北京华大蛋白质研发中心有限公司
- 作品数：68 被引量：73H指数：5
- 相关作者：郝育杰更多>>
- 相关机构：中华人民共和国天津海关河北大学河北农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 一种人的核糖体蛋白S20蛋白质及其在自身免疫性肝炎诊断中的应用
- 本发明公开了一种自身免疫性肝炎特异的蛋白质核糖体蛋白S20及其应用。该蛋白质具有序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列。本发明还公开了用其基因克隆表达该蛋白质，并进行蛋白质芯片和酶联免疫吸附试验检测的方法，由本方法...
- 宋其峰韩宇宁刘国振李永哲朱衡吴琳
- 转基因大米中氨基酸含量超高效液相色谱定量被引量：10
- 2014年
- 建立了一种6-氨基喹啉基--羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，超高效液相色谱（UPLC）对大米中17种氨基酸进行快速定量的方法。优化了6M盐酸和0．2％苯酚的加入量、水解时间等大米水解条件，采用1．7txm粒径的AccQ·TagULTRAC18色谱柱分离，260nnl检测，可在9．5rain内实现17种氨基酸衍生物的分离。结果表明，17种氨基酸的标准工作曲线的线性回归相关系数（r）均大于0．999，加标回收率在85．9％～102％之间，日内相对标准偏差（RSD）（n=5）2．64％-4．59％，日间相对标准偏差（n=3）1．43％-5．06％，方法简单、准确、快速、重复性和再现性良好。将该方法用于大米中氨基酸含量的分析，比较了4对转基因大米及其非转亲本之间氨基酸含量的差异，检验结果表明，所取样分析的转基因大米及其亲本之间在氨基酸含量上没有显著性差异。
- 傅博强唐治玉王晶尹长城
- 关键词：转基因大米氨基酸超高效液相色谱
- 一种抗常用苏云金芽孢杆菌CryI单克隆抗体杂交瘤的制备方法及其单克隆抗体的应用
- 本发明涉及一种针对转基因中常见苏云金芽孢杆菌(Bt)CryI蛋白的广谱单克隆抗体及其制备方法，目的是提供一种新的可以检测天然转基因植物(水稻、棉花、玉米等)中是否存在Bt蛋白的单克隆抗体。制备该单克隆抗体的专用抗原，是根...
- 尹长城刘国振吴琳刘斯奇郝育杰邓汉超韦汉福潘秦
- 文献传递
- 一种抗CP4 EPSPS单克隆抗体的制备方法、编码序列及其应用
- 本发明涉及一种针对转基因中常见的抗草甘膦抗性蛋白-5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate synthase，EPSPS)的单克隆抗体及其制备方法，目...
- 尹长城刘国振吴琳郝育杰韦汉福潘秦韩宇宁奚文辉刘斯奇
- 文献传递
- 一种可结合SARS-CoV-2病毒RBD蛋白的中和抗体及其应用
- 本发明公开了一种可以特异性结合SARS‑CoV‑2病毒棘突蛋白(Spike，S蛋白)的受体结合域(Receptor Binding Domian,RBD)的单克隆抗体21336‑98，它的制备方法以及重链和轻链可变区的6...
- 武鹏程马晓飞武雷孔双泉金丽珠张立帆尹长城
- 文献传递
- 转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征被引量：10
- 2014年
- 【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之
- 牛东东郝育杰荣瑞娟韦汉福兰金苹史佳楠魏健李雪姣杨烁奚文辉武鹏程刘丽娟吴琳刘斯奇尹长城刘国振
- 关键词：水稻转基因植物免疫印迹
- 一种制备针对糖基化修饰蛋白质的单克隆抗体杂交瘤的方法
- 本发明旨在提供一个制备针对糖基化修饰蛋白质的单克隆抗体杂交瘤的方法。该方法通过将稳定表达外源目的基因的细胞株免疫与宿主细胞同来源的小鼠，使用糖基化和非糖基化的目的蛋白对单克隆抗体同时进行筛选，以获得特异针对糖基化修饰蛋白...
- 任艳韦汉福潘秦刘玲徐宁志刘国振吴琳刘斯奇
- 文献传递
- 转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测被引量：7
- 2017年
- 【目的】制备抗CAS9蛋白质的单克隆抗体,建立转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印迹检测方法,了解CAS9蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以带Cas9的质粒DNA为模板,PCR扩增Cas9 5′端810 bp片段后克隆到p ET30a载体中,将酶切验证且序列正确的重组质粒转入表达菌Condon Plus中,经IPTG诱导表达CAS9蛋白质(N端270氨基酸),用纯化的重组蛋白质作为免疫原免疫小鼠,制备单克隆抗体,用免疫印迹分析筛选特异性和灵敏度高的抗体细胞株。用特异性引物PCR扩增转基因水稻的Cas9,用免疫印迹检测转基因水稻中的CAS9蛋白质。将重组CAS9蛋白质和带有CAS9的水稻苗期叶片蛋白质进行平行免疫印迹分析,用Image J软件采集信号绘制CAS9蛋白质的标准曲线,进而对水稻叶片中的CAS9蛋白质进行定量分析。提取单粒稻米的总蛋白质,稀释后用免疫印迹分析CAS9蛋白质的检测下限,提取多个时期、部位的水稻材料的总蛋白质,包括苗期的地上部和地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶片等,用SDS-PAGE分离后免疫印迹检测比较CAS9蛋白质的表达特征。【结果】通过体外克隆、诱导表达获得了纯化的重组CAS9蛋白质N端片段,免疫小鼠后得到42株阳性杂交瘤细胞株,经筛选鉴定到#12D2细胞株对水稻样品的检测具有较好的特异性和灵敏度。用该抗体通过免疫印迹检测了转基因水稻,所建立的免疫印迹方法对重组CAS9蛋白质的检测下限约为0.25 ng。在水稻苗期叶片中,CAS9蛋白质约占鲜重的0.00005%,可检出单粒稻米8%样品(约2 mg)中的CAS9蛋白质。在苗期地上部CAS9蛋白质的表达丰度高于地下部,分蘖期茎和叶片中表达量较高,根和叶鞘表达量较低。【结论】获得特异性强、灵敏度高的抗CAS9单克隆抗体,建立了检测转基因水稻中CAS9蛋白质的免疫印记方法,揭示了CAS9蛋白质在水稻不同部位的表达特征,并展示了在其他植�
- 郭亚璐马晓飞史佳楠张柳张剑硕黄腾武鹏程康昊翔耿广荟陈浩魏健窦世娟李莉云尹长城刘国振
- 关键词：水稻转基因植物单克隆抗体免疫印迹
- 产生抗AMP-18单克隆抗体杂交瘤、抗AMP-18单克隆抗体及其在胃癌检测中的应用
- 本发明旨在制备一种抗胃窦粘膜分泌蛋白(antrum mucosal protein-18，AMP-18)的单克隆抗体杂交瘤，及其在制备肿瘤临床检测试剂中的应用。具体而言，本发明通过分子克隆和单克隆抗体技术，筛选了一株可分...
- 邢蕊张军康滨韦汉福徐宁志刘国振吴琳吕有勇刘斯奇
- 文献传递
- 一种抗GUS蛋白质的单克隆抗体及其应用
- 本发明涉及一种可特异性识别GUS(β-葡糖苷酸酶)的单克隆抗体的制备方法和其在转基因生物检测中的应用方法。目的是提供一种可检测GUS蛋白质的单克隆抗体和将该抗体用于转基因植物、动物和细胞等生物体的高灵敏度免疫学检测方法。...
- 刘国振尹长城吴琳刘斯奇牛东东郝育杰韦汉福武鹏程魏健荣瑞娟
- 文献传递
