国家教育部基因组药物工程研究中心
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生经济管理生物学更多>>
- FGFR2IIIc重组慢病毒载体的构建及其在肌原细胞L6中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的:构建人FGFR2IIIc重组慢病毒表达系统,感染并筛选获得大鼠肌原细胞L6表达人FGFR2IIIc的重组细胞株,初步研究FGFR2IIIc对L6细胞的作用。方法:从人胎盘组织中获得FGFR2IIIc基因,并克隆到Gateway慢病毒系统的入门载体pENTR-11,采用LR重组酶将重组的pENTR-FGFR2IIIc和表达载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应得到pLenti6/V5-DEST-FGFR2IIIc。将该重组表达载体和Viral Packaging Mix包装质粒通过阳离子脂质体共转染293FT细胞,待细胞完全裂解后收集重组慢病毒颗粒上清液;取适量上清液感染L6细胞,杀稻瘟毒素筛选2～4周,挑单克隆细胞进一步扩大培养并建立重组细胞株。RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定重组细胞株中目的基因FGFR2IIIc的表达,bFGF和硫酸乙酰肝素共同诱导各重组L6细胞株后流式细胞术分析细胞周期,形态观察检测成肌分化水平,并通过相关信号通路抑制剂分析与各信号通路的关系。结果:构建了含人FGFR2IIIc基因的重组慢病毒表达载体,获得的重组慢病毒颗粒能高效感染L6细胞,RT-PCR和间接免疫荧光实验说明正确表达目的基因;流式细胞术结果表明L6中高表达FGFR2IIIc的重组细胞株的G1/G0期的细胞增多;各重组细胞株分别加入Erk1/2和p38通路抑制剂抑制诱导2天,发现重组细胞株发生不同的形态变化。结论:通过慢病毒表达系统,成功构建高表达FGFR2IIIc的重组L6细胞株,FGFR2IIIc通过Erk1/2和p38通路影响了L6细胞的形态发生,该结果为下一步在大鼠L6细胞中研究FGFR2IIIc基因与成肌分化功能相关性奠定基础。
- 郭淑军万艳李丽玲秦丽陈小佳
- 试论我国生物医药的发展环境被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨适合我国生物医药的发展环境。方法:结合我国生物医药的特点,分析适合我国生物医药发展的政策环境、法律环境、金融环境和信息环境。结果与结论:为推动我国生物医药的发展进程,必须不断完善我国生物医药的研发、成果转让、专利申请与注册审批、产业化、人力资源管理、上市销售及国际合作等政策,并优化生物医药发展的法律环境、金融环境和信息环境。
- 宿凌李校堃
- 关键词：生物医药
- 碱性成纤维细胞生长因子生物活性的ELISA检测被引量：4
- 2005年
- 目的:寻找一种简便、经济、灵敏度高而不需使用放射性同位素或MTT的生物活性检测方法,对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行活性检测。方法:运用多克隆抗体ELISA、单克隆抗体ELISA和MTT法分别对bFGF进行生物活性检测,并对结果和重现性进行比较。结果:ELISA测得结果与MTT法相比无显著差异,且其精密度明显优于MTT法。结论:用ELISA检测bFGF生物活性,简便准确,值得推广应用。
- 安全李校赵文项琪孟娟
- 关键词：ELISAMTF生物活性检测
