为了研究S100A4蛋白在鹿茸发生过程中的生物学功能,构建长白山梅花鹿鹿茸S100A4基因原核表达载体,并进行BL21原核表达;自鹿茸骨膜中提取总RNA,逆转录成c DNA,以特异性引物扩增S100A4,扩增产物克隆到p MD18-T载体并测序鉴定,将目的片段和原核表达质粒p ET-15b分别用Bam H I和HindⅢ双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21用TPIG进行诱导表达;结果通过序列的对比分析,S100A4基因是一个相对保守的基因,与多个物种的匹配度达到90%,与牛S100A4基因同源性最高,达到98.4%;成功构建了p ET15b-S100A4表达质粒,转化BL21诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测显示表达的蛋白分子量为11 k D,与预期一致。表明梅花鹿鹿茸干细胞S100A4基因的可以在原核中克隆、分析和表达,为真核表达和进一步的蛋白功能分析奠定了基础。
为观察鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿循环和呼吸的影响,6只成年健康梅花鹿被肌注鹿特异性复合麻醉剂0.04 m L/kg,给药后全程监测动物的麻醉状态、呼吸频率(RR)、心率(HR)、收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP)、舒张压(DBP)、动脉血氧饱和度(SPO2)、体温(T)等参数。结果显示:鹿特异性复合麻醉剂作用梅花鹿的诱导时间为(6.10±0.45)min,麻醉时间为(91.67±2.25)min,苏醒时间(33.0±2.0)min;梅花鹿在诱导期HR、RR出现一过性升高,进入麻醉期后开始降低,与诱导前比较变化显著(P<0.05);麻醉期DBP、SBP、MAP、T和SPO2与诱导前比较显著降低(P<0.05)。结果提示:鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿麻醉期循环和呼吸部分指标有一定影响,但苏醒后各指标恢复正常。
