目的建立m6A特异性烯丙基标记测序(m6A-selective allyl chemical labeling and sequencing,m6A-SAC-seq)实验方法体系,在单核苷酸分辨率水平对RNA的N6-甲基腺苷(m6A)修饰进行检测。方法m6A烯丙基标记测序(m6A-SAC-seq)使用特异性甲基转移酶MjDim1对m6A添加烯丙基标记成为N6-烯丙基-甲基腺苷(am6A),使用I2处理产生N1,N6-环化腺苷(A)产物,在逆转录时引入突变,从而实现在单核苷酸分辨率水平的检测。通过HPLC法纯化甲基转移酶MjDim1,使用探针及液相色谱-质谱联用系统(LC-MS/MS)检测m6A的转换率,计算MjDim1活性作为质控。提取样品RNA,用烯丙基标记m6A,并用m6A-SAC-seq技术构建文库,测序后通过数据分析得到m6A位点信息,通过标准曲线校准计算得到m6A的含量。结果m6A-SAC-seq处理后,HIV逆转录酶识别环化的am6A位点,引入突变,但附近未修饰位点不发生突变。通过特定的A突变成T/C的突变位置(A to T/C)来识别m6A位点,并添加内参探针,用标准曲线来定量m6A含量。结论m6A-SAC-seq技术仅需30 ng的mRNA或去除了rRNA的总RNA样本就可以实现m6A位点在单核苷酸分辨率水平的检测。
世界卫生组织(World Health Organization,WHO)国际癌症研究机构最新发布的数据显示,乳腺癌现已成为全球发病率最高的恶性肿瘤,严重危害广大女性的身心健康。中国抗癌协会乳腺癌专业委员会2007年首次制订《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2007版)》以来共更新8版,指南一直与时俱进,兼顾证据的权威性、知识的前沿性和在广大基层医疗机构的适用性。本次制订的《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2024年版)》在2021年版的基础上进行了相应的更新,纳入了乳腺癌诊断和分类的新理念、精准治疗的新工具、手术操作的新规范和综合治疗的新方案,旨在为乳腺癌防控及诊治领域的医务工作者提供指导和依据。
