中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室
- 作品数：20 被引量：63H指数：5
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- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家自然科学基金更多>>
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- 抗PRV gC抗体制备及PRV gC表达的分析
- 原核表达PRV gC功能区片段,纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC多克隆抗体;PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒,在真核细胞中表达gC基因;制备的抗体分析原核细胞和真核细胞表达的gC蛋...
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒WESTERN-BLOT
- 文献传递
- 抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5
- 2011年
- 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 呋喃它酮代谢物人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 本文利用对醛基苯甲酸(CPA)与呋喃它酮代谢物(AMOZ)进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,并通过质谱法对其结构进行确证。然后采用混合酸酐法将CPAMOZ与载体蛋白偶联,采用紫外扫描(UV)法对偶联物进行验证。用偶联成功的人工全抗原(CPAMOZ-BSA)免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定小鼠血清抗体效价为1∶8×104,对NPAMOZ的半数抑制量为26.55μg/L,间接竞争ELISA鉴定小鼠血清多克隆抗体,与NPAMOZ、CPAMOZ的交叉反应率分别为100%、44.8%,与AMOZ、对醛基苯甲酸、对硝基苯甲醛以及同类其他三种药物呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮等原药及其代谢物以及代谢物衍生物的交叉反应均小于0.01%。结果表明,制备的AMOZ多克隆抗体效价高、特异性强,灵敏度高,为进一步制备AMOZ单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。
- 刘迎春蒋蔚陈永军高艺林石金磊王权
- 关键词：人工抗原化学合成
- 建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法被引量：7
- 2010年
- 本试验利用己烯雌酚（DES）单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附（ELISA）检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×10^4;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125-128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%-94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率〈0.1%。
- 赵新宇王权闫叶娜
- 关键词：己烯雌酚药物残留酶联免疫吸附法
- 热休克蛋白gp96的免疫作用概述
- 本文概述了热休克蛋白gp96在诱导获得性免疫应答和先天性免疫应答方面的作用及机理,同时,对gp96发挥免疫相关作用的区域进行阐述;另外,对gp96的同源物鸡HSP108的作用进行介绍,并就HSP108在新型鸡马立克氏病病...
- 邱亚峰葛菲菲曹瑞兵周斌沈阳马志永陈溥言
- 关键词：热休克蛋白免疫应答GP96马立克氏病病毒
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒Bartha株gC膜外区部分基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 构建伪狂犬病病毒(PRV)gC膜外区部分基因的重组质粒,原核表达并纯化目的蛋白。根据GenBank已发表的伪狂犬病病毒Bartha(PRV Ba)株gC基因的序列(NC EU719641),设计并合成了1对引物,以PRV Ba株为模板,PCR扩增出PRV gC膜外区部分基因片段;将该基因片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,获得大小为35 ku的重组蛋白,命名为pET-gCN813。按照His-Bind纯化试剂盒说明书纯化表达产物,获得融合蛋白的纯化产物。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GC基因原核表达融合蛋白
- 孔雀石绿单克隆抗体的制备及其鉴定被引量：22
- 2007年
- 用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定,该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6,间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105,该细胞连续培养10代以上,生物学性状稳定,间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示,无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5μg/L,除孔雀石绿外,与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应,表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。
- 龚朋飞王权陈永军
- 关键词：孔雀石绿单克隆抗体
- 抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析
- 2011年
- 为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRVgH抗体,经westernblot和IFA检测到病毒感染细胞中gH蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白。本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒GH基因
- 孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：10
- 2010年
- 采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL^256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。
- 王权郭德华李健蒋蔚赵新宇
- 关键词：孔雀石绿间接竞争ELISA
- 抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析
- 大田软海绵酸是腹泻性贝毒素(DSP)的主要致病因子，其藻源在我国分布范围广，引发的中毒事件最多，危害最大，引起的中毒症状包括腹泻、恶心、呕吐、下腹疼痛等，还是潜在的致癌因子，而我国迄今为止尚没有一种较合适于现场使用的软海...
- 胡乐琴柳俊秀王权何培民
- 关键词：单克隆抗体免疫检测
- 文献传递
