桂林医学院生物技术学院生物技术教研室
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：熊毅黎玉凤马亦丽更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济医学院上海交通大学医学院癌基因及相关基因国家重点实验室上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“春晖计划”广西科技厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶对波形蛋白表达的调控作用被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)对波形蛋白(Vimentin)表达的调控作用,阐明糖尿病并发肾脏炎症纤维化的形成机制。方法:取患严重自发性糖尿病的C57/BL6小鼠肾脏,以野生型C57/L86小鼠作为对照组,行病理切片和组织荧光染色,应用免疫共聚焦方法检测肾小球系膜细胞中内源性Nampt和Vimentin表达及定位;肾小球膜HBZY-1细胞随机分为4组,即0.56mmol·L^(-1)低浓度葡萄糖(LG)对照组、200mmol·L^(-1)高浓度葡萄糖(HG)处理组、HG+FK866组和HG+NMN组;高浓度葡萄糖干预5d后,分别施加FK866(10μmol·L^(-1))和NMN(1 mmol·L^(-1))作用24h后,通过免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内源性Nampt、Vimentin、核因子κB p65(NF-κBp65)和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶1(Sirt1)表达水平;应用RT-PCR和免疫印迹等方法检测细胞Nampt和Vimentin表达水平。结果:与野生型C57/BL6小鼠组比较,严重糖尿病组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Vimentin表达水平随内源性Nampt表达水平升高而增加(P<0.01);与0.56mmol·L^(-1)低浓度葡萄糖对照组比较,高浓度葡萄糖冲击细胞Nampt、NF-κBp65和Vimentin表达水平明显升高(P<0.01),Sirt1表达水平明显降低(P<0.01)。HG+FK866和HG+NMN组肾小球系膜细胞中Nampt、Vimentin和NF-κBp65表达水平均较对照组明显降低(P<0.01)。结论:高浓度葡萄糖冲击条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性Nampt能够通过NF-κBp65和Sirt1信号通路促进Vimentin表达。
- 翟晓雅冯乔韦日明陈叶胡婷婷冯乐平
- 关键词：高浓度葡萄糖核因子ΚBP65波形蛋白
- 脐带血来源基质细胞培养及造血微环境的建立
- 2008年
- 目的:研究脐带血来源的基质细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用。方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,通过细胞因子对脐血前体基质细胞体外诱导,使其产生基质细胞和形成造血微环境。观察基质细胞的生长状态和细胞表面分子的表达,并建立以该基质细胞为滋养层的脐血造血干细胞体外扩增体系。结果:细胞因子联合培养对CFU-GM增长没有明显影响,但对于CFU-E的形成和细胞增长的影响细胞因子组和细胞因子+基质细胞组所培养的CPU-E与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。脐带血来源的基质细胞分泌细胞因子的时间-效应曲线显示,脐血基质细胞培养3、7、10、14和20 d后,TPO、SCF浓度在培养第7天时达到最高,而GM-CSF在第7天以后则逐渐降至最低。在脐血基质细胞作为滋养层的扩增体系中,加入相应的细胞因子可以使脐血造血细胞明显扩增,其中细胞因子(SCF+IL-3+EPO+TPO+GM-CSF)联合基质细胞培养体系的扩增作用最强。结论:应用细胞因子可以体外培养脐血前体基质细胞产生脐血基质细胞,并可在该基础上形成造血微环境支持体外造血。
- 冯乐平梁瑜祯乔伟
- 关键词：胎血基质细胞CD34^+细胞造血微环境
- 高浓度葡萄糖对体外培养小鼠胰岛细胞NF-κB的表达及细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨核因子κB(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法:对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组:G1组(5.6mmol·L-1葡萄糖)、G2组(7.8mmol·L-1)、G3组(11.1mmol·L-1)、G4组(16.7mmol·L-1)、G5组(22.2mmol·L-1)及G6组(27.6mmol·L-1)。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-κB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果:当葡萄糖浓度5.6～11.1mmol·L-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加(P<0.05),NF-κB的活性逐渐增加(P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化(P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性(P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7mmol·L-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol·L-1各组比较,NF-κB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强(P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。
- 梁瑜祯张木勋夏宁杨月莲冯乐平
- 关键词：细胞凋亡高浓度葡萄糖NF-ΚB细胞色素C类
- NOD小鼠CD_8α^+抗原基因克隆载体的构建及其相关蛋白在树突状细胞中的表达
- 2012年
- 目的:构建NOD小鼠CD8α+抗原基因重组慢病毒载体,探讨其在树突状细胞(DCs)中的表达,阐明1型糖尿病(T1DM)的发病机理。方法:设计CD8α+基因特异性引物,从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增CD8α+基因,与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组,经过转化、筛选、鉴定和序列测定后,应用Western blotting法检测CD8α+基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞,进行重组慢病毒载体包装,将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs,采用Western blotting法检测CD8α+蛋白的表达。结果:成功构建了NOD小鼠CD8α+抗原基因的重组质粒载体,重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液,重组病毒扩增后感染DCs,免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论:NOD小鼠CD8α+抗原基因重组病毒载体构建成功,且有相关蛋白表达。
- 乔伟冯乐平孙情熊毅黎玉凤
- 关键词：1型糖尿病慢病毒载体树突状细胞
- 肿瘤外周酸性微环境促进肝癌HCCLM3细胞的转移被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤外周酸性微环境对肝癌HCCLM3细胞转移的影响。方法:将肝癌细胞HCCLM3分别培养在不同pH值(pH7.4、pH7.0和pH6.6)的细胞培养液中,通过细胞体外迁移实验和体外侵袭实验分析HCCLM3细胞在迁移和侵袭能力方面的改变,通过Western印迹、明胶酶谱及原位酶谱法分析HCCLM3细胞在基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)合成、分泌和激活方面的变化。结果:当细胞外周微环境向酸性变化时,HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力均明显增强(P<0.01),虽然细胞内MMP-2的合成未发生明显改变,但细胞分泌的MMP-2及MMP-2的激活均明显增强(P<0.01)。结论:细胞外周酸性微环境可以上调细胞MMP-2的分泌及激活,并促进肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭和迁移能力,提示肿瘤外周酸性微环境对肝癌细胞HCCLM3的转移具有促进作用。
- 谭宁覃文新刘青波马亦丽王植柔
- 关键词：肝肿瘤肿瘤转移
- 学生自主授课在酶工程教学中的尝试被引量：8
- 2009年
- 学生自主授课是由学生充当课堂教师，对课程内容进行自主教学，变灌输式学习为主动的“教与学”，任课教师对教学进行全程辅导，及时补充梳理、归纳总结。这种学生上讲台，教师成导师的新型教学模式，打破了以课堂、教师、书本为中心的传统局面，开创了自主学习的新格局。酶工程是生物技术专业的主干课，一直以来酶工程课程的教学模式基本上沿用讲授式教学，其优点是教师能系统地向学生传授知识，学生基础知识比较扎实。但这种以教师为主导的传统教学模式，学生往往是被动的接受知识，抑制了学生的创造性思维，
- 谢琦王凛韦莹珏黄江
- 关键词：酶工程教学改革学生授课
- 苯丙酸诺龙对胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌的影响
- 2014年
- 目的:观察雄性激素苯丙酸诺龙(BPN)干预下胰岛NIT-1细胞中烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达、细胞周期和胰岛素分泌的变化,探讨高浓度葡萄糖氧化应激状态下BPN对NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素信号分子的影响。方法:应用4种不同浓度(5.6、11.1、16.7和27.6mmol·L-1)葡萄糖培养NIT-1细胞,以10mg·L-1 BPN干预NIT-1细胞48h,以未加BPN处理的相应浓度葡萄糖为对照组。应用Western blotting法检测各组细胞中Nampt、IRS-2和PDX-1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞周期;放射免疫法测定细胞胰岛素分泌水平。结果:与相应浓度葡萄糖对照组比较,各BPN处理组NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平增加(P<0.05或P<0.01);与相应对照组比较,在低糖(5.6mmol·L-1)时,BPN能够明显解除细胞G0/G1期阻滞(P<0.01),在高糖(27.6 mmol·L-1)时,能够解除细胞的G2/M阻滞(P<0.01);除正常葡萄糖浓度11.1mmol·L-1组之外,各处理组细胞的胰岛素分泌水平均明显增加(P<0.01)。结论:BPN能够增加胰岛NIT-1细胞中Nampt、ISR-2和PDX-1蛋白表达水平,NIT-1细胞中Nampt表达与胰岛素信号传导途径的相关分子间可能存在密切关联,雄性激素在一定条件下能够改善胰岛细胞的胰岛素抵抗状态。
- 乔伟农林琳冯乔吴雅婷胡婷婷王平梁瑜祯冯乐平
- 关键词：苯丙酸诺龙胰岛素
- 医学硕士研究生生物信息学教育初探被引量：3
- 2008年
- 谭宁
- 关键词：生物信息学现代教育技术案例教学
- 烟酰胺磷酸核糖转移酶在2型糖尿病大鼠糖代谢相关组织中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的:研究2型糖尿病大鼠机体主要能量代谢器官(肝脏、胰腺、肌肉和肾脏)中烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的表达,探讨Nampt表达和分布与糖尿病发病的关系。方法:腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立SD大鼠糖尿病模型,将大鼠随机分为糖尿病组和对照组。检测大鼠空腹血糖(FBG)和胰岛素分泌水平;采用免疫组织化学Envision染色法检测大鼠肝脏、胰腺、骨骼肌和肾脏组织中Nampt蛋白表达和分布。结果:糖尿病组大鼠FBG水平明显高于对照组(P<0.01),空腹胰岛素水平明显低于对照组(P<0.01)。糖尿病组大鼠肝脏组织Nampt表达明显增高,Nampt蛋白充满全部细胞质;骨骼肌Nampt蛋白表达使整个细胞呈浓染;肾脏细胞Nampt表达主要分布在肾小管上皮细胞内,表达蛋白主要分布于胞浆;与对照组比较,糖尿病组大鼠肝脏、骨骼肌和肾脏组织Nampt阳性表达率明显增高(P<0.05或P<0.01);糖尿病组大鼠胰腺组织几乎未见Nampt表达,Nampt阳性表达率明显低于对照组(P<0.01)。结论:Nampt在糖尿病状态下大鼠主要能量代谢器官中的表达发生明显改变,且呈现出规律性变化,提示Nampt可能成为糖尿病发病过程中的一种特异的指示性标志物。
- 冯乔王曼伊王平胡婷婷乔伟梁瑜祯冯乐平
- 关键词：2型糖尿病链脲佐菌素免疫组织化学
