郑州大学医学院干细胞研究中心
- 作品数：58 被引量：149H指数：7
- 相关作者：张秋莹许煊慧高国伟邢琳更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济医学院中南大学湘雅医院河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省医学科技创新人才工程项目郑州市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 端粒酶逆转录酶基因修饰人骨髓间质干细胞的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:观察外源性hTERT基因的异位表达对人骨髓间质干细胞(MSCs)端粒酶活性及细胞生命周期的影响。方法:将携带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)目的基因的质粒pEGFP-hTERT通过脂质体转染法转入人骨髓MSCs中,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与扩增。通过RT-PCR和PCR-ELISA对转染前后hTERT mRNA的表达情况及其对端粒酶活性的影响进行检测。将转染细胞在EGF和bFGF的联合诱导下向神经元样细胞定向诱导分化,并用RT-PCR进行鉴定。结果:未转染的人骨髓MSCshTERT mRNA表达阴性,且端粒酶呈阴性而转染hTERT基因的人骨髓MSCshTERT mRNA表达阳性,且端粒酶呈阳性。转染hTERT基因的人骨髓MSCs在体外已连续传到第35代,而未转染的人骨髓MSCs传到第20-25代左右已衰老死亡。转染hTERT基因的人骨髓MSCs经EGF和bFGF的联合诱导后,较多细胞出现了典型的神经元样形态,且经RT-PCR检测表明,神经元特征性蛋白微管相关蛋白(MAP2)和神经丝亚单位M(NF-M)表达增强。结论:外源性hTERT基因可以在人骨髓MSCs中获得异位表达,并能诱导人骨髓MSCs的端粒酶活性。外源性hTERT基因的异位表达不仅可以使人骨髓间质干细胞的寿命明显延长而且不影响其维持干细胞的多向分化潜能特性。
- 李克刘瑞敏韩雪飞马岚邢莹
- 关键词：间质干细胞端粒末端转移酶
- 非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的血管内皮细胞增生及凋亡的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的血管内皮细胞增生、凋亡的影响并探讨其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、LPC组、非诺贝特低浓度组(10μmol·L-1)、非诺贝特中浓度组(50μmol·L-1)及非诺贝特高浓度组(100μmol·L-1)。分别观测LPC对血管内皮细胞增生、凋亡及凋亡调控蛋白抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增生,促进内皮细胞凋亡,XIAP表达减弱。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,XIAP表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达干预LPC对HUVECs增生及凋亡的影响。
- 孙国举谢秀梅邢莹杨天伦余国龙
- 关键词：非诺贝特人脐静脉内皮细胞增生凋亡X连锁凋亡抑制蛋白
- 非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的影响
- 2006年
- 目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、凋亡、NO生成及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达的影响。方法:体外培养HUVECs株CRL-1730,分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特组(10μmol/L)、中浓度非诺贝特组(50μmol/L)、高浓度非诺贝特组(100μmol/L)。分别观测内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAPmRNA表达的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制CRL-1730细胞增生,促进凋亡,降低NO浓度,减弱XIAPmRNA的表达。非诺贝特干预后,CRL-1730细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,XIAPmR-NA表达增强,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达,干预LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,从而起到抗动脉硬化作用。
- 孙国举谢秀梅邢莹鄢文海韩雪飞
- 关键词：非诺贝特增生凋亡XIAP
- 不同细胞因子对间充质干细胞向神经细胞诱导分化的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞体外培养条件及不同细胞因子对其向神经样细胞分化的影响。方法:实验于2003-10/2005-01在郑州大学干细胞研究中心完成。从正常人骨髓中分离获取骨髓间充质干细胞,体外培养扩增、纯化后,分3组对其进行诱导分化:①碱性成纤维生长因子组。②表皮生长因子组。③碱性成纤维生长因子+表皮生长因子组。诱导后行免疫细胞化学鉴定,用反转录-聚合酶链反应对培养及诱导前后的微管相关蛋白-2、胶质纤维酸性蛋白mRNA的表达进行检测。结果:增殖培养3d即可见细胞分裂像和克隆单位,细胞可保持较高的增殖生长能力。碱性成纤维生长因子组和联合诱导组微管相关蛋白-2mRNA的表达高于表皮生长因子组,而表皮生长因子组比碱性成纤维生长因子组有较多的胶质纤维酸性蛋白mRNA的表达。结论:骨髓间充质干细胞可以在体外扩增、培养,并可向神经干细胞方向诱导。表皮生长因子能促进干细胞向胶质细胞方向分化,而碱性成纤维生长因子能促进神经干细胞向神经元分化。
- 马岚李克许煊慧韩雪飞邢莹
- 关键词：骨髓细胞分化神经元干细胞细胞因子类
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化被引量：7
- 2004年
- 目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法:从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果:诱导1 h、2 h、3 h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin,且随诱导时间延长呈下降趋势;诱导5 h后,大部分细胞具有典型神经元形态,表达神经元标志物-神经元特异性烯醇化酶(NSE),少部分细胞呈星型胶质细胞状,表达胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论:骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。
- 许予明秦洁邢莹张博爱龚光明宋波陈宗德张苏明
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养神经细胞分化
- 兔骨髓间充质干细胞向神经元的诱导分化被引量：2
- 2004年
- 目的 :探讨兔骨髓间充质干细胞 (bonemarrowmesenchymalstemcells ,BM -MSCs)向神经元定向诱导分化及分化前后体外培养的条件。方法 :无菌条件下收集兔股骨骨髓 ,用相对密度为 1 0 77的淋巴细胞分离液分离出白膜层细胞群 ,贴壁法筛检其中的MSCs ,用DMEM H条件培养基进行原代及传代培养。分别取 5和 10代的MSCs向神经元定向诱导。诱导后更换为神经培养基继续培养 ,并在 1～ 2 0d用免疫细胞化学方法检测分化细胞的特异性表面标志。结果 :兔骨髓MSCs在DMEM H条件培养基中建立高纯度的细胞培养 ,能够稳定地连续传代达 10代以上。不同代数的MSCs诱导后均表达巢蛋白 (nestin)和神经特异性烯醇化酶 (neuron specificenolase ,NSE)。诱导后NSCs在神经培养基中继续存活 2 0d以上 ,但未见扩增。结论 :兔骨髓MSCs能够诱导表达神经元特异性标志 ,且诱导前后的MSCs均可在体外培养条件下存活。
- 邢莹景莹杨红旗韩雪飞
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经元
- 重组人类Tau蛋白的大量制备及鉴定
- 2006年
- 目的:重组人Tau蛋白的大量制备。方法:将携带人类全长Tau蛋白基因的质粒转入工程菌E.ColiBl21,经IPTG诱导表达后,通过差速离心、离子交换层析、凝胶过滤层析方法纯化Tau蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western印迹法进行鉴定。结果:纯化Tau蛋白的得率约为43.3%。在SDS-PAGE上呈均一的蛋白条带,其相对分子质量约为60 000。结论:本实验以较高产量成功地纯化了重组Tau蛋白,纯化的蛋白质可以满足制备Tau抗体的需要,且其生物活性保存较好,可用于Tau蛋白生化特性的研究。
- 段萍景莹韩雪飞王建枝
- 关键词：TAU蛋白纯化阿尔茨海默病
- 脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化被引量：6
- 2010年
- 背景:目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道。目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响。方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组。将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液。移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达。移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量。结果与结论:脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达。多巴胺水平与对照组相比有明显提高(P<0.05)。
- 刘芳樊志刚韩雪飞
- 关键词：脐血间充质干细胞细胞移植帕金森病多巴胺
- 端粒酶逆转录酶基因修饰人骨髓间质干细胞的实验(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:人骨髓间充质干细胞经过有限次的细胞传代后,就会停止增殖,发生衰老和死亡。有研究表明,端粒与细胞寿命的控制密切相关,是否可通过外源性人端粒酶逆转录酶基因的异位表达,诱导人骨髓间充质干细胞的端粒酶活性,维持端粒长度的稳定,从而延长人骨髓间充质干细胞的生命周期并保持其多潜能分化特性?目的:观察外源性人端粒酶逆转录酶基因的异位表达对人骨髓间质干细胞端粒酶活性及细胞生命周期的影响。设计:重复测量实验。单位:郑州大学医学院干细胞研究中心。材料:实验于2003-10/2005-12在郑州大学医学院干细胞研究中心完成。人骨髓间质干细胞采自郑州大学第一附属医院及第三附属医院小儿外科和门诊20名健康志愿者。增强型绿色荧光蛋白-C1质粒和增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒由加拿大Dr.ChantalAutexier馈赠。DH5α菌株由郑州大学医学院重点分子医学实验室侯卫红博士馈赠。方法:无菌条件下,抽取健康志愿者胸骨骨髓2mL,经离心、洗涤及传代培养后备用。①阳离子脂质体转染及阳性克隆的筛选和扩增结果:将第5代人骨髓间充质干细胞接种至24孔培养板中,将携带有增强型绿色荧光蛋白报告基因和人端粒酶逆转录酶目的基因的质粒pEGFP-人端粒酶逆转录酶通过脂质体转染法转入人骨髓间充质干细胞中,转染共分4组:正常对照组、脂质体组、增强型绿色荧光蛋白-C1质粒组、增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒组,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与扩增。②人骨髓间充质干细胞转染前后人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及端粒酶活性的检测:通过RT-PCR和PCR-ELISA对选用转染增强型绿色荧光蛋白-人端粒酶逆转录酶质粒的第5代人骨髓间充质干细胞(以下简称为转H人骨髓间充质干细胞第5代)、转染增强型绿色荧光蛋白-C1质粒的第5
- 李克刘瑞敏韩雪飞马岚邢莹
- 关键词：间质细胞端粒逆转录酶
- 生理学教学中指导医学生通过检索提高利用网络资源能力的探讨被引量：2
- 2011年
- 网络资源以高信息量和便捷的特点为医学生的学习提供了有利条件,随着计算机网络和国际互联网的飞速发展,网络已成为学生接受教育与自我教育的新途径之一。但在目前国内高等院校的生理学教学中,教学信息的传递仍然主要依赖于课堂上教师讲解以及经典教科书。
- 段萍景莹
- 关键词：生理学教学自我教育国际互联网
