浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所
- 作品数：182 被引量：716H指数：13
- 相关作者：竺锡武刘歆陈韦赵永旭吴金光更多>>
- 相关机构：中国计量学院生命科学学院浙江大学生命科学学院浙江大学农业与生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 黄瓜花叶病毒芭蕉分离物的RNA3全长克隆与序列分析
- 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是分布最广泛和危害最严重的植物病毒。该病毒主要分为Ⅰ组(SubgroupⅠ)和Ⅱ组(SubgroupⅡ)。迄今为止,在我国和广大亚洲地区的CMV分离物基本...
- 覃佐东金磊磊田清花严师节杜志游陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒
- 文献传递
- 18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒被引量：3
- 2006年
- 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化.
- 何煜波陈集双陈海敏冯俊丽高必达
- 关键词：实时荧光PCR黄瓜花叶病毒半夏
- 黄瓜花叶病毒辣椒分离物侵染性克隆构建被引量：4
- 2008年
- 【目的】鉴定引起辣椒产生褪绿黄化症状的病原物,构建侵染性克隆。【方法】大田辣椒样品通过ELISA检测,结合病毒外壳蛋白SDS-PAGE及病毒RNA分析,初步确定辣椒中病原物为黄瓜花叶病毒(CMV)Phy株系。以辣椒病毒粒子RNA为模板,采用含T7启动子的不同正向引物通过RT-PCR扩增CMV-Phy全长基因组RNA1、RNA2和RNA3。PCR产物经过双酶切后连接到pUC118载体,并分别比较5种(DH5α、HB101、JM109、LE392和NM522)感受态细胞的转化效率。体外转录CMV-Phy的基因组cDNA克隆(pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3)成RNA分子(P1P2P3),分析其转录效率和侵染活性。P1P2P3与CMV的卫星RNA进行假重组,进一步确定CMV-Phy侵染性克隆的成功构建。【结果】引起辣椒产生褪绿黄化症状病原物为CMV,携带卫星RNA;心叶烟接种辣椒病毒粒子后同样产生褪绿黄化症状。HB101感受态细胞最适合CMV-Phy基因组转化。CMV-Phy基因组及其卫星RNA的大小如下:RNA1为3356nt、RNA2为3048nt和RNA3为2220nt,卫星RNAPz-satRNA为384nt(序列登陆号分别为:DQ402477,DQ412731,DQ412732EF363688)。CMV-Phy的cDNA克隆体外转录在5′端添加G有利于提高转录效率,但影响其侵染活性;P1P2P3在苋色藜和心叶烟产生的症状与其病毒粒子产生的症状相一致。除了Pz-satRNA,P1P2P3还能作为T1-satRNA、Rs-satRNA和Tsh-satRNA辅助病毒;T1-satRNA可加重CMV-Phy在心叶烟症状反应,而其它3个卫星RNA则对此起减弱作用。【结论】以病毒粒子RNA为模板,采用touch-upPCR扩增参数在1个反应管中同时获得CMV-Phy基因组RNA1、RNA2和RNA3;CMV-PhyRNA1、RNA2和RNA3的5′端添加1个G最有利于侵染性克隆构建。
- 廖乾生杜志游张华荣吴鹏朱丽萍陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆
- 端粒酶RNA模板定点突变对肿瘤细胞Bcap-37的作用研究
- 2013年
- 端粒酶在正常体细胞中极少表达,而在大多数人类恶性肿瘤和细胞系中高度表达,这暗示着端粒酶活性可能与肿瘤密切相关。本研究以人乳腺癌细胞株Bcap-37接种裸鼠形成的肿瘤组织块为实验材料,通过检测端粒酶活性、端粒长度及细胞凋亡的情况,观察端粒酶RNA模板定点突变的作用。结果显示:MT-hTER组样本的端粒酶活性低于对照组,端粒长度短于对照组,细胞核形态不够稳定,有较多细胞凋亡的现象,而对照组细胞核形态稳定,较少发生细胞凋亡。以上结果提示着端粒酶RNA模板定点突变在一定程度上改变了人乳腺癌细胞株Bcap-37的端粒酶活性、端粒长度及细胞凋亡发生率。
- 韦敬航杨力媛郑洁吕齐何丹枫刘小川
- 关键词：端粒酶活性端粒长度
- 芜菁花叶病毒(TuMV)特性的研究进展被引量：13
- 2004年
- 芜菁花叶病毒 (TuMV)是世界范围内广泛分布的重要病毒。从生物学和理化特性、基因组结构、侵染和繁殖。
- 赵建平周钗美陈集双郭得平
- 关键词：芜菁花叶病毒基因组结构
- 卫星RNA对黄瓜花叶病毒在番茄中积累量的影响
- 卫星 RNA（satRNA）是寄生于病毒的亚病毒,并影响病毒在寄主上的症状反应。为明确黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）卫星 RNA 对辅助病毒在寄主上的致病性和基因组含量的影响,本研究在...
- 廖乾生曾蓉王海燕朱丽萍陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒
- 文献传递
- 玉米端粒酶RNA模板基因候选序列的转基因鉴定体系研究
- 2013年
- 研究采用pCAMBIA 1301穿梭质粒和LBA 4404菌株,侵染不同品种玉米成熟胚诱导的愈伤组织,以构建玉米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系。构建了两个含有玉米端粒酶RNA的pCAMBIA 1301穿梭质粒,一个携带模板区正常的玉米端粒酶RNA候选序列(野生型),另一个携带模板区定点突变处理的端粒酶RNA候选序列(突变型),然后分别侵染甜玉米成熟胚诱导的愈伤组织,也同样分别侵染糯玉米成熟胚诱导的愈伤组织。结果表明:在愈伤组织培养中,甜玉米的愈伤诱导率在40%左右,而糯玉米的愈伤诱导率高达80%;在抗性筛选培养基上已成功获得抗性愈伤组织,经PCR鉴定愈伤组织基因组中分别含有正常和突变的目的片段,这表明成功构建了玉米端粒酶RNA候选序列的转基因鉴定体系,为进一步鉴定相关候选序列提供有效的技术方法。
- 郑洁杨力媛马国兴马登旭刘小川
- 关键词：甜玉米糯玉米农杆菌介导法抗性愈伤组织
- 两株黄瓜花叶病毒卫星RNA克隆与序列分析
- 卫星RNA(satellite RNA,satRNA)是依赖于辅助病毒(helper virus)复制、包被和在寄主内扩散的一类低分子量的RNA,是寄生于病毒的亚病毒;satRNA 有其特异的核苷酸序列,与辅助病毒RNA...
- 朱丽萍李露露廖乾生陈集双
- 关键词：进化寄主
- 文献传递
- 采用双荧光素酶报告法验证乳腺癌中miR-155靶标被引量：4
- 2013年
- MiR-155与乳腺癌发生发展密切相关.本研究以乳腺癌组织和血清中均显著高表达的miR-155为研究对象,利用TargetScan和PicTar预测miR-155的靶基因.根据miR-155与靶基因结合的保守性、动力学及靶基因功能,筛选出miR-155的靶基因ACTA1(actin alpha 1,skeletal muscle)和CEBPB(CCAAT/enhancer binding protein beta),并用双荧光素酶报告法验证.将ACTA1和CEBPB的3'-UTR(3'-untranslated region)全长序列载入海肾荧光素酶基因的下游,并构建结合位点的突变序列,得到pRL-TK-Aw、pRL-TK-Am、pRL-TK-Cw、pRL-TK-Cm载体.不同海肾荧光素酶载体转染Bcap37乳腺癌细胞,同时转染miR-155及内参对照萤火虫荧光素酶载体pGL3-control.根据不同转染的海肾荧光素酶表达活性,运用SPSS软件分析,结果显示,CEBPB是miR-155在乳腺癌中的直接靶基因(P<0.05).miR-155通过下调CEBPB影响乳腺癌的发生.
- 孟丽纪婷李鹿丰张喜平杨红健朱聪郭江峰丁先锋
- 关键词：MIR-155靶基因
- 黄瓜花叶病毒2b蛋白对寄主光合速率和叶绿体结构的影响被引量：8
- 2007年
- 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)2b蛋白作为重要致病因子的角色在茄科模式植物上已为广泛描述,但其致病机理尚未廓清.从寄主叶绿体结构和光合特征的角度探索了病毒侵染过程中2b蛋白对心叶烟(Nicotiana glutinosa)的影响.首先利用PCR方法导入突变位点,构建了2b蛋白不表达的人工突变体Fny-CMV!2bpro,然后通过平行接种野生型Fny-CMV和Fny-CMV"2bpro,分析二者侵染后心叶烟的症状表现、叶绿素含量、光合速率以及叶绿体超微结构变化.结果显示:接种30天,Fny-CMV侵染的心叶烟表现重花叶、畸形和矮化症状,植株的光合速率和叶绿素含量显著降低,叶绿体形态和结构发生明显病变.但是,Fny-CMV#2bpro侵染的心叶烟植株仅表现轻微花叶或不表现明显症状,与健康对照相比,其光合速率和叶绿素含量没有显著差异,叶绿体形态和结构亦未出现明显病变.由此可见,野生型病毒侵染导致的相对低的光合速率和叶绿素含量,与2b蛋白引起的叶绿体形态和结构的破坏有一定的相关性.RNA杂交分析结果显示:2b蛋白的致病性与CMV子代RNA在寄主体内的积累量有关,不表达2b蛋白使得CMV基因组RNA1和RNA2含量显著下降,其亚基因组RNA4(编码CP蛋白)含量降低尤为显著.
- 陈斐斐杜志游刘歆谢礼陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒光合速率叶绿体结构
