军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室
- 作品数：335 被引量：1,190H指数：16
- 相关作者：张成岗范国才任长虹屈武斌李伟光更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学生命科学学院北京工业大学生命科学与生物工程学院国防科学技术大学机电工程与自动化学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学自动化与计算机技术更多>>
- 重组人源脑红蛋白的高效表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2009年
- 脑红蛋白(euroglobin,NGB)是新发现的主要表达于脊椎动物神经元及视网膜中的第三类携氧珠蛋白。已有诸多报道认为脑红蛋白在缺氧缺血性脑损伤的神经保护过程中,作为活性氧簇(ROS)的清除剂或缺氧信号的感受器起重要作用,但其神经保护作用的具体机制不明。显然,实现该蛋白的制备对于研究其功能具有重要作用。基于此,通过RT-PCR从人胎脑中扩增出脑红蛋白cDNA并克隆到原核表达载体pBV220,通过测序鉴定正确后转化至大肠杆菌HB101中诱导表达,表达产物超声破碎后经凝胶过滤柱Sephacryl S-200和阴离子交换柱QSepharose F纯化,最后通过SephadexG-25脱盐。经15%SDS-PAGE和Western blot检测及质谱和蛋白序列分析鉴定制备的蛋白样品为脑红蛋白,表达菌体、超声后上清及纯化蛋白溶液均呈现红色,说明具有珠蛋白的典型活性。采用两步法实现了脑红蛋白高效纯化,且确保了其具有明显活性,为进一步揭示脑红蛋白神经保护作用的功能及机制等奠定了重要基础。
- 吴永红王利红高艳张成岗
- 关键词：脑红蛋白原核表达蛋白纯化蛋白鉴定
- 一种简单的毛细管色谱柱电加热装置的制作方法及其在液相色谱-质谱联用系统中的应用被引量：1
- 2015年
- 为了实现蛋白质组的深度覆盖,特别是低丰度蛋白质的定性鉴定和定量分析,目前常用的方法是采用更长或装填更小粒径填料的毛细管色谱柱,但因此带来的问题是色谱柱反向柱压显著升高。针对以上问题发展了一种简单的毛细管色谱柱电加热装置制作方法,并将该装置安装于液相色谱-质谱联用系统,分别以牛血清白蛋白(BSA)酶切肽段混合物和酵母蛋白(yeast)酶切肽段混合物为样品,从柱压和柱效两方面对该装置的性能进行了评价。实验结果表明,所制作的毛细管柱电加热装置安装在装填粒径为3μm反相色谱填料的毛细管柱上,在最佳电流(100 mA)下对BSA及yeast酶切肽段混合物进行分离时的柱压比不加电流时的柱压降低至少50%,柱效略有升高。这说明所制作的毛细管色谱柱电加热装置能显著降低柱压,为在较低的柱压条件下选择更小粒径色谱颗粒填料的毛细管色谱柱提供了一种有效的方法。
- 金祖耀吕雅瑶周珊珊郝斐然付斌应万涛钱小红张养军
- 关键词：蛋白质组学柱效
- 基于马尔科夫链的胰蛋白酶肽段蛋白酶切位点概率预测被引量：6
- 2011年
- 在基于质谱技术的蛋白质鉴定过程中,数据库搜索是主要的方法。漏切位点和酶切规则决定了图谱候选肽段的范围,是数据库搜索算法的重要参数。对于常用的胰蛋白酶切来说,除了局部构象、三维结构、实验条件,以及其它偶然因素会影响赖氨酸K或者精氨酸R后的位点能否被酶切外,该位点附近的其它氨基酸也会影响蛋白水解酶的酶切效果。从质谱图谱中时常会鉴定出包含漏切位点的肽段,因此,预测蛋白质的酶切位点能够为数据库搜索算法提供更为可靠的模型,也能够为了解和分析蛋白质的酶切规律提供依据。本文提出了一种基于马尔科夫(Markov)链的预测方法,能够利用蛋白质的序列信息来预测候选酶切位点的酶切概率,在蛋白酶切过程中,预测肽段的覆盖率可以达到85%以上。
- 刘辉张纪阳孙汉昌徐长明张伟马海滨朱云平谢红卫
- 关键词：蛋白鉴定马尔科夫链
- 急性持续性热辐射损伤对小鼠皮肤热应激相关基因表达的影响
- 2010年
- 【目的】研究急性持续性热辐射对小鼠皮肤热应激相关基因表达的影响,探讨热损伤的分子机制。【方法】将雄性Balb/c小鼠置于烤箱内,分别设定环境温度为43～61℃(以2℃递增),进行急性持续性热辐射损伤,直至小鼠死亡,以室温下放置5 min的小鼠为对照组(CK),立即解剖致死小鼠,将去除毛发后的小鼠皮肤于体积分数为0.1%DEPC水中快速漂洗后,置液氮中保存。提取RNA并反转录,用两重RT-PCR扩增与热应激相关的基因并进行图像分析。【结果】hsp70、krt6α和thbs1等基因的表达,在不同温度热辐射作用下均较CK呈明显上调趋势。其中hsp70的表达在环境温度低于55℃时急剧上调,而在高于57℃时表达上调相对趋缓;而krt6α和thbs1的表达上调程度则与温度变化关系不大。此外,hsp105的表达与CK相比,在较低温度(51℃以下)时呈明显上调趋势,而在较高温度(53℃以上)时无明显差异。【结论】不同强度急性持续性热辐射对小鼠皮肤热应激相关基因的表达具有显著影响,且不同基因的表达量与温度之间呈现不同的相关性。同时,根据两重RT-PCR分析结果可知,hsp70可作为量化不同强度热辐射损伤的分子标记。
- 李志慧高艳任长虹刘虎岐张成岗
- 关键词：热辐射RT-PCRHSP70小鼠
- HBx参与肝细胞癌发生发展调控的分子机制被引量：3
- 2013年
- 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,而HBV慢性感染是肝癌发生的主要原因.乙型肝炎病毒(HBV)中X基因编码的一种多功能蛋白(HBx),参与众多重要生物学过程的调控,并促进肝细胞癌的发生.早期研究表明,HBx在HCC发生过程中发挥重要的调控功能,但其确切分子机制尚未完全明确.近几年,HBx参与生物学过程的分子机制研究有了较快的进展.有趣的是,研究发现,HBx在不同的细胞系以及HBV感染的不同阶段发挥促抑凋亡的双重作用,HBx还参与细胞自噬的调控.此外,在HBx参与细胞增殖及肿瘤侵袭和转移等方面,也产生了一些新的认识.本文将从HBx对肝细胞凋亡、自噬和增殖的调控及其对肝癌细胞转移和侵袭的调控等方面,对HBx参与肝细胞癌发生发展调控机制做一综述.
- 林丛杨冬姜颖贺福初
- 关键词：DNA复制
- 脑红蛋白减轻硝普钠诱导的PC12细胞损伤被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨脑红蛋白(NGB)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:利用一氧化氮(NO)供体——硝普钠诱导制备NO损伤细胞模型,通过转染真核表达载体方式在PC12细胞中过表达NGB,采用W estern印迹方法检测NGB表达水平,采用RT-PCR方法检测细胞内bcl-2基因的表达变化,并检测细胞活性(MTT法)、LDH释放量和胞内胞外NO含量。结果:过表达NGB可提高PC12细胞的存活率,增加bcl-2基因的表达,但不改变胞内、外NO的含量。结论:NGB可保护硝普钠诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达有关。
- 陈婷方侯冰任长虹高艳吴永红吴祖泽张成岗
- 关键词：脑红蛋白硝普钠PC12细胞神经保护一氧化氮
- 基质金属蛋白酶及其基因多态性与肝癌的发生发展被引量：2
- 2007年
- 肝癌是威胁人类健康的主要疾病。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类Zn2+依赖的蛋白水解酶,能参与细胞外基质的代谢。已有的研究表明,MMPs在肝癌的生长、血管形成、侵袭和转移等多个阶段中发挥重要作用,由此,MMPs成为极佳的肝癌候选易感基因,其基因多态性可能调节肝癌的易感性。然而,目前针对肝癌的遗传易感研究还不多见。随着人类基因组计划和单倍型图谱计划的完成,进行肝癌易感基因的鉴定对于指导肝癌的早期预防和治疗具有重要意义。
- 邱炜周钢桥贺福初
- 关键词：基质金属蛋白酶肝癌基因多态性
- 分离分析技术在蛋白质组学研究中应用的新进展被引量：9
- 2009年
- 蛋白质组学研究的核心技术之一是分离分析方法。该综述重点评述了分离分析技术在蛋白质组学研究,即在蛋白质组表达谱构建、翻译后修饰蛋白质组研究、蛋白质复合体和相互作用研究、蛋白质组定量研究中应用的新进展,介绍了各种分离分析方法的优点、应用范围和有待解决的问题。引用文献89篇。
- 张养军张万军马岩彭博钱小红
- 关键词：蛋白质组学质谱蛋白质相互作用
- 用于寡核苷酸二级结构预测的热力学数据库研究进展被引量：1
- 2014年
- 基于核酸分子杂交的生物技术(如PCR)在病原微生物检测、临床诊断等诸多领域中应用广泛,此类技术的可靠性在于寡核苷酸分子与其靶点结合的高稳定性与特异性,而精确预测寡核苷酸与靶分子结合的二级结构是分析其稳定性与特异性的关键。其中,基于热力学的最近邻模型是寡核苷酸二级结构预测最为可靠的计算方法,但其精确性强烈依赖于精确的热力学参数。由于寡核苷酸分子二级结构的复杂性,除了完美匹配外,还需要错配、内环、膨胀环、末端摇摆、CNG重复、GU摆动等特殊结构的热力学数据。本文综述了近年来用于寡核苷酸二级结构预测的有效热力学数据库及相关计算方法,并指出当前热力学数据库的局限及未来发展方向。
- 刘哲言屈武斌张成岗
- 关键词：热力学计算
- 实时荧光定量PCR的数据分析方法被引量：26
- 2015年
- 实时荧光定量PCR是目前检测目的核酸拷贝数及分析靶基因在mRNA表达水平相对变化的主流技术。研究表明,分析结果的准确性依赖于数据分析方法的可靠性。我们简要综述实时荧光定量PCR的数据分析方法。
- 易健明屈武斌张成岗
- 关键词：实时荧光定量PCR
