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- 作品数：16 被引量：15H指数：4
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- 过表达DLL3促进人胃癌细胞的增殖被引量：4
- 2018年
- 目的构建人全长DLL3的真核表达质粒,并分析上调和下调DLL3对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增人全长DLL3基因并克隆至真核表达载体pCMV-Tag4中,通过酶切及测序鉴定后,瞬时转染HEK293T细胞,并以转染pCMV-Tag4质粒和无转染HEK293T细胞分别为阴性对照和空白对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot鉴定人全长DLL3基因的表达;进一步通过qRT-PCR和Western blot检测人DLL3在人正常口腔上皮细胞GES-1和AGS等3株胃癌细胞中的表达差异;当人DLL3/pCMV-Tag4瞬时转染3株胃癌细胞后,利用MTT检测DLL3过表达后胃癌细胞的增殖;同时,特异性人DLL3si RNA转染人胃癌细胞MGC803和MKN45,利用MTT检测DLL3下调后胃癌细胞的增殖。结果成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4重组质粒,转染HEK293T细胞24 h后,qRT-PCR和Western blot表明DLL3在m RNA和蛋白水平上的表达显著高于对照组;MTT细胞增殖实验显示:过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖,下调DLL3后抑制胃癌细胞的增殖。结论成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4真核表达质粒并在HEK293T细胞中获得表达,过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖,下调DLL3抑制胃癌细胞的增殖,本研究为以DLL3为新靶点对胃癌进行靶向治疗提供新思路。
- 胡冰心叶健斌邱晓媚林彦青吴丹琳温俊杰罗美群宁立军李妍宁云山
- 关键词：真核表达胃癌细胞增殖
- 一种人NOTCH1 NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种人NOTCH1？NICD蛋白Ser2162位点磷酸化抗体及其制备方法。该制备方法包括以下步骤：(1)合成包含如SEQ？ID？NO：1所示的氨基酸序列的抗原合成肽；(2)利用步骤(1)合成的抗原合成肽免疫动物...
- 宁云山邱晓媚李妍
- ACGs的新应用
- 本发明公开了ACGs的新应用。研究发现，ACGs抑制GC细胞增殖，促进细胞凋亡，阻滞细胞周期停留在G0‑G1期，随着ACGs浓度升高对GC的增殖抑制，促进凋亡和阻滞细胞周期停留在G0‑G1期效果越明显，这说明ACGs对G...
- 李妍宁云山
- 文献传递
- 一种新的人NOTCH1 NICD蛋白抗原、抗体及其制备方法和应用
- 本发明涉及了一种特异性针对人NOTCH1 NICD蛋白Tyr2145位点磷酸化抗原肽、抗体、上述抗原肽和抗体的应用以及上述抗体的制备方法。所述抗体是通过活性氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，且其中的Tyr氨基酸被磷...
- 宁云山邱晓媚李妍薛杨
- 文献传递
- 人Notch受体胞内区基因N2ICD克隆及真核表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建真核重组质粒N2ICD/p CMV-Tag4并转染HEK 293T细胞进行表达。方法根据GenBank上Notch2的NICD序列设计引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从人宫颈癌细胞Hela细胞扩增人Notch2受体胞内区基因(N2ICD),酶切和测序鉴定后克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4并进行瞬时和稳定转染HEK 293T细胞,荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白印迹(WB)检测目的蛋白的表达。结果通过RT-PCR克隆获得人N2ICD基因并成功构建重组质粒N2ICD/pCMV-Tag4,目的蛋白N2ICD在HEK 293T细胞中获得表达。结论成功构建稳定表达N2ICD的HEK 293T细胞株,为进一步探讨Notch2受体的功能奠定基础。
- 陈中标叶健斌梁来妹杨宜宁立军宁云山李妍
- 关键词：真核表达
- 一种人NOTCH1 NICD蛋白抗原、抗体及其制备方法和应用
- 本发明涉及了一种特异性针对人NOTCH1 NICD蛋白Thr1861位点磷酸化抗原肽、抗体、上述抗原肽和抗体的应用以及上述抗体的制备方法。所述抗体是通过活性氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，且其中的Thr氨基酸被磷...
- 宁云山邱晓媚李妍薛杨
- 文献传递
- 人Notch配体DLL4基因的克隆及真核表达被引量：4
- 2015年
- [目的]构建真核重组质粒DLL4/pCMV-Tag4并进行瞬时表达,为进一步研究DLL4/Notch信号通路奠定基础。[方法]采用PCR的方法扩增人DLL4基因,并克隆于真核表达载体pCMV-Tag4中,通过酶切和测序鉴定后,瞬时转染HEK293 T细胞,荧光定量PCR和Western blot鉴定人DLL4的表达。[结果]成功构建了DLL4/p CMV-Tag4重组质粒并在HEK293T细胞中表达。[结论]人DLL4在HEK293T细胞中表达,为进一步研究DLL4/Notch信号通路奠定基础。
- 叶建斌梁来妹陈中标杨宜宁立军李妍宁云山
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达DLL4
- 慢病毒介导N2ICD过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株的构建及鉴定
- 2018年
- [目的]构建慢病毒介导Notch2受体胞内段((Notch2 intracellular domain,N2ICD)过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株并进行鉴定。[方法]采用PCR法扩增N2ICD基因并克隆至慢病毒载体PTYE-EF1α-IRES-EGFP(简写为pLV)中,通过酶切及测序鉴定后,三质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,收集且浓缩病毒毒液用于感染人胃癌MKN45细胞并筛选稳定细胞株,用Western Blot验证。[结果]成功构建慢病毒重组质粒N2ICD/pLV;包装病毒后,荧光显微镜下观察到大部分HEK293T细胞发出绿色荧光;收集病毒毒液感染MKN45细胞,显微镜下观察有部分细胞表达绿色荧光蛋白;流式分选技术筛选得到稳定细胞株,Western Blot鉴定结果显示:相比于空白对照组,稳定株的N2ICD过表达明显。[结论]成功构建慢病毒表达质粒N2ICD/pLV,并建立稳定过表达N2ICD的胃癌细胞株N2ICD/pLV-MKN45。
- 吴丹琳温俊杰叶健斌薛杨林彦青胡冰心罗美群陈中标谢金玲宁立军宁云山李妍
- 关键词：NOTCH2慢病毒
- 人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达被引量：3
- 2015年
- [目的]克隆人Notch信号通路中配体Jagged1基因并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获取Jagged1基因,并克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4。经酶切、PCR和测序鉴定后,将重组质粒Jagged1-pCMV-Tag4瞬时转染HEK 293T细胞,通过Q-PCR和Western blot检测目的蛋白的表达。[结果]成功构建了真核表达质粒Jagged1-pCMV-Tag4并在HEK 293T细胞中瞬时表达。[结论]Jagged1在HEK 293T细胞中实现瞬时表达,为稳定表达和进一步研究Jagged1/Notch信号通路奠定基础。
- 叶健斌陈中标梁来妹杨宜宁立军宁云山李妍
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达JAGGED1
- 人DLL1真核表达质粒的构建及过表达DLL1抑制人口腔鳞癌细胞SCC15的增殖被引量：4
- 2017年
- 目的:构建人全长DLL1基因真核表达质粒及过表达DLL1对人口腔鳞癌细胞增殖的影响.方法:PCR扩增人全长DLL1基因,酶切和测序鉴定后克隆至真核表达载体pCMV-Tag4并构建真核重组质粒DLL1/pC MVTag4,瞬时转染HEK293T细胞并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鉴定DLL1的表达;进一步检测DLL1在SCC15等3株人口腔鳞癌细胞中的表达;DLL1/pCMV-Tag4瞬时转染SCC15细胞,Q-PCR和Western blot检测过表达及MTT检测DLL1过表达对细胞SCC15增殖的影响.结果:真核重组质粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T细胞中成功表达;DLL1在口腔鳞癌细胞中的表达高于正常口腔细胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15细胞中获得表达且过表达DLL1抑制SCC15细胞的增殖.结论:人全长DLL1分子在HEK293T及SCC15细胞中获得表达,过表达DLL1抑制口腔鳞癌细胞SCC15的增殖.
- 粟芃芃叶健斌邱晓媚胡冰心李妍宁云山
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达
