天津师范大学生命科学学院分子细胞系统生物学重点实验室
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所山东大学齐鲁医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人中心体的纯化提取及蛋白质谱分析
- 2014年
- 目的提取人类细胞中的中心体,结合蛋白质谱分析,鉴定中心体蛋白组成。方法采用密度梯度离心方法提取K562细胞内中心体。经蛋白免疫印迹鉴定后,对样品进行蛋白质谱分析检测。对已检测出的中心体蛋白分子,应用基因本体(GO)进行系统分析。结果成功提取纯化了人类细胞的中心体,检测出中心体相关蛋白分子γ-Tubulin集聚在特定密度梯度离心分离的细胞裂解液组分中,该组分中无线粒体蛋白VDAC1和核糖体蛋白RPL15。经蛋白质谱分析,发现中心体蛋白组分包括多种细胞质物质运输蛋白、细胞骨架蛋白、膜结合蛋白、蛋白激酶等蛋白分子,涵盖多种细胞内生物信号途径。结论成功提取人细胞内中心体,可为提取纯化不同生长时期细胞中的中心体奠定实验技术基础,结合蛋白质谱分析有助于理解中心体的基本结构和各种功能。
- 钟铠泽赵健袁首道王庐宇荆艳洁郝彤陈健行詹启敏姜伟朱长军潘丽娜
- 关键词：中心体蛋白组学
- 驱动蛋白Kif4A杆状病毒表达系统的构建与优化被引量：1
- 2018年
- 目的为了探究人驱动蛋白分子Kif4A在有丝分裂过程中的作用及其调节机制,需要在体外表达并纯化有活性的Kif4A蛋白。方法构建了驱动蛋白Kif4A的体外真核表达载体pFastBac-Kif4A,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆,抽提得到杆状病毒基因组。由于杆状病毒基因组较大,标准的转染方法转染效率较低,对该方法进行了优化。将杆状病毒基因组通过标准的和优化的转染方法转染到草地夜蛾卵巢细胞SF9中,经培养得到表达驱动蛋白Kif4A的初代杆状病毒。结果通过检测初代杆状病毒的滴度,我们发现,与标准的转染方法相比,优化的转染方法所得到的初代杆状病毒的滴度更高,相同稀释度感染条件下表达的Kif4A蛋白水平更高。结论本研究成功构建了Kif4A杆状病毒表达系统,并优化了SF9细胞转染的方法,为后续大量表达和纯化Kif4A蛋白奠定了基础。
- 于东渤张红娇苏春玉余斯琦朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白杆状病毒脂质体转染
