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河北省检验检疫科学技术研究院: 作品数：23 被引量：109H指数：8; 相关机构：河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北农业大学石家庄海关技术中心更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目河北省自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>

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产气荚膜梭菌实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法的建立和比较被引量：11: 2020年; 根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立产气荚膜梭菌的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光聚合酶重组酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。特异性分析结果表明,建立的两种检测方法特异性强,仅对产气荚膜梭菌有特异性扩增,对其他细菌均无扩增;两种方法的检出限均为1.3 pg/μL。在人工污染模拟样品的检测中,两种方法的检出限均为1.0×102 CFU/mL;实时荧光RPA需要3~13 min即可实现对所有阳性样品的检测,而实时荧光PCR则需要24~46 min(Ct值为17.45~33.65)。实时荧光RPA方法在检测时间、操作方便性和仪器便携性方面,明显优于实时荧光PCR方法。本研究建立的实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法特异性强、灵敏性高、操作方便,为实验设备装备较差的基层检测实验室和疫情突发现场产气荚膜梭菌的快速检测提供有效技术手段。; 刘立兵李睿文陈志敏王金凤孙晓霞袁万哲王建昌; 关键词：产气荚膜梭菌

胞内劳森菌实时荧光RPA方法的建立及初步应用被引量：5: 2020年; 本研究基于胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis)16S rRNA基因保守序列,设计特异性引物和exo探针,建立了一种能够快速检测胞内劳森菌的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(real-time RPA)。进一步对real-time RPA方法的特异性和灵敏性进行了分析,对临床疑似病例的猪粪便和回肠样品进行了检测,并同real-time LAMP和real-time PCR检测结果进行了比较。结果表明,该方法能够在39℃等温条件下,20 min内实现对胞内劳森菌的有效检测;所建立的方法特异性强,仅对L.intracellularis产生特异性扩增,对其他常见引起猪腹泻的病原均无扩增;灵敏性高,以L.intracellularis基因组DNA为模板,检出限为1.4×10^2fg/μL;在60份临床样品中,该方法对L.intracellularis的检出率为66.7%(40/60),同real-time LAMP和real-time PCR方法一致。本研究所建立的real-time RPA方法反应快速、特异性强、灵敏性高,可用于猪场胞内劳森菌的快速检测。; 刘立兵韩荞忆李睿文王金凤王金凤韩庆安韩庆安袁万哲

检测猪流行性腹泻病毒的核酸、实时荧光RT‑RPA试剂盒及方法: 本发明涉及生物监测技术领域，具体公开一种检测猪流行性腹泻病毒的核酸、实时荧光RT‑RPA试剂盒及方法。所述实时荧光RT‑RPA方法，包括如下步骤：从样品中提取RNA，所得的RNA进行等温扩增，将反应体系加入到装有冻干酶制...; 王建昌刘立兵王金凤石蕊寒南汇珠; 文献传递

检测猪圆环病毒3型的核酸、实时荧光RPA试剂盒及方法: 本发明涉及生物技术检测领域，具体公开一种检测猪圆环病毒3型的核酸、实时荧光RPA试剂盒及方法。所述方法包括如下步骤：从样品中提取DNA，将所得的DNA进行等温扩增；将反应体系加入到装有冻干酶制剂的反应管中，补加醋酸镁溶液...; 王建昌刘立兵王金凤石蕊寒南汇珠; 文献传递

猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立被引量：11: 2017年; 试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPV-VP2作为模板,RPA的检测限为102拷贝,同本研究中应用的实时荧光定量PCR方法检测限一致,比普通PCR方法高100倍;RPA方法对疑似PPV感染临床样品的阳性检出率为82.6%,略低于实时荧光定量PCR的检出率(86.9%),明显高于普通PCR的阳性检出率(66.7%)。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速,结果确实可靠,适用于PPV的快速检测。; 刘立兵王建昌经美王金凤袁万哲

GNM C7-8实时荧光PCR同时快速检测8种动物源性成分: 2019年; 目的基于八模块设计的GNM C7-8实时荧光PCR系统实现对8种动物源性成分同时快速检测.方法基于猪朊蛋白基因、牛生长激素基因、羊生长激素基因、驴线粒体ATPase 6基因、马线粒体ATPase 6基因、鸭生长激素基因、水貂线粒体细胞色素b基因、狐狸线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基基因引物设计了8种动物源性成分实时荧光PCR检测方法.应用GNM C7-8实时荧光PCR系统,对8种动物源性成分启动同时检测和每隔5 min顺序启动不同时检测,并将检测结果和ABI 7500荧光PCR分别检测结果进行比较.结果GNM C7-8实时荧光PCR系统同时检测猪、牛、羊、驴、马、鸭、水貂、狐狸8种动物源性成分,起峰周期数分别为30、27、21、21、24、17、15、17,与其不同时检测结果一样,与ABI 7500荧光PCR系统检测结果相比,猪、羊、马、鸭、水貂5种成分的起峰快1~2个周期数,其余3种成分检测结果一致,检测完成时间少16~20 min.结论GNM C7-8实时荧光PCR系统8个模块独立运行,互不干扰,无交叉污染,能够同时快速检测8种动物源性成分,为快速筛查动物源性成分提供强有力的设备技术支持.; 胡连霞项佳林张亦琴付琦陈敏娜丁红田苗丽孙晓霞王建昌郭春海; 关键词：动物源性成分

用于犬瘟热病毒检测的引物和探针及其用途: 本发明公开了一种用于犬瘟热病毒检测的侧流层析试纸条RT‑RPA引物和探针组合，其F引物、R引物及探针序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。本发明还公开了利用所述引物和探针组...; 王建昌王金凤刘立兵石蕊寒; 文献传递

猪瘟病毒重组酶聚合酶扩增检测方法的建立及应用被引量：9: 2019年; 本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5’UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)。该方法在40℃下恒温20 min即可完成反应;且特异性强,与其他瘟病毒和猪的重要病原无任何交叉反应。以体外转录的CSFV RNA为模板,该方法的检出下限为10~2copies。采用RT-RPA方法和实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)方法同时对57份临床样品进行CSFV检测,结果,RT-RPA方法的阳性检出率为56.14%(32/57),略低于real-time RT-PCR方法的阳性检出率(64.19%,37/57)。以real-time RT-PCR作为参考方法,所建立的RT-RPA方法的诊断特异性为100%,诊断灵敏度为89.19%。上述结果表明,本研究建立的CSFV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速,对没有装备荧光PCR仪地区的猪瘟诊断防控具有重要意义。; 王金凤张若曦刘立兵李睿文孟令宅顾文源韩庆安王建昌袁万哲; 关键词：猪瘟病毒

DNA条形码技术鉴别市售鱼肉制品真伪被引量：8: 2018年; 以COΙ基因和16S r RNA基因作为鱼类制品通用的DNA条形码,对超市中采集的91份冷冻鱼肉样品及经过深加工的预包装鱼肉样品进行物种鉴定。结果表明:COΙ基因和16S r RNA基因均可用于鱼类制品物种真伪的鉴别;冷冻鱼肉样品和预包装鱼肉样品与其商标的符合率分别为83.54%和58.33%;市场中存在鱼类制品商品标签标示错误、配料标注不明确等问题,为相关部门对鱼类制品的监管提供了有力的技术支持。; 石蕊寒南汇珠丁红田王建昌付琦孙晓霞王金凤丁丽丽崔景芳刘洋郭春海; 关键词：DNA条形码 RRNA基因鱼肉制品

用于检测产气荚膜梭菌的引物和探针及其应用: 本发明公开了一种用于检测产气荚膜梭菌的实时荧光RPA引物和探针组合，其序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。本发明还公开了利用所述引物和探针组合快速检测产气荚膜梭菌的实时荧...; 刘立兵王建昌孙晓霞石蕊寒; 文献传递

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