中山大学中山医学院干细胞与组织工程研究中心
- 作品数：108 被引量：379H指数：11
- 相关作者：余伟华姜美花赖兴强张慧慧王鹏更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院骨科研究所华中农业大学农业微生物学国家重点实验室贵阳医学院干细胞研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 人骨髓间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑病新生大鼠学习记忆功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的 研究人骨髓间充质干细胞(hMSC)经脑室移植后对新生鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型的治疗作用及观察植入细胞的存活、迁移及对大鼠远期学习记忆功能的影响.方法 体外分离、扩增正常人骨髓间充质干细胞,移植前用CM-DiI标记.7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、HIE组(n=10)、HIE-hMSC组(n=20).HIE-hMSC组:建立HIE模型后72 h,将hMSC(1×106细胞/μl)5μl采用立体定向移植到乳鼠侧脑室.大鼠6周龄时行Morris水迷宫实验检测其学习记忆功能.取大鼠脑组织制作快速冰冻切片直接在荧光显微镜下观察移植细胞的存活及迁移.部分脑组织制成石蜡切片,HE染色计数海马CA1区存活神经元数.结果hMSC移植到大鼠脑室后能存活至少5周,移植后2周细胞沿移植针道呈条索状分布,并发出红色荧光;移植后5周,细胞分布较前稀疏,损伤组织中可见移植细胞.大鼠的空间学习记忆功能有所改善,水迷宫平均逃逸潜伏期HIE-hMSC组(45.5±16.5) s较HIE组(74.5±7.5)s显著缩短(P<0.05),原平台像限的搜索时间HIE-hMSC组(47±10)s显著长于HIE组(36±8)s(P<0.01).HIE-hMSC组左侧海马CA1区存活神经元数为(94±23)个/mm,较HIE组(61±12)个/mm显著增多(P<0.05).结论 hMSC 经脑室移植到缺氧缺血性脑病的新生SD乳鼠后,hMSC能存活至少5周,并迁移至损伤脑组织.大鼠的远期学习记忆功能有所改善,海马CA1区存活神经元数增多.
- 赖文玉刘畅吴燕云麦友刚苏浩彬黄文革欧阳颖张红珊李文益
- 关键词：干细胞移植脑室
- 大鼠脂肪干细胞诱导分化为类许旺细胞的表型和功能特征被引量：4
- 2007年
- 目的研究大鼠脂肪干细胞(ADSCs)在体外分化为类许旺细胞的表型和功能特征,为外周神经组织工程应用提供实验基础。方法采用β-疏基乙醇、全反式视黄酸、forskolin、血小板源生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和heregulin依次联合诱导,双重免疫荧光细胞化学法和Western blot鉴定神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白等许旺细胞标志蛋白的表达,与原代背根神经节(DRG)感觉神经元共培养研究诱导后细胞的功能。结果诱导后ADSCs形态类似许旺细胞。双重免疫荧光细胞化学法显示S-100和GFAP的最高表达率分别为(78.08±6.08)%和(72.38±6.43)%,双重表达率为(60.76±6.43)%。Western blot显示诱导后细胞同时表达这两种蛋白。诱导后细胞能明显增加DRG神经元的突起向外生长。结论诱导后ADSCs的表型和功能特征证实大鼠ADSCs在体外可分化为类许旺细胞。
- 江丽朱家恺刘小林项鹏胡军余伟华
- 关键词：脂肪干细胞许旺细胞神经元表型
- 以海藻酸三维支架构建骨髓问充质干细胞源性生物人工肝组织的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的以骨髓间质干细胞（bone mesenchymal stem cell，BMSC）为种子细胞，以海藻酸三维支架为载体，研究两者的相容性及其构建生物人工肝组织的可能性。方法将大鼠BMSC接种于海藻酸三维支架上，采用倒置相差显微镜、扫描电镜分别检测BMSC的黏附、生长与增殖情况，评价两者的相容性；同时以表皮生长因子（EGF）、肝细胞生长因子（HGF）、成纤维生长因子4（FGF-4）等细胞因子混合液诱导BMSC向肝细胞分化，检测培养液内尿素氮和白蛋白含量，RT-PCR检测培养细胞ALB和AFP基因的表达，糖原染色及免疫荧光法检测细胞糖原合成功能和CK-18的表达。结果大鼠BMSC在海藻酸三维支架上能正常地黏附、生长和增殖；于海藻酸三维支架内加入诱导液作用于BMSC后，培养液内尿素和ALB的含量逐渐上升，RT-PCR检测到培养细胞有AFP和ALB基因的表达，同时被诱导的细胞具有糖原储存的功能并表达CK-18。结论海藻酸三维支架与大鼠BMSC具有良好的相容性；以EGF、HGF、FGF-4等细胞因子混合液为诱导因子，能在海藻酸三维支架上成功诱导BMSC向肝细胞分化；海藻酸三维支架和BMSC可望成为肝脏组织工程理想的种子细胞和细胞载体。
- 林继宗汤照峰方和平林楠胡昆鹏杨军项鹏许瑞云
- 关键词：间质干细胞细胞培养技术
- 胚胎干细胞来源的树突状细胞骨髓瘤疫苗抗瘤功能的观察被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨胚胎干细胞(ESC)来源的树突状细胞(DCs)骨髓瘤融合疫苗的抗肿瘤功能。方法:1)对骨髓瘤疫苗进行安全性检测,并观察其体外针对SP2/0的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应;2)融合疫苗的免疫保护实验和免疫治疗实验。结果:1)接种裸鼠未见致瘤情况初步证实该疫苗安全可靠,体外特异性CTL杀伤实验表明该融合疫苗具有较强的杀伤活性。2)ESC-DCs融合疫苗免疫组和BMC-DCs融合疫苗免疫组小鼠受到SP2/0攻击后,连续观察60d未见肿瘤形成。3)ESC-DCs融合疫苗治疗组小鼠中位生存时间为47d,BMC-DCs融合疫苗治疗组小鼠中位生存时间为46d,而PBS组小鼠中位生存时间仅为21d。结论:ESC-DCs与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合制备得到的融合疫苗具有较强的抗肿瘤功能,与BMC-DCs来源的同类疫苗相比具有相似的生物学特性及功能性。
- 沈冬何志旭刘俊峰项鹏黄绍良黄瑾
- 关键词：骨髓肿瘤树突细胞
- neuronatin shRNA真核表达载体的构建及其生物学功能被引量：1
- 2009年
- 目的:获得能持续干扰neuronatin(nnat)基因表达的细胞,观察nnat基因沉默对神经细胞发育与分化的影响,为研究基因功能奠定基础。方法:构建含nnat基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒,将质粒转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12,RT-PCR方法筛选出最有效干扰质粒,稳定转染PC12细胞后观察细胞表型变化,免疫荧光检测nnat蛋白表达,NGF诱导观察nnat表达下调对细胞分化的影响。结果:成功构建并筛选出有效的靶向nnat基因的shRNA真核表达载体;载体稳定转染PC12细胞之后能特异性沉默nnat基因的表达,PC12细胞长出突起,向神经元方向分化,加入诱导因子NGF后能促进突起生长。结论:nnat可能是作为神经分化抑制因子在神经发育与成熟过程中发挥作用。
- 余利红余新炳项鹏
- 关键词：RNA干扰SHRNA
- 自体骨髓细胞经门静脉移植治疗肝硬化与肝功能不全的临床研究
- 目的：对比研究自体骨髓细胞经门静脉移植对肝硬化和肝功能不全的治疗效果,为慢性肝病的干细胞治疗提供依据。
方法：2005年2月～2006年6月,共142例肝硬化门静脉高压症患者在我科接受了手术(脾切除、断流术或内...
- 曹葆强许瑞云林继宗钟跃思黄绍斌林楠汤照峰吴祥元项鹏
- 关键词：门静脉高压症肝硬化肝功能不全自体骨髓细胞移植
- 文献传递
- Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞的建系及体外神经分化被引量：1
- 2011年
- 【目的】建立Nestin-GFP转基因小鼠的胚胎干细胞(mESC)系,并观察其示踪ES细胞系的神经分化过程。【方法】将E3.5的Nestin-GFP小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上(MEF经γ射线照射失去增殖活性)。4～6d后将自囊胚长出的内细胞团(ICM)继续培养并传代扩增,检测所得细胞Oct-4、SSEA-1和AKP等胚胎干细胞特异性标志物的表达及在体内外向三胚层分化的能力;之后,诱导细胞向神经元样细胞及神经胶质样细胞分化,利用免疫荧光检测其标志性抗原。【结果】免疫组化可见Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct-4、SSEA-1,AKP染色呈强阳性,并具有向体内外三胚层分化潜能;在体外诱导其向神经分化,第6d可见到明显的绿色荧光,并与免疫组化Nestin表达部位基本吻合。第12d及第16d分别可见神经元及神经胶质细胞特异性标志物表达,而此时Nestin的表达较前明显下降。【结论】成功建立了Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞系,该细胞具有自我更新的特性及多向分化潜能,并可用于在体外更直观的监测神经分化的阶段性变化并由此进行调控。
- 王紫菲赖文玉柯琼李付贵王涛张秀明李伟强项鹏
- 关键词：NESTIN胚胎干细胞绿色荧光蛋白神经分化
- 骨髓间充质干细胞移植治疗小型猪急性心肌梗死的转归
- 2011年
- 【目的】探讨超顺磁性氧化铁(SPIO)活体动态示踪小型猪骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗心肌梗死的可行性。【方法】采用密度梯度离心法获取小型猪自体骨髓MSC,用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体转染MSC,并用SPIO体外标记MSC-GFP。采用经皮球囊封堵法制备急性心肌梗死(AMI)模型,双标记的MSC经冠脉移植入小型猪心肌梗死区域,移植后24h、3周、8周在MRI下进行活体动态示踪。【结果】普鲁士蓝染色显示25μgFe/mLSPIO与0.8μL/mL阳离子脂质体联合对MSC的标记率达95%～100%,对绿色荧光蛋白的表达无影响,标记细胞仍均具备多向分化能力;冠脉移植MSC后24h,3周,8周MRI成像均可见梗死区域的室间隔有明显区别于周边组织的低信号。离体组织学检查可见心梗边缘区有普鲁士蓝染色阳性,荧光阳性细胞存在。【结论】SPIO标记MSC可在MRI成像下表现出理想的信号强度和示踪时间,SPIO活体动态示踪小型猪骨髓MSC移植治疗心肌梗死是可行的。
- 杨珂彭朝权项鹏张成喜邹丽媛吴晓高雅康庄
- 关键词：超顺磁性氧化铁间充质干细胞小型猪急性心肌梗死示踪
- 构建MS2-RIP方法用于鉴定lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的相互作用分子被引量：1
- 2021年
- 【目的】为了探讨lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的作用机制,本研究拟构建一种新的MS2-RIP方法用于鉴定DANCR的相互作用分子。【方法】利用MS2噬菌体衣壳蛋白可与噬菌体复制酶编码基因5’端一段由19个碱基组成的RNA茎环结构序列,即MS2结合位点(MS2 Binding Site,MS2 BS)高效结合的特点,构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒,通过MS2蛋白与MS2 BS的亲和作用,使DANCR得到富集,并且同步捕获与DANCR相互作用的分子,用于进一步分析鉴定。【结果】成功构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒用于MS2-RIP实验,该实验可显著富集DANCR以及作为阳性对照的DANCR结合蛋白EZH2。【结论】基于MS2蛋白与MS2结合位点的高效结合特性,我们针对lncRNA DANCR建立了MS2-RIP方法。该方法可有效富集DANCR以及与DANCR结合的生物活性分子,为研究DANCR的作用机制提供一种新的技术手段。
- 巫孟师熊敏敏彭丹韩雪钟小敏
- 关键词：长链非编码RNA
- 心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞被引量：4
- 2011年
- 目的:探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法:获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果:分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论:适宜浓度的5-Aza(10μmol/L)和CT-1(0.1μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。
- 彭朝权高雅项鹏杨珂邹丽媛吴晓
- 关键词：心肌营养素1间充质干细胞心肌样细胞
