广州市恺泰生物科技有限公司
- 作品数：37 被引量：36H指数：2
- 相关机构：解放军第458医院广州军区广州总医院广东省人民医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技型中小企业技术创新基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外对慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能的影响,为rhIL-12作为佐剂应用于临床提供理论依据。方法取健康人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),分别与绿脓杆菌、鞭毛蛋白、rhIL-12、绿脓杆菌+rhIL-12、鞭毛蛋白+rhIL-12孵育,ELISA法检测细胞培养上清中IFNγ的含量。结果绿脓杆菌和鞭毛蛋白组只诱导产生低水平的IFNγ,rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平较阴性对照组显著提高;而绿脓杆菌+rhIL-12组、鞭毛蛋白+rhIL-12组诱导产生IFNγ的水平显著高于绿脓杆菌、鞭毛蛋白和rhIL-12组,差异均有统计学意义,且rhIL-12的作用呈剂量依赖性。结论绿脓杆菌及其鞭毛蛋白联合rhIL-12体外能显著提高健康人和慢性乙型肝炎患者PBMCs产生IFNγ的水平,增强其细胞免疫应答。
- 傅泳航杨向阳李茹冰王增松王翠玲谢飞群牛丽红邓凤君徐江平张宜俊
- 关键词：绿脓杆菌制剂鞭毛蛋白白细胞介素-12外周血单个核细胞干扰素Γ
- 大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化及神经蛋白的动态表达
- 2008年
- 背景:现阶段骨髓间充质干细胞定向诱导分化为神经元样细胞的方法并不统一。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经样细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的动态表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2006-09/2007-01在苏州大学生命科学学院完成。材料:清洁级SD大鼠2只。胎牛血清为杭州四季青产品,成纤维生长因子、丁羟基茴香醚为Sigma公司产品,二甲基亚砜为Amresco产品。方法:Percoll法体外分离培养、扩增纯化大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞密度为5×107L-1。设立2组,诱导组用含10%胎牛血清和10μg/L成纤维生长因子的L-DMEM培养基预诱导24h后,再以含2%二甲基亚砜和200μmol/L丁羟基茴香醚的L-DMEM无血清培养基诱导1,3,5h。对照组始终用含10%胎牛血清的L-DMEM进行培养。主要观察指标:细胞形态学变化,免疫荧光染色鉴定神经细胞表型。结果:预诱导24h,胞体由原来的长梭形变成多角形或不规则形,伸出多个短棒状突起,可见2～3个核仁,细胞间漩涡状生长趋势消失,排列无规律;诱导1～3h,细胞逐渐变圆,胞质收缩明显,折光性增强,双级或多极的突起互相连接呈网状;诱导5h,突起出现一、二级分支。诱导1h后部分细胞表达神经前体细胞表面抗原巢蛋白;3h后巢蛋白达高峰,同时表达成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白;5h后巢蛋白表达下降,神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白达高峰。对照组细胞形态无明显变化,巢蛋白表达为阴性。结论:在添加化学诱导剂之前先使用成纤维生长因子进行预诱导,能促进骨髓间充质干细胞向神经前体细胞和神经元转化,且在诱导分化过程中神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。
- 段祥段巧艳栾希英张焕相
- 关键词：骨髓间充质于细胞神经元分化
- 诱导分化过程中不同融合状态大鼠骨髓间充质干细胞成骨的差异被引量：2
- 2008年
- 背景:诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的方案已基本成熟,但是诱导过程中影响分化效果的因素仍处于探索阶段。目的:观察诱导时机的选择对大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响。设计、时间及地点:以细胞为对象的观察实验,于2006-08/2007-01在苏州大学江苏省干细胞重点实验室完成,省级重点实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于SD大鼠,雌雄不限,体质量150～200g。方法:采用Percoll淋巴细胞分离液分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。将第3代大鼠骨髓间充质干细胞以5×107L-1密度分组培养,诱导组分别于接种当时、细胞达50%～60%融合时、细胞达85%～95%融合时加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的成骨诱导培养基诱导。非诱导组采用普通培养基培养。主要观察指标:诱导后7,14,21,28d行钙钴染色、Von-Kossa染色、碱性磷酸酶活性检测成骨细胞能力。定期在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化及生长状况。结果:经钙钴染色后,诱导组大部分染色的细胞呈阳性反应,胞浆中可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,大多数多角形细胞呈阳性,如铺路卵石样排列,随着时间的延长,可见片状强阳性细胞,以细胞达85%～95%融合时诱导培养组数量最多,结节体积最大。非诱导组未见片状强阳性细胞。Von-Kossa染色后可见深棕色致密结节。以细胞达85%～95%融合时诱导培养组形成结节较早,同期相比数量较其他组多。细胞内碱性磷酸酶活性检测表明经成骨诱导剂诱导后与同期非诱导组相比细胞内碱性磷酸酶活性明显提高,表现细胞成骨分化特点。结论:初始接种密度相同的情况下,细胞间相互接触程度越高,成骨能力越强。
- 段巧艳段祥栾希英张焕相
- 关键词：间充质干细胞成骨细胞骨组织工程
- 重组人白细胞介素-12对食蟹猴的反复给药毒性研究
- 2012年
- 目的:观察重组人白细胞介素-12(rhIL-12)对食蟹猴的长期毒性。方法:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,剂量分别为0.5,5和40μg·kg-1,每周3次,共13周。检测指标包括临床症状、血液学、血生化、免疫、血清抗体和组织病理学检查。结果:rhIL-12给药后导致动物出现腹泻、面部及眼睑部肿胀、腹股沟淋巴结肿大、溃疡、及注射局部红斑和硬结等临床症状,并出现贫血和白细胞分类异常,血液生化指标出现肝脏转氨酶升高,免疫学指标出现外周血总T淋巴细胞比例增加,CD4细胞百分率下降,CD8细胞百分率增加。第7次给药后,给药组动物产生了rhIL-12抗体。结论:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,毒性靶器官和组织为血液系统、肝脏、心脏、肾脏和淋巴结等免疫调节系统,其安全剂量为0.5μg·kg-1。
- 李平王增松叶英传汤俊荣李水生张宜俊王翠玲陈志良左丛林
- 关键词：长期毒性试验食蟹猴
- 用于恶性肿瘤治疗的免疫调节制剂
- 本发明公开了一种用于恶性肿瘤治疗的免疫调节制剂，属于生物制剂技术领域，所述的制剂每毫升含有5～30μg的白介素12、10～30亿单位的绿脓杆菌菌苗制剂和余量的水溶液。本发明的免疫调节制剂能十分明显的成倍提高外周血单个核细...
- 张宜俊邱向南万华印曾振飞杨联勇赵峰叶倩君李悦琳于源吴思纹王增松杨愈丰
- 文献传递
- 白细胞介素-12增强HBsAg疫苗免疫应答的实验研究
- 2009年
- 目的研究白细胞介素-12（IL-12）对乙肝病毒表面抗原（HBsAg）疫苗的免疫增强作用。方法选用C57BL／6J小鼠，使用不同剂量的重组鼠白细胞介素-12（rmlL-12）和HBsAg联合给药，检测给药前后血清中IFN-1，的浓度以及给药后小鼠脾脏淋巴细胞对HBsAg刺激的免疫应答能力的变化。结果高剂量HBsAg和高剂量rmIL-12联合两次给药后，血清中IFN-γ浓度明显高于单独给HBsAg组或rmIL-12组（P〈0．05）；高剂量联合给药组的小鼠脾脏淋巴细胞经HBsAg体外刺激后诱生IFN-γ的能力明显高于单独给HBsAg组或rmlL-12组（P〈0．05），流式细胞检测分析表明IFN-γ主要来源于CD4^＋和CD8^＋的T细胞。结论rmlL-12能快速明显地提高C57BL／6J小鼠对HBsAg的特异性免疫应答能力，为IL-12和HBsAg在临床上联合治疗慢性乙肝感染提供了理论依据。
- 夏书奇王增松王翠玲揭燕谢飞群曾振飞段祥张宜俊
- 关键词：慢性乙肝HBSAGIFN-Γ
- 重组人IL-12病毒去除/灭活工艺的建立及验证被引量：2
- 2014年
- 目的建立重组人白细胞介素-12(recombinant human IL-12,rhIL-12)的病毒去除/灭活工艺,并进行验证。方法采用预过滤器(Viresolve Shield,纳米滤膜3.1 cm2)和除细小病毒过滤器(Viresolve Pro,纳米滤膜3.1 cm2)串联过滤,样品体积为90 ml,过滤时间为2 h,安全系数为1.88,压力为30 psi,建立rhIL-12病毒去除工艺,分析该工艺对产品的比活性及回收率的影响,并以猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒去除效果验证;采用低pH孵放法(用1 mol/L HCl调pH值至3.8±0.1,室温放置180 min后,用1 mol/L NaOH调pH值至7.4)建立rhIL-12病毒灭活工艺,分析该工艺对产品的蛋白含量及比活性的影响,并分别以水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒灭活效果验证。结果纳米膜串联过滤病毒去除工艺中,蛋白回收率为95.14%,比活性为过滤前的95.12%,对rhIL-12活性基本无影响;当滤出液达90 ml时,PPV下降滴度均大于4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求。低pH孵放法病毒灭活工艺中,rhIL-12的蛋白含量在病毒灭活前后分别为359和338μg/ml,生物学活性分别为3.392×106和3.356×106 IU,均无明显变化;室温处理180 min后,指示病毒PRV、VSV的下降滴度均>4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求。结论建立的rhIL-12膜过滤病毒去除工艺和低pH孵放法病毒灭活工艺均可有效地去除/灭活病毒,保证了产品的质量及安全性。
- 赵峰张宜俊冉艳红王翠玲李平李弘剑
- 关键词：白细胞介素-12病毒灭活
- TCA沉淀法测定食蟹猴生物样品中125I.rhIL.12含量的方法学确证
- 目的:对TCA沉淀法测定食蟹猴生物样品中I-rhIL-12含量方法进行确证。方法采用NaI标记结合三氯醋酸(TCA)沉淀蛋白的方法测定食蟹猴生物样品中I-rhIL-12含量,试验设置2μg/kg单剂量皮下注射I-rhIL...
- 李茹冰李若冰张宜俊李超万华印
- 关键词：食蟹猴
- 文献传递
- 注射用重组人白细胞介素-12制剂及制备方法
- 本发明公开一种注射用重组人白细胞介素-12制剂及其制备方法，旨在提供一种稳定性好、水分低的制剂；其技术要点是：每毫升制剂含：2.5～10μg的重组人白细胞介素-12，50mg填充剂，5～20mg冻干保护剂，2.30mg磷...
- 张宜俊李平汤俊荣叶英传李水生王增松王翠玲谢飞群
- 文献传递
- 重组人IL-12和SCF促进新生儿脐带血中CD34^+细胞的分裂增殖被引量：1
- 2012年
- 目的分析IL-12及SCF对CD34+细胞分裂增殖及IL-12Rβ的表达。方法分离正常足月产新生儿脐带血与健康成年人外周血中的单个核细胞,采用流式细胞术(FACS)比较2组中CD34+细胞的频率,分析IL-12及SCF对CD34+细胞的作用。结果健康成年人外周血中CD34+细胞平均频率为0.13%,显著低于新生儿脐带血中CD34+细胞的平均频率1.53%(P<0.001)。进一步研究表明,SCF可以促进CD34+细胞表达CD25;IL-12及SCF可以显著促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。结论新生儿脐带血中CD34+细胞的频率明显高于成年人外周血中CD34+细胞的频率。IL-12及SCF可以促进CD34+细胞的分裂增殖以及IL-12Rβ1的表达。
- 王慧付笑迎张宜俊王翠玲夏书奇李平王增松黄佩贤吴长有
- 关键词：IL-12SCFCD34+细胞
