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中山大学中山医学院人类病毒学研究所: 作品数：22 被引量：20H指数：3; 相关作者：陈辉杨丽霞柏川潘婷魏美丽更多>>; 相关机构：山东大学齐鲁医院广州医科大学药学院复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>

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GDF11在体外扩增CD8^+记忆干性T细胞的作用被引量：2: 2016年; 目的:探讨生长分化因子11(GDF11)在体外诱导扩增具有干细胞特性的记忆性T细胞(memory stem T cells,Tscm)中的作用,从而进一步提高免疫过继治疗的疗效。方法:通过密度梯度离心的方法分离健康人的外周血单个核细胞,然后用磁珠分选获得CD8^+T细胞;随后将所得的细胞分为实验组和对照组,实验组中加入等体积、不同浓度的GDF11,对照组中加入等体积的PBS缓冲液,最后分别在不同时点通过流式细胞术检测2组细胞中Tscm的扩增情况。结果:在CD8^+T细胞的体外扩增实验中,GDF11可以显著扩增CD8^+T细胞;在CD8^+T细胞的体外培养实验中,GDF11可以显著提高Tscm在CD8^+T细胞中的比例。结论:GDF11可以有效地在体外扩增CD8^+Tscm,为提高免疫过继治疗的效率提供了新的方法。; 马星如陈颖诗林颖彤张旭罗海华刘超潘婷; 关键词：过继免疫治疗

不同EB病毒感染状态血液中炎症因子表达水平和分泌情况分析被引量：1: 2020年; 目的探索EB病毒潜伏感染和活动性感染的患者体内炎症反应情况,阐明EB病毒感染状态与机体免疫炎症反应的关系。方法EB病毒阳性的p3HR-1细胞系用TPA/NaB诱导不同时间(0、6、12、24、36、48 h)使其进入裂解复制,另外收集69例健康志愿者血浆和外周血单个核细胞,通过实时荧光定量PCR以及酶联免疫吸附实验(ELISA),比较白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌情况以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况。结果细胞水平实验结果显示IL-1β的分泌以及TNF-α的表达随诱导时间的增加而增加。69例健康志愿者中,有34例呈EB病毒阳性,阳性率为49.28%;其中潜伏感染者21例(30.43%),活动性感染者13例(18.84%)。相比于未感染者[(10.34±1.16)pg/mL、(7.62±4.20)],潜伏感染者血浆中IL-1β的分泌(11.50±1.24)pg/mL以及TNF-α的表达量(4.35±2.51)无明显变化,但活动性感染者血浆中IL-1β的分泌(32.59±13.07)pg/mL以及TNF-α的表达量(412.40±261.10)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EB病毒潜伏感染者体内炎症反应并未被激活,只有在活动性感染患者体内病毒进行裂解复制炎症因子的表达和分泌才会被大量激活。; 杨婧徐雪况二胜; 关键词：EB病毒炎症因子

单泛素化修饰的被膜蛋白ORF45以脂筏为平台介导卡波氏肉瘤相关病毒（KSHV）的组装释放: ＜正＞目的:卡波氏肉瘤相关病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus, KSHV）属于γ型疱疹病毒,是目前所知的七种人类致瘤病毒之一。KSHV感染可导致卡波氏肉瘤和初级融合淋巴结...; 王鑫张义袁岩; 文献传递

紫外交联合并串联亲和纯化高效鉴定蛋白复合物组分的RNA结合活性: 2014年; RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linkingand tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础.; 岳莎周淑如郭学敏; 关键词：串联亲和纯化 RNA结合蛋白布氏锥虫

基于分泌型荧光素酶亚细胞定位炎症小体活性报告系统的构建: 2014年; 目的构建快捷、灵敏的亚细胞定位炎症小体活性报告系统,探讨各细胞器在炎症小体激活过程中的作用。方法构建线粒体定位蛋白TOM20或内质网定位蛋白EMC3与白细胞介素-1β前体-分泌型荧光素酶的融合蛋白表达质粒,免疫印迹确认表达和免疫荧光染色确认亚细胞定位后,在Caspase-1和不同炎症反应刺激条件下,应用该报告系统检测炎症小体的活化情况。结果建立的炎症小体报告系统分别定位于线粒体和内质网,可快速检测线粒体和内质网相关的炎症小体活性。结论细胞器定位炎症小体活性荧光素酶报告系统能简便、快速地检测不同细胞器特异的炎症小体活性,可应用于无损伤的连续观察、动物活体研究和高通量药物筛选。; 李宇清黄璐杨梦甜况二胜; 关键词：细胞器

LEF1增强Trop2启动子转录活性: 2014年; 目的探究Wnt信号通路相关蛋白LEF1、TCF1、野生型β—catenin和激活型β—catenin对肿瘤相关钙信号转导因子Trop2启动子转录活性的调控作用，找出调控Trop2转录活性的转录因子并分析其可能的分子机制。方法通过生物信息学方法预测Trop2启动子上潜在的转录因子，构建小鼠Trop2启动子报告质粒，在293T细胞中，采用荧光素酶双报告系统分析LEF1、TCF1、野生型β-catenin和激活型β—catenin对Trop2启动子的调控作用。找出Trop2启动子上的TCF／LEF结合位点，通过定点突变的方法构建Trop2启动子TCF／LEF结合位点突变体，探究Trop2启动子转录活性调控可能的分子机制。结果经预测，Trop2启动子上存在LEF1、TCF1等众多的潜在转录因子结合位点。荧光素酶双报告实验证明。在293T细胞中。与空载体相比，LEF1、TCF1都不同程度地增强Trop2启动子转录活性。其中LEF1对Trop2启动子转录活性的增强作用最为明显，达108倍。突变Trop2启动子上的TCF／LEF结合位点可以明显降低LEF1对Trop2启动子的转录活性。结论在293T细胞中，LEF1可以极大地增强Trop2启动子的转录活性。LEF1上调Trop2启动子转录活性是通过结合到Trop2启动子上的两个TCF／LEF结合位点而发挥作用的。; 漆彦斌刘叙翔杨丽霞黄朝峰; 关键词：启动子转录激活

抑制RORγt活性及Th17分化的新型化合物研究被引量：1: 2015年; 目的我们在实验中偶然发现了一种能抑制RORγt活性的新型化合物,拟通过鉴定该化合物对Th17体外分化及其细胞因子分泌的影响对其进行生物学评价,以确定该化合物是否可作为一种新型的自身免疫病候选药物。方法构建能在Jurkat细胞中稳定表达Gal4-RORγt的荧光素酶报告系统,通过该体系发现了一种对RORγt有显著抑制活性的新型化合物,并在小鼠Th17细胞分化实验中对该化合物的作用效果进行体外验证。在此基础上,对该化合物进行生物功能分析,包括EC50、CC50的测定以及T细胞特异性分析。结果通过体外验证实验,我们确定该化合物(编号为compound 2)能显著的抑制Th17分化及其细胞因子IL-17A、IL-17F的表达和分泌。在后续的生物学评价中,我们还发现该化合物对RORγt有较高的抑制效率,较低的细胞毒性和较强的T细胞特异性。结论本研究中得到的化合物compound 2可作为一种潜在的新型前导化合物应用于治疗自身免疫性疾病和一些炎症性疾病。; 丁庆峰赵梅黄朝峰; 关键词：RORΓT 自身免疫病

以HA2为基础的流感病毒候选疫苗同时与H5N1、H1N1和H3N2亚型毒株产生交叉反应被引量：1: 2014年; 【目的】探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答。【方法】我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004(H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30)和一个连在碳端的三聚体基序(foldon,Fd)组成。原核表达该蛋白,圆二色谱和Western Blot验证IR-30-Fd的室间结构之后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,并同时免疫IR30多肽为对照,制备血清抗体。然后应用ELISA和Western Blot方法检测抗体的滴度,应用细胞ELISA和Western Blot方法检测抗体与不同的IAV菌株HA2蛋白的交叉反应性。【结果】IR30-Fd能够形成具有α螺旋的三聚体空间结构。用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔后获得了高效价的抗IR30的特异性抗体。鼠抗IR30-Fd抗体能与H3N2和H1N1的HA蛋白反应而鼠抗IR30抗体不能。鼠抗IR30-Fd抗体稀释6 400倍、兔抗IR30-Fd抗体稀释8.2×105倍均可以与H5N1的HA蛋白反应。细胞ELISA表明兔抗IR30-Fd抗体与天然状态下的H5N1和H3N2的HA蛋白的结合亲和力高于兔抗IR30抗体。【结论】本研究结果表明IR30-Fd蛋白能够模拟H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚体结构,并且能够诱导产生针对H5N1 H1N1和H3N2亚型HA蛋白的广谱交叉反应抗体,为研制通用的流感病毒疫苗提供了结构基础。; 魏美丽陈燕霞王宇徐俊熊为亮姜世勃潘春根; 关键词：甲型流感病毒三聚体

布氏锥虫未知CCCH-型锌指蛋白TbZC3H8功能特性的初步分析: 2013年; 目的通过RNAi和蛋白复合物鉴定来初步分析布氏锥虫未知锌指蛋白TbZC3H8的特性及功能。方法运用蛋白数据库和分析软件对TbZC3H8进行序列分析和结构域预测;构建RNAi诱导表达细胞株分析TbZC3H8经RNAi敲低后对锥虫生长的影响,并通过RT-QPCR和Western blot检测RNAi干扰效率;构建异位融合表达myc-TAP标签的TbZC3H8细胞株,采用串联亲和纯化合并质谱鉴定其蛋白复合物组成;采用免疫荧光分析蛋白定位。结果 TbZC3H8的CCCH结构域在动基体原虫中高度保守;RNAi下调TbZC3H8后明显抑制了锥虫复制;TbZC3H8蛋白复合物中包含多种未知蛋白和两种RNA结合蛋白;TbZC3H8蛋白定位于胞质中,血清饥饿和热刺激对其定位无影响。结论 TbZC3H8是锥虫生长必需的,TbC3H8与RNA结合蛋白的相互作用暗示其可能在RNA加工代谢中发挥着作用。; 雷霁卿刘罗根郭学敏; 关键词：布氏锥虫 RNAI 串联亲和纯化

Nrf2基因缺陷增强烟雾浓缩物对小鼠的免疫刺激反应—Nrf2基因缺陷影响着小鼠的免疫应激反应: 2017年; 目的:分析烟雾浓缩物刺激下的Nrf2基因缺陷的小鼠脾脏淋巴细胞亚群百分比和腹腔巨噬细胞炎症因子变化,初步探讨Nrf2基因缺陷对烟雾浓缩物刺激下小鼠免疫反应的影响。方法:36只雌性C57BL/6 WT和Nrf2-/-小鼠随机分别分为两组;其中两组WT和Nrf2-/-小鼠连续饮用含DMSO溶解烟雾浓缩物的纯净水4个月;另两组小鼠饮用含等比DMSO的纯净水4个月。取小鼠脾脏,拍照,坏死评分;制备单细胞悬液,进行计数;采用流式细胞术分析脾脏淋巴细胞各亚群的变化。同时提取小鼠腹腔巨噬细胞,检测分析相关细胞因子的表达。结果:Nrf2基因缺陷促使了烟雾浓缩物刺激下小鼠脾脏肿大,并伴有坏死,降低了其脾脏总细胞数;增高了烟雾浓缩物刺激下小鼠调节免疫相关的脾脏T淋巴细胞和CD8淋巴细胞的百分比,同时能够降低B淋巴细胞;降低了CD4和CD8中央型记忆T细胞(TCM)或效应性记忆T细胞(TEM)的百分比,增加了效应T细胞(TE);增强了多数炎症性细胞因子、集落刺激因子和趋化因子在小鼠腹腔巨噬细胞中的表达。结论:Nrf2缺陷增强了烟雾浓缩物激活的小鼠天然免疫和适应性免疫的应答。; 徐小解丁燕超黄朝峰

中山大学中山医学院人类病毒学研究所

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