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杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装被引量：5: 2010年; 目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。; 龙虎姚伦广王姗姗陈士新谭佩婵孙京臣; 关键词：疫苗

RNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究被引量：4: 2012年; 分别构建RNAi(RNA interference,RNAi)载体干扰家蚕细胞BmN中Argonaute1(Ago1)和Argonaute2(Ago2)基因的表达。首先利用PFBDM和pBac[A3-EGFPafm]载体构建Ago1和Ago2基因的RNA干涉载体,通过转染家蚕细胞发现,Ago1和Ago2基因表达明显下降。并观察细胞形态发现,转染RNAi载体96h后,家蚕BmN细胞逐渐失去正常的梭形状态,体积变大,形态变圆。该研究为进一步研究家蚕中small RNA的产生及作用机制提供了较好的基础。; 陈敏李丹丹乔惠丽卢楠文祯中阚云超; 关键词：RNA干涉基因表达家蚕

长链非编码RNA在食管癌中的研究进展被引量：3: 2015年; 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度>200 n t的一类无蛋白质编码功能的RNA.研究表明lnc RNA可在多个水平参与基因表达调控,影响细胞增殖、分化、代谢和凋亡.lncR NA的异常表达与肿瘤发生、发展、浸润、转移及预后密切相关.食管癌是消化系恶性肿瘤中最致命的类型之一,lnc RNA在食管癌的发病过程中发挥着重要作用.本文就目前lnc RNA在食管癌中的研究进展进行综述,希望能够从lnc RNA角度为食管癌的临床诊断、靶向治疗和预后评估提供新的思路和策略.; 张丹侯小丽吴博李丹丹; 关键词：长链非编码RNA 食管癌基因表达

长片段非编码RNA及其功能研究进展被引量：2: 2010年; 随着大规模基因组测序的完成,大量的非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)被发现。这些ncRNA能够通过多种遗传机制参与基因表达调控,其中Longnon-coding RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子。研究表明,lncRNA参与了基因组印记,剂量补偿效应,表观遗传等多种重要的调控过程。就近年来lncRNA的功能方面研究进展进行综述。; 王艳红刘宗才阚云超文祯中; 关键词：NCRNA 基因组印迹表观遗传效应

拯救细胞系恢复重组家蚕核型多角体病毒包涵体实现外源蛋白在家蚕中产业化生产被引量：1: 2010年; 构建家蚕Bombyxmori肌动蛋白(BmA3)启动子驱动的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)多角体基因(ph)和OpNPV极早期启动子(IE1)驱动的zeocin抗性筛选基因转座供体载体,与鳞翅目辅助转座质粒pie2piggyBac共转染家蚕卵巢细胞BmN,经200μg/ml zeocin抗生素筛选一个月,成功获得持续表达BmNPV多角体蛋白的稳定细胞系BmN-A3ph。多角体缺陷型重组病毒BmBac-GF P感染拯救细胞系BmN-A3ph,细胞成功装配出病毒包涵体颗粒,其包装效率约为野生型病毒感染正常BmN细胞的8%。用拯救型包涵体病毒颗粒喂食家蚕幼虫进行复感染,结果表明稳定细胞系所包装的包涵体病毒与野生型病毒一样能够通过口服途径感染宿主,却并不在宿主体内形成包涵体,从而保证外源基因高效表达。拯救型包涵体病毒可望解决传统注射感染效率较低问题,通过喂食感染可促进杆状病毒介导的家蚕生物反应器产业化进程。; 吴坤冯娟姚伦广楚素霞阚云超; 关键词：包涵体家蚕生物反应器

零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统被引量：2: 2009年; 【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)Bac-to-Bac系统,为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM,同时封闭BmNPV-Bacmid(Bm Bacmid)宿主菌(Escherichia coli BmDH10 Bac)的Tn7转座受体位点attTn7,获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10 Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coliBmDH10Bac中复制,封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组,显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点,能使转座效率提高近4倍,使用条件复制型转座载体pRADM时,转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7时,转座阳性率为100%。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序,缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7,获得重组BmBacmid转染BmN细胞,红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10 Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。; 姚伦广张红玲冯娟张二辉文祯中

综述式教学在硕士研究生分子生物学课程中的应用被引量：4: 2013年; 从教学内容设计、教师及研究生授课形式以及结合研究生具体研究课题对硕士研究生分子生物学综述式教学进行了阐述.综述式教学不仅能够让研究生全面深入地掌握分子生物学基本理论知识,熟悉分子生物学研究思路和方法,了解分子生物学领域的新进展,并且能够达到通过专业课程教学培养研究生科研能力的目标.在研究生教学过程中应用综述式教学,能逐渐培养硕士研究生的科学研究兴趣,提高研究生科研创新能力和设计能力.; 姚伦广胡小敏阚云超; 关键词：研究生课程分子生物学

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南阳师范学院生命科学与技术学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室