遵义医科大学基础医学院生理学教研室
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
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- 氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成
- 2023年
- 目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。
- 姚金玲李廷兵胡静万小榆孔德营
- 关键词：氰戊菊酯
- 补体应答基因32在小鼠部分肝切除后肝再生过程中的表达及意义
- 2023年
- 目的 探讨补体应答基因32(RGC32)在部分肝切除(PH)术后肝再生过程中的表达及作用。方法 42只10周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组[切除小鼠完整的肝脏称重、拍照作为正常对照(sham组),进一步切除肝左叶和肝中叶后称重、拍照作为手术对照(0 d组),sham组和0 d组共用一组小鼠]、术后1天组(1 d)、术后2天组(2 d)、术后4天组(4 d)、术后6天组(6 d)、术后8天组(8 d)和术后10天组(10 d),每组6只;PH术建模成功后分别于术后1、2、4、6、8、10天处死小鼠,收集小鼠肝脏,检测肝脏大小变化。HE和油红O染色评估肝组织形态学变化,血清ALT、AST检测评价肝功能变化,免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67表达并分析肝再生过程中细胞增殖变化,实时荧光定量PCR和免疫组化染色技术检测肝再生过程中RGC32的表达及其亚细胞分布。Ed U细胞增殖实验分析L02细胞过表达或者敲除RGC32对肝细胞增殖的影响。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;两组间比较采用成组t检验。相关性分析采用Pearson相关分析法。结果 PH术后肝脏逐渐增大,第0~6天为肝体比(肝脏质量/体质量)上升的高峰期,不同时间点比较差异均有统计学意义(P值均<0.05);第6~10天肝脏大小变化不明显。PH术后肝脏脂滴显著增多,随着肝再生,脂滴减少,且呈现门静脉区和中央静脉区差异化(P值均<0.05)。与sham组比较,PH术后1天,血清ALT、AST水平明显升高(P值均<0.05),随后分别于术后第6天和术后第2天恢复至sham组水平(P值均>0.05)。免疫组化染色结果显示,PH术后PCNA和Ki67阳性肝实质细胞数迅速增多,第2天数目最多,分别为86±5和89±5,随后逐渐减少;而PCNA和Ki67阳性非实质细胞数逐渐增多,第6天才达到高峰,分别为34±5和25±3,随后逐渐减少。PH术后总RGC32表达在第2天升到最高,随后逐渐降低,细胞质RGC32表达变化趋势与之一
- 李兴元杨艳芳陈琰胡文慧赵小英唐俊明孔德营
- 关键词：肝再生小鼠近交C57BL
- 氰戊菊酯对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其机制被引量：1
- 2023年
- 目的探讨氰戊菊酯(Fen)对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响及其可能机制。方法采用差速贴壁法分离提纯SD大鼠睾丸Leydig细胞。用0、25、50和100μmol/L Fen处理Leydig细胞1、12和24 h,采用ELISA法检测睾酮水平。设置空白对照组(加入0.1%DMSO处理)、Fen暴露组(加入100μmol/L Fen处理)、Fen+NAC组(加入100μmol/L Fen和5 mmol/L NAC处理)、Fen+CsA组(加入100μmol/L Fen和2 mmol/L CsA处理),给药后继续培养24 h。采用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位变化,ELISA法检测睾酮水平及谷胱甘肽(GSH)、cAMP含量,化学发光法检测ATP含量,Western blotting检测超氧化物歧化酶(SOD)、类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)的表达。结果选择100μmol/L Fen处理24 h进行实验。与空白对照组比较,Fen暴露组Leydig细胞睾酮合成水平,GSH、SOD、ATP、cAMP含量,线粒体膜电位,以及StAR、3β-HSD、CYP11A1蛋白相对表达量明显降低(P<0.01),ROS含量明显升高(P<0.01);与Fen暴露组比较,Fen+NAC组、Fen+CsA组Leydig细胞睾酮合成水平,GSH、SOD、ATP、cAMP含量,线粒体膜电位,以及StAR、3β-HSD、CYP11A1蛋白相对表达量明显升高(P<0.05或P<0.01),ROS含量明显降低(P<0.01)。结论Fen可能通过诱导氧化应激引起大鼠睾丸Leydig细胞线粒体损伤,致使ATP和cAMP合成受阻,从而抑制依赖cAMP/PKA信号通路的睾酮合成相关蛋白和酶的表达,最终导致Leydig细胞睾酮合成障碍。
- 陈琰胡文慧李兴元姚金玲孔德营
- 关键词：氰戊菊酯线粒体损伤生殖毒性
- 孕期酒精暴露致DNA甲基化异常对子代小鼠心脏发育相关基因表达的影响被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨DNA甲基化修饰失衡在孕期酒精暴露致子代小鼠心脏发育相关基因表达异常中的作用,为防治孕期饮酒所致的心脏发育畸形提供新思路。方法:选取24只健康昆明孕鼠按照随机数字表法等分为四组:正常组、对照组、酒精组、干预组。从孕期0.5 d^16.5 d,酒精组每日给予56%酒精(5 ml/kg)灌胃1次,干预组在上述酒精灌胃基础上给予每日1次腹腔注射DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(2.5 mg/kg),对照组给予等量生理盐水灌胃和等量二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射,正常组未予任何处理。于胎龄16.5 d收集各组子代小鼠心脏进行以下检测:(1)比色法检测DNMT活性;(2)甲基化测序检测心脏核心转录因子心肌细胞增强因子2A(MEF2A)启动子区CpG岛DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测MEF2A转录水平;(3)染色质免疫共沉淀(ChIP)检测MEF2A对心脏结构基因心房利钠肽(ANP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的调控作用;(4)蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心脏结构基因ANP、β-MHC及cTnT的蛋白表达水平。结果:(1)比色法结果显示,酒精组及干预组胎鼠心肌组织中DNMT活性较对照组和正常组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)心脏核心转录因子MEF2A启动子区CpG岛DNA甲基化水平在酒精组及干预组较对照组和正常组均显著降低(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR结果显示,心脏核心转录因子MEF2A转录水平在酒精组及干预组较对照组和正常组显著升高(P<0.05);(4)ChIP结果表明,心脏核心转录因子MEF2A可结合心脏结构基因ANP、β-MHC及cTnT启动子区域直接参与上述基因的表达调控;(5)Western blot结果表明,酒精组和干预组小鼠心肌组织中ANP、β-MHC及cTnT的蛋白表达水平较对照组和正常组显著升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:酒精介导的DNA低甲基化可能参与了孕期酒精暴露所致的子代心脏发育相关基因表达异常。
- 罗孝美韩笑彭昌邓玲黄丽欣
- 关键词：DNA甲基化胎鼠酒精
- 鞘内注射ZD7288对糖尿病大鼠周围神经痛及血糖的作用被引量：2
- 2019年
- 目的观察鞘内注射超极化激活环核苷酸门控通道(HCN通道)拮抗剂ZD7288对STZ诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠的热痛阈及血糖的影响,探讨背根节HCN通道在糖尿病周围神经痛(DPN)中的作用。方法4~5周龄雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、STZ组(鞘内给予生理盐水)和ZD7288+STZ组(鞘内给予ZD7288)。单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型,分别于注射STZ前1d及注射后7、14、21、28d测定空腹血糖、热缩足反射潜伏期(TWL),免疫印迹技术检测背根节HCN1,2通道的表达。结果与对照组相比,大鼠腹腔注射STZ 2周后空腹血糖显著升高,TWL降低,背根节HCN1,2通道表达显著增高(P<0.01);鞘内给予ZD7288可显著延长糖尿病大鼠TWL,降低背根节HCN1,2表达(P<0.01),但对空腹血糖无显著影响。结论背根节HCN通道表达增加可能促进了糖尿病周围神经痛的发生,鞘内给予HCN通道拮抗剂具有良好的镇痛效应,但对血糖无明显改善作用。
- 余德芊马彦巧雷晓露刘晓红
- 关键词：背根神经节糖尿病神经痛
- 雌激素及其受体ERβ在氰戊菊酯所致雄性大鼠生殖毒性中的作用被引量：3
- 2021年
- 为探讨雌激素及其受体ERβ在氰戊菊酯(Fen)致雄性SD大鼠生殖毒性中的作用,采用SD大鼠将其随机分为对照组(Fen 0 mg/kg)、低剂量Fen染毒组(20 mg/kg)、高剂量Fen染毒组(40 mg/kg),每组8只,染毒组以玉米油溶解配制成不同浓度的Fen溶液等体积灌胃,对照组给予等量玉米油,每日灌胃1次,连续染毒30 d后,采用常规方法检测精子数量、精子活力及畸形率,ELISA测定雄鼠血清和睾丸中雌二醇(E2)的水平,Real-time PCR和Western Bolt检测芳香化酶(CYP19A1),ERβ,Bax,Bcl-2,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平,TUNEL法检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡情况,HE染色法观察睾丸病理结构.结果显示:Fen染毒30 d后,与对照组相比,在40 mg/kg组精子数量、a级精子活力及精子活动率均显著降低,精子畸形率显著增加(p<0.05);血清和睾丸E2水平均显著升高(p<0.05,p<0.01);CYP19A1 mRNA和蛋白表达水平在20 mg/kg和40 mg/kg组显著增加(p<0.05或p<0.01),ERβmRNA和蛋白表达水平在40 mg/kg组均显著增加(p<0.01);大鼠睾丸Bax,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平在40 mg/kg组均显著增加(p<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平在40 mg/kg组均显著降低(p<0.01);TUNEL结果显示:大鼠睾丸生殖细胞凋亡增加且在40 mg/kg组差异有统计学意义(p<0.01);睾丸病理结构发现,染毒组大鼠睾丸曲细精管生精细胞数量减少或缺失,管腔内精子减少,部分曲细精管生精细胞排列紊乱.以上结果表明,Fen可能通过上调雄性SD大鼠睾丸CYP19A1的表达,增加雄鼠睾丸E2的水平,同时,上调雄鼠睾丸ERβ的表达,过度增强雌激素-ERβ信号作用,促进生精细胞的凋亡,引起精子发生异常.
- 郭茂陈琰李兴元孔德营
- 关键词：氰戊菊酯雌激素雌激素受体生殖毒性
- 鼠精原干细胞分离鉴定方法的应用及体外培养体系研究进展被引量：2
- 2021年
- 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是精子发生的基础。SSCs的数量减少或功能缺陷会导致雄性生殖障碍。鼠SSCs的分离主要采用两步法,通过机械分离和酶消化睾丸组织后,采用差速贴壁法、密度梯度法、免疫磁珠分选法或流式细胞分选法等纯化SSCs。SSCs的鉴定主要是以胶质细胞源性神经营养因子家族受体α1、死盒解旋酶4、锌指和BTB结构域包含16等特异性标志物为基础,结合荧光定量PCR法和免疫组织化学法完成。SSCs的体外培养体系中基础培养基和适宜的温度是培养的必要条件,常用的SSCs培养基主要有DMEM、MEM以及SFM等,StemPro-34SFM适用于培养大鼠SSCs。32~37℃适合小鼠SSCs的体外培养,而34℃更有利于提高SSCs的增殖及维持其细胞活性。饲养层细胞可更好地延长SSCs的体外培养时长。在体外培养体系中加入血清及生长因子有助于促进SSCs的增殖。
- 陈琰李兴元胡文慧姚金玲孔德营
- 关键词：精原干细胞干细胞分离干细胞体外培养
- 中药大黄有效成分大黄酸的抗肿瘤作用研究进展被引量：7
- 2020年
- 大黄为临床常用中药,药用历史悠久,功效独特。在历代中药本草典籍中均有记载,始载于《神农本草经》。其来源为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎[1]。大黄的主要有效成分是大黄蒽醌类物质,包含大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等成分[2-4]。
- 余德芊刘晓红
- 关键词：大黄酸肿瘤
- 20-HETE通过GPR75受体偶联G_(αq)信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的作用
- 2024年
- 目的 探讨GPR75受体偶联G_(αq)信号通路在20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用与机制。方法 H9c2心肌细胞采用慢病毒载体干扰GPR75表达,敲减效率通过RT-qPCR和Western blot法检测;ELISA法检测IP_(3)及cAMP含量;TUNEL法评估细胞凋亡率;分别使用Fluo-4/AM、DHE和JC-1荧光探针检测细胞内Ca^(2+)浓度、ROS含量以及线粒体膜电位(ΔΨm)水平;Western blot检测EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β、Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果 慢病毒载体shGPR75转染后,H9c2心肌细胞GPR75受体mRNA和蛋白表达分别降低67.16%和63.99%(P<0.05)。敲减GPR75表达或应用AAA阻断其作用,显著抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05),并可逆转ΔΨm下降及凋亡相关蛋白Bax、Cyt C、Caspase-3蛋白表达增高(P<0.05)。20-HETE处理后细胞内IP_(3)含量明显增加(P<0.05),但对cAMP生成无显著影响(P>0.05),而敲减GPR75表达、应用AAA或者PLC信号通路阻断剂U73122预处理后,可显著阻断细胞内IP_(3)生成(P<0.05)。敲减GPR75表达、应用AAA或者U73122预处理后,明显抑制20-HETE诱导的Ca^(2+)浓度升高和ROS生成效应(P<0.05)。20-HETE处理后,GPR75受体下游调控关键蛋白EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β磷酸化水平明显升高(P<0.05),敲减GPR75表达或应用AAA可有效阻断20-HETE上述效应(P<0.05)。最后,阻断PLC或PI3K信号通路,显著抑制20-HETE诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05)。结论 20-HETE通过GPR75受体偶联的G_(αq)蛋白及其介导的PLC、EGFR/ERK1/2/AKT/GSK3β信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡。
- 刘恋恋吉雨恬刘娇莉韩婧怡李开远张淳韩勇
- 关键词：心肌细胞凋亡
