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环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响被引量：1: 2022年; 目的:探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)、迁移、细胞周期和自噬的影响。方法:取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度(0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^(-1))雷帕霉素组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。结果:PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05);与GES-1细胞比较,MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高(P<0.05)。与空白组比较,0.25和0.50 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L^(-1)雷帕霉素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01)。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值�; 刘云朱琳琦邵世和; 关键词：上皮间质转化细胞周期自噬

滤泡调节性T细胞在肺癌移植瘤小鼠体内的变化及意义被引量：1: 2016年; 目的:研究滤泡调节性T细胞(follicular regulatory T cells,Tfr)在肺癌移植瘤小鼠体内的变化,并探讨肿瘤微环境对Tfr细胞的影响。方法:采用皮下注射Lewis肺癌细胞株的方式建立肺癌移植瘤小鼠模型,通过流式细胞术检测小鼠腹壁引流淋巴结和肿瘤组织中Tfr细胞以及CD4+CXCR5+T细胞的比例,分析Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的变化。结果:肺癌移植瘤小鼠腹壁引流淋巴结中Tfr细胞的比例为(4.13±0.35)%,较正常对照组小鼠[(1.97±0.26)%]明显增加(t=4.985,P<0.01),并且Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值为0.39±0.03,较正常对照组小鼠(0.21±0.02)明显增加(t=5.148,P<0.01)。在肿瘤发展的第14天,肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中Tfr细胞比例增加尤为显著,与第7天相比差异具有统计学意义(t=5.617,P<0.01)。结论:肺癌移植瘤小鼠体内Tfr细胞比例的增加以及Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的失衡,预示着Tfr细胞可能参与小鼠肺癌移植瘤的发展进程。; 冯玎琦汤新逸张悦马洁田洁许化溪王胜军; 关键词：肺癌移植瘤

人TSHR289基因重组腺病毒的制备与鉴定: 2016年; 目的:制备腺病毒AdE-GFP-hTSHR289,并进行鉴定。方法:限制性内切酶NotⅠ和XhoⅠ双酶切分别处理p BluescriptⅡSK(+)-h TSHR289和pAdTrack-CMV,回收纯化目的片段hTSHR289,将其插入至线性化的pAdTrackCMV大片段中;限制性内切酶PmeⅠ线性化pAdTrack-hTSHR289与大肠埃希菌BJ5183中pAdEasy-1质粒同源重组,限制性内切酶PacⅠ酶切验证;将阳性重组质粒转染至人胚肾293A细胞,以包装获得表达hTSHR289的腺病毒AdEGFP-hTSHR289;TCID50法检测重组腺病毒滴度。结果:成功地将hTSHR289重组至腺病毒载体,获得携带hTSHR289重组腺病毒载体,包装出携带hTSHR289基因的腺病毒,滴度达3.5×109pfu/m L。结论:制备得到携带h TSHR289的重组腺病毒。; 周军马洁汤新逸田洁许化溪王胜军; 关键词：促甲状腺激素受体腺病毒病毒滴度

过敏性鼻炎患者外周血CD4^+T细胞表面信号淋巴细胞激活分子的表达被引量：4: 2015年; 目的:探讨信号淋巴细胞激活分子(signaling lymphocytic activation molecule,SLAM)在过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面的表达及意义。方法:选择18例过敏性鼻炎患者和16例健康体检者,淋巴细胞分离液分离提取外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4+T细胞表面SLAM的表达;同时,采用ELISA法检测血浆中Ig E的表达;分析CD4+T细胞表面SLAM表达与血浆中Ig E表达的相关性。结果:过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM的表达水平明显低于健康体检者(t=2.29,P<0.05),而Ig E水平明显高于健康体检者(t=2.740,P<0.01);过敏性鼻炎患者血浆中Ig E的表达与CD4+T表面SLAM的表达呈负相关(r=-0.484 8,P<0.05)。结论:过敏性鼻炎患者外周血CD4+T细胞表面SLAM表达降低,在一定程度上可反映疾病的严重程度。; 杨珺耿丽娜彭辉勇马永明许化溪王胜军; 关键词：过敏性鼻炎 CD4+T细胞

鲍曼不动杆菌分子特征及其在替加环素压力下外排泵表达的变化被引量：3: 2020年; 目的鲍曼不动杆菌是医院内感染常见的细菌。文中旨在分析其分子流行特征,检测外排泵和调节蛋白基因的携带率,并研究替加环素对外排泵和调节蛋白基因表达的影响。方法选取2017年5月至2019年3月江苏大学附属医院住院患者183株鲍曼不动杆菌。分为耐药组(一类及以上抗菌药物耐药的菌株,139株),敏感组(药敏试验中的药物均为非耐药的菌株,44株)。应用重复序列PCR作菌株的同源性分析,并以脉冲场凝胶电泳(PFGE)为同源性分析的金标准对部分菌株进行验证和比较。PCR检测耐药相关基因。依据同源性分析、外排泵携带率检测及药敏试验结果,选取6株外排泵基因全携带但耐药表型不同的临床菌株作为实验株,包括敏感株(SAB)、多药耐药株(MDRAB)、广泛耐药株(XDRAB),进行替加环素体外诱导,诱导后的菌株为诱导组,以不含替加环素LB培养的相同菌株为对照组。检测AdeB、TetB等外排泵基因及AdeS、BaeS等调节蛋白的基因表达变化。结果同源性分析显示,183株临床分离株包含有45个克隆群。耐药组AdeB、TetB基因(97.84%、98.56%)检出率均高于敏感组(63.64%、20.45%),CraA、AbeM等基因亦高于敏感组(P<0.05)。替加环素诱导前MDRAB、XDRAB中AdeB(4.17±0.94、6.86±3.23)、TetB(13.06±0.38、13.96±0.63)表达较SAB(0.00±3.70、0.00±0.70)升高(P<0.05),MDRAB菌株中MacB、BaeS表达较SAB菌株亦升高(P<0.05)。MDRAB、XDRAB菌株中AbaQ表达较SAB菌株降低(P<0.05)。诱导组AdeB、TetB在各菌株的表达较对照组明显升高(P<0.01);除SAB1菌株外,AbaQ、AbeM在其余菌株中的表达较对照组明显升高(P<0.05);AdeS在SAB1、SAB2、MDRAB1、XDRAB2菌株中的表达较对照组升高(P<0.05);负调节蛋白SoxR在SAB1、XDRAB1菌株中表达较对照组降低(P<0.05)。结论AdeB、TetB、AbeS、AdeS、BaeS在临床鲍曼不动杆菌多药耐药过程中发挥着重要的作用,其中AdeB和TetB在菌株对替加环素耐药过程�; 程建军Kesavan Dinesh Kumar阴晴王慧璇蔡伟陈建国苏兆亮许化溪; 关键词：鲍曼不动杆菌外排泵基因同源性分析脉冲场凝胶电泳替加环素

荷瘤小鼠MDSCs中TRIM25和PTEN的表达: 2019年; 目的:探讨荷瘤小鼠肿瘤组织来源的髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSCs)中三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)的表达水平及其意义。方法:构建小鼠CT26结肠癌移植瘤模型,采用实时荧光定量PCR(real time fluorescene quantitative PCR,qRT-PCR)技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs和野生型小鼠脾脏来源MDSCs中TRIM25、PTEN的表达情况。结果:在小鼠CT26结肠癌移植瘤模型中,与野生型小鼠脾脏来源的MDSCs相比,荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25表达水平明显升高(P <0. 001),PTEN表达水平显著下降(P <0. 001)。结论:荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25的表达升高,PTEN表达下降,提示两者或许参与调控MDSCs。; 宋格赵耀陆薇王胜军; 关键词：荷瘤小鼠 PTEN 肿瘤微环境肿瘤免疫

GITRL基因SNP-rs2236876分型方法的比较: 2015年; 目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,PCR-RFLP)法和直接测序法对GITRL SNPrs2236876A/G进行分型并比较。结果:PCR-RLFP法分型结果直接通过电泳图可见,适合少量的实验对象;TaqmanMGB探针法通过不同的荧光区分不同的基因型,适合大量的实验对象;直接测序法交由测序公司测定,样本数量浮动范围较大,费用较高。结论:Taqman-MGB探针法适用于GITRL基因rs2236876A/G基因分型,PCR-RFLP法适用于基因分型结果的验证,直接测序法适用于鉴定有争议的PCR-RFLP法的验证结果。; 吴晶晶仝佳陈娟袁靖田洁汤新逸王胜军; 关键词：TAQMAN-MGB探针 PCR-RFLP

丁酸对小鼠骨髓源树突状细胞的免疫调节作用被引量：2: 2015年; 目的:观察肠道细菌代谢产物丁酸对体外培养小鼠骨髓源树突状细胞(Bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)表型及功能的影响,并探讨其可能的机制。方法:利用丁酸盐对GM-CSF和IL-4体外诱导的BMDCs细胞进行处理,采用流式细胞术检测BMDCs细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC的表达及其对T细胞增殖的影响;用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测其细胞因子IL-6、IL-12的表达;用格里斯反应(Griess reaction)和免疫印迹法(Western blot)分别检测DC细胞产生NO2-的生成和Toll样受体-4(TLR4)信号通路中ERK分子的磷酸化。结果:丁酸可下调LPS诱导的成熟BMDCs细胞CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC分子的表达。同时,丁酸也可抑制IL-6和IL-12的分泌,并抑制树突状细胞对OVA257-264抗原特异性T细胞的增殖。进一步的Western blot检测结果显示丁酸可抑制DC细胞TLR4信号通路中ERK分子的磷酸化。结论:丁酸可通过抑制DC细胞TLR4信号通路中ERK分子的磷酸化,下调DC细胞的免疫功能。; 强叶涛吴水芸韩慕天程璐金慧敏严成李翀刘霞张苗苗邵启祥夏圣; 关键词：丁酸盐树突状细胞共刺激分子 CD8+T细胞

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