四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室
- 作品数：86 被引量：112H指数：5
- 相关作者：高蕾黄毕朱庆平路会侠朱海龙更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项美国中华医学基金会项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 卡介苗胞壁蛋白增强肺抗铜绿假单胞菌感染防御功能的研究
- 2007年
- 目的观察卡介苗胞壁蛋白组分能否提高大鼠肺组织对铜绿假单胞菌的清除率。方法密度梯度离心和分子筛方法分离卡介苗胞壁蛋白组分。用Northern杂交和RT-PCR检测卡介苗全菌体及其胞壁蛋白组分对肺上皮SPC-A-1细胞β防御素hBD-1 mRNA表达的刺激作用;腹腔注射卡介苗胞壁蛋白组分48h后,经气管滴入铜绿假单胞菌或金黄色葡萄球菌,24h后处死大鼠,取肺组织进行菌落计数。结果卡介苗胞壁蛋白经分子筛层析后主要得到两大组分,Tricine-SDS-PAGE鉴定组分2相对分子质量约为18×103～30×103。Northern杂交显示热灭活卡介苗能提高肺上皮细胞β防御素hBD-1 mRNA表达,RT-PCR显示胞壁蛋白组分2刺激作用明显强于全菌体。经胞壁蛋白组分2治疗的大鼠肺组织铜绿假单胞菌数低于阴性对照组(P<0.01),而对金黄色葡萄球菌感染无明显抵抗作用。结论卡介苗胞壁蛋白组分可提高肺组织对铜绿假单胞菌的清除率,增强肺抗感染防御能力。
- 刘小康周慧黄宁祝秉东冯云吴琦王伯瑶
- 关键词：卡介苗防御素铜绿假单胞菌
- 结核分枝杆菌感染引起的细胞损伤与死亡被引量：4
- 2020年
- 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染巨噬细胞后,巨噬细胞的死亡模式主要为凋亡和程序性坏死。细胞凋亡长期以来被认为是宿主细胞采取的免疫策略,能限制结核分枝杆菌的传播,并迅速启动针对病原体的适应性免疫。而程序性的坏死则为细菌的增殖传播创造了条件,同时还会对组织器官造成免疫病理性损伤。细胞的死亡模式在对结核分枝杆菌的免疫中扮演了极其重要的作用,现就结核分枝杆菌对宿主细胞造成损伤的机制,宿主细胞的死亡的机制,以及这些损伤与宿主细胞死亡模式之间的关联进行综述。
- 王楚涵罗涛鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌细胞损伤细胞死亡
- 人淋巴因子激活的杀伤细胞抗生素肽的分离纯化
- 2002年
- 目的 分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞 (lym phokine activated killer,L AK)内源性抗生素肽。方法 采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,并用 IL- 2和 PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine- SDS-PAGE鉴定其分子量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果 从人 L AK细胞酸溶性提取物中纯化出多个多肽 ,其中 HL P- 2 b、HL P- 3a完全纯化 ,分子量分别为 7.9× 10 3u和 4× 10 3u。HL P- 2 a、HL P- 2 c、HL P- 3b和 HL P- 3c基本纯化 ,主带分子量分别为 7.2× 10 3u、10 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u。 HL P- 3a具有抗金黄色葡萄球菌活性 ,HL P- 2 a、HL P- 2 b、HL P- 2 c、HL P- 3b、HL P- 3c具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗白色念珠菌活性。结论 人 L
- 张旗黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词：人LAK细胞纯化密度梯度离心法
- 结核杆菌CRISPR-associated Csm4(Rv2820c)诱导iNOS表达对耻垢杆菌胞内存活的影响被引量：2
- 2018年
- 目的研究Csm4蛋白在重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)中的表达及其影响胞内存活的机制。方法 PCR扩增Csm4基因,构建重组pMV261-Csm4穿梭表达质粒,将重组质粒和空白质粒电穿孔进MS生成重组菌MS_Csm4和对照重组菌MS_V,采用Western blot对重组菌Csm4蛋白表达进行检测。体外培养观察MS_Csm4和MS_V生长曲线,并检测活性氮、活性氧环境下的集落形成单位(CFU)变化。MS_Csm4和MS_V重组菌感染人源巨噬细胞THP-1,计数CFU反映胞内存活,实时荧光定量PCR检测诱导性一氧化氮合酶基因(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达。硝酸还原酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)释放指标。结果 Csm4蛋白在MS_Csm4中成功表达,且其表达不影响MS_Csm4的生长情况;MS_Csm4在体外活性氮、氧环境中CFU下降,与MS_V相比,差异有统计学意义(P<0.05);重组菌MS_Csm4作用于THP-1细胞后诱导iNOS表达上调,促进NO的释放以及减少胞内生存,与MS_V相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组菌MS_Csm4不能耐受体外活性氮、氧压力环境,可诱导宿主细胞iNOS表达上调,促进NO释放,从而影响其胞内生存能力。
- 翟小倩鲍朗罗涛彭璇孙长峰杨国平
- 关键词：重组耻垢分枝杆菌
- 结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较被引量：1
- 2004年
- 目的 探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法 ,为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法 分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒 ,体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后 ,将其分别用作DNA疫苗给BALB/c小鼠肌内注射 ,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标 ,同时进行动物免疫保护性实验 ,比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果 结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗 ,但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论 粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。
- 谢勇恩鲍朗赵明才张会东赵计林王晓樱
- 关键词：DNA疫苗结核杆菌小鼠AG85A免疫效应粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
- 结核分枝杆菌MycP1蛋白的原核表达及其对巨噬细胞的毒性作用
- 2012年
- 目的:构建结核分枝杆菌MycP1蛋白原核表达系统。方法:构建pGEX-4T-1-Rv3883c重组质粒,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Westernblot法检测目标蛋白的表达情况。目标蛋白经亲和层析纯化后,以不同质量浓度MycP1作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,48h后XTT法检测活细胞数,同时测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,以评价其细胞毒性。结果:成功构建pGEX-4T-1-Rv3883c质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达,经鉴定,表达的融合蛋白为目标蛋白MycP1。该融合蛋白作用后可使ANA-1活细胞数下降(F=34.327,P<0.001),培养上清液中LDH活力升高(F=336.720,P<0.001)。结论:成功构建了MycP1原核表达系统,目标蛋白对巨噬细胞有一定的毒性效应。
- 黄丹丹鲍朗杨晓玲邓仪昊廖丹
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞细胞毒性
- 全冠修复对牙隐裂的治疗作用被引量：1
- 2009年
- 目的:研究牙隐裂的有效治疗方法。方法:91颗已确诊牙隐裂的牙根据全冠修复与否分成进行全冠修复和未进行全冠修复两组,随后进行一年的疗效追踪观察。结果:进行全冠修复完全成功55颗,占61.1%;改善7颗,占7.85%。未进行全冠修复的28颗全部失败,占31.1%,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:全冠修复对保证牙隐裂治疗成功具有重要作用。
- 魏静张会东
- 关键词：牙隐裂全冠修复牙髓治疗
- HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究
- 2009年
- 目的:我们先前的研究证明HMGN2(high mobility group nucleosomal-binding domain2)是人LAK细胞抗菌的一个新的效应分子,本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法:应用反向高效液相色谱技术从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化批量HMGN2分子,用质谱精确分子量测定、Western blotting和抗菌试验对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。采用MTT法检测HMGN2分子对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3d和第6d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的含量。结果:从人淋巴结组织中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白;在检1-100mg/L范围内,HMGN2分子对HepG2.2.15细胞无细胞毒性;HMGN2分子在1-5mg/L水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,可显著降低HBVDNA拷贝数。结论:HMGN2分子在体外具有较强的抗HBV活性。
- 孔祥丽张平何芳张敏唐红冯云吴琦黄宁王伯瑶
- 关键词：HMGN2抗病毒活性肝炎病毒乙型
- 结核分枝杆菌H37Rv株Rv1494和Rv1495假想蛋白基因的克隆表达
- 2007年
- 目的为探索参与调控结核分枝杆菌(MTB)持续性感染的相关分子,对MTBH37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆、表达及Westernblotting鉴定。方法采用Bioedit、Dnaman软件及Pfam数据库对MTBH37Rv株Rv1494、Rv1495基因编码蛋白质的氨基酸组分、蛋白模块以及其与大肠杆菌E.coli的mazEF蛋白家族的同源性进行分析。以H37Rv株基因组为模板,分别对Rv1494、Rv1495基因进行克隆,构建pET32a(+)原核表达质粒,转化BL21宿主菌。重组蛋白经SDS-PAGE电泳分离纯化和Westernblotting鉴定。结果生物信息学分析提示,Rv1494基因、Rv1495基因编码的蛋白质分别与大肠杆菌E.coli染色体编码的mazEF家族中的抗毒素和毒素具有一定程度的同源性,分别为26%和29.75%;经测序表明原核表达重组质粒构建成功。负载重组质粒的BL21菌经IPTG诱导后可表达出分子大小与预期值相一致的融合蛋白,表达量均可达到菌体总蛋白的60%。重组蛋白经Westernblotting检测出特异性阳性信号。结论首次对MTBH37Rv株编码Rv1494、Rv1495假想蛋白基因进行克隆表达,为进一步探讨该基因在参与调控MTB持续性感染过程中的功能奠定基础。
- 商正玲鲍朗姚素霞张会东
- 关键词：结核分枝杆菌克隆表达
- ompL17基因酵母双杂交系统的构建及筛选鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的寻找钩体致病的信号传导通路,分析ompl17基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白。方法分别构建诱饵质粒载体和血管内皮细胞cDNA文库,通过顺序性转染转入酵母细胞中,然后进行初步的鉴定。结果PCR和酶切分析证实构建成功了诱饵质粒载体和血管内皮细胞cDNA文库。结论成功构建酵母双杂交系统为发现ompl17基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础。
- 张会东郝牧鲍朗黄毕高蕾
- 关键词：钩端螺旋体克隆
