上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室 作品数:267 被引量:787 H指数:11 相关作者: 朱淑文 俞雁 朱丽慧 王曼 程玉强 更多>> 相关机构: 南京农业大学动物医学院 上海海洋大学水产与生命学院 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市科技兴农重点攻关项目 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
单链抗体对猪传染性胃肠炎病毒感染动物保护效果初探 2018年 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种可导致仔猪严重腹泻的高度接触性传染病。本文研究了一株抗TGEV的单链抗体(scFv)对TGEV的动物保护作用。将携带scFv的质粒进行原核表达和纯化,获得了纯化的蛋白。ELISA试验证实scFv与TGEV的特异性反应,空斑试验证实scFv能够抑制病毒的入侵。此外,scFv预先灌服仔猪能够抑制TGEV的感染,给仔猪提供保护。本研究为后续新型抗病毒制剂的研究奠定了基础。 张凡庆 陈玉雪 杨亮 朱建国丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157 Stx毒素表达的影响 【目的】确定丝裂霉素C对溶原性大肠杆菌O157中Stx前噬菌体和Stx毒素的诱导作用。【方法】利用丝裂霉素C作诱导剂对8株溶原性大肠杆菌O157进行噬菌体诱导,以MC1061作指示菌采用双层琼脂平板法观察诱导前后的噬菌斑... 夏炉明 孙建和 严亚贤关键词:大肠杆菌O157 丝裂霉素C VERO细胞 文献传递 浦东地区犬皮肤病原真菌PCR检测结果及分析 2017年 本文利用建立犬、猫真菌性皮肤病常见病原体PCR检测方法,对浦东地区部分诊所收集的犬真菌性皮肤病病原体进行多重PCR检测,在第一批9个样品中,2个样品(1号和6号)均扩增出犬小孢子菌目的片段290bp,3个样品(3、8号和9号)扩增出马拉色菌的目的条带580bp,经过测序验证正确。这为构建宠物皮肤病诊治技术体系提供可靠的技术支撑。 瞿瑜萍 王婷婷 俞向前 黄慧华 王曼 文德亮 金耀忠 朱建国 叶承荣关键词:PCR 基于复合益生菌和枯草芽孢杆菌发酵转化大豆异黄酮的比较研究 被引量:8 2014年 试验旨在通过利用枯草芽孢杆菌ATCC 6633和复合益生菌2株菌株单独及按不同比例混合后发酵豆粕的试验,采用高效液相色谱对发酵结束后大豆异黄酮(SIF)的含量进行检测发现,大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素在4~40 mg/L有着良好的线性关系,EM菌在发酵10 d后苷元的转化效率最高,苷元含量在SIF总量中的比率达54.18%。试验研究可为今后饲料发酵工业提供一定的理论基础。 杨守凤 徐建雄关键词:EM菌 大豆异黄酮 苷元 猪链球菌7型噬菌体裂解酶Ly7917催化域的裂菌活性 被引量:2 2016年 【目的】揭示链球菌噬菌体裂解酶Ly7917催化域CHAP的核心功能域,为进一步改造裂解酶提供理论依据。【方法】通过表达纯化分别从N端截短的Ly7917及从C端截短的Ly CHAP各蛋白,基于平板裂解试验和浊度递减试验,比较各截短蛋白之间的活性差异,以及添加Ca2+后各蛋白的活性变化。【结果】发现催化域蛋白Ly CHAP与Ly7917全酶的活性差异不显著,Ly CHAP的N端序列对其活性影响较大,不宜截短;而C端依次截短后,活性逐渐降低。C端截短20个氨基酸的Ly CHAP1-130,在添加1 mmol/L Ca2+后活性最强。【结论】Ly7917催化域CHAP的核心功能域为1-130 aa,推测其具有Ca2+结合区域,并发现Ly CHAP1-130在Ca2+参与下裂菌活性可媲美Ly7917全酶。预示着Ly CHAP1-130可以替代全酶应用于之后的临床试验。 吉文汇 孙亮 黄庆庆 王恒安 严亚贤 孙建和关键词:猪链球菌 催化结构域 单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导及鉴定 被引量:2 2014年 利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体的核酸类型。结果显示,38株单增李斯特菌分离株中的16株在tRNAArg位点携有原噬菌体,其中1株可诱导出噬菌体颗粒,该噬菌体为长尾噬菌体,核酸为dsDNA。噬菌体的成功诱导为噬菌体及其功能基因的开发利用奠定了基础。 安慧婷 刘瑾 王娟 姚火春 王恒安关键词:单增李斯特菌 噬菌体 鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测 被引量:1 2018年 通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。 高全新 刘云霞 程玉强 严亚贤 孙建和猪群链球菌携带情况和关节病分离株毒力基因分析 被引量:2 2016年 根据链球菌保守基因EF-Tu设计引物,从120份30~60日龄健康仔猪鼻拭子分离到11株链球菌,分离率为9.2%(11/120);从72份发生关节病的病猪关节液,分离到6株链球菌,分离率为8.3%(6/72)。为了解分离的链球菌毒力基因分布情况,根据猪链球菌(streptococcus suis,SS)保守基因(GDH)、猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)特异性基因(CPS2J)以及猪链球菌主要毒力基因溶菌酶释放蛋白(MRP)、毒力相关基因ORF2、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH),设计并合成5对引物进行毒力基因检测,提取扩增产物测序,并对序列进行比对分析。毒力基因检测结果显示,11株鼻拭子分离株有1株毒力因子分布为CPS2J+,鉴定为SS2,不包含其它毒力基因;猪关节液分离的链球菌,有2株SS2和1株SS,2株SS2的毒力基因分布为GDH+/CPS2J+/MRP+/ORF2+/GAPDH+,属于强毒株,1株SS毒力基因为GDH+。2株SS2毒力基因测序结果显示,CPS2J、MRP基因未见变异,提示其高度保守,ORF2、GDH、GAPDH基因存在碱基点突变,但突变对结构无影响,与参考菌株同源性较高。 文德亮 郭志波 何随彬 叶承荣 俞向前 黄飞 朱建国关键词:链球菌 毒力基因 酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定方法的研究 被引量:5 2009年 目的建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法。方法采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活的影响,确定最佳酶活测定条件。结果相同条件下,单个克隆之间的酶活有差异,相对标准偏差(RSD)>8%;相同条件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18~20倍,并且本底水平很低甚至没有;双倍体酵母的酶活介于两个单倍体酵母之间,同预计一致;质粒顺序转化与共转化在AH109中差异有统计学意义(P<0.001),而在Y187中没有明显差异(P>0.05)。结论测定酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶的活性宜采用Y187酵母株,酶活变化范围大,本底小,受转化方法影响小,测定时选取5个以上阳性克隆混合培养更有利于酶活的准确测定。 郜尽 王海侠 李京敬 俞雁关键词:酵母双杂交 Β-半乳糖苷酶 酶活测定 发酵床养猪垫料重金属含量变化 被引量:5 2013年 本研究利用新型复合菌种制备发酵床进行生长猪饲养试验,在对比不同菌种发酵床养猪饲料矿物质元素消化率基础上,对垫料N、P含量及重金属元素含量变化进行测定分析,旨在为发酵床养猪废弃垫料能否作为肥料用于种植业提供理论依据。研究结果表明,无论是生长期矿物质元素的表观消化率,还是育肥期矿物质元素的表观消化率,各个试验组之间均无显著差异(P>0.05)。随着饲养天数的延长,垫料中N、P、Cu、Zn含量及重金属As、Pb的含量逐渐增加,饲养3个周期后,垫料中N、P含量分别为2.28%、1.65%左右,Cu、Zn富集量分别达到266mg/kg、93.3mg/kg,重金属元素As、Pb富集量分别达到2.86mg/kg、0.92mg/kg;饲养过程中Cu元素的富集量要明显高于Zn元素的富集量,砷元素的富集量要明显高于铅元素的富集量。各个试验组间N、P、Cu、Zn含量及重金属As、Pb的含量变化没有显著差异(P>0.05)。结果提示,发酵床生态养猪废弃垫料中N、P含量较高,适合于种植业肥料,但矿物质元素Cu、Zn及重金属元素As、Pb的富集量较高,其肥效有待进一步验证。 张媛媛 胡启蒙 刘春燕 严国祥 姜红菊 李新红关键词:发酵床 垫料 重金属 养猪