MD18- T- FL含有PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,长 16 74bp。序列比较分析表明 ,此区段与 PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为 97.5 % ,氨基酸序列同源性为 94.8%
- 娄高明敖敬群杨林杜伟贤王珣章
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因基因克隆PCR
