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山东农业大学动物医学院: 作品数：396 被引量：1,283H指数：18; 相关作者：吕品王方昆吕艳艳张兴晓董宣更多>>; 相关机构：中国农业大学动物医学院西北农林科技大学动物科技学院西北农林科技大学动物医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>

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山东地区禽源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因的检测被引量：18: 2011年; 采用K-B纸片法对224株大肠杆菌进行5种氨基糖苷类药物的药敏试验,采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度(MIC)的测定,三重PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib和aph(3’)-Ⅱa,普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果显示:山东省禽源大肠杆菌对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为84.4%、57.1%、55.8%、46.9%和40.2%;3种钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)和Ib、aph(3’)-Ⅱa的检出率依次为49.6%、25.0%和22.8%,介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%(26/224),只有1株大肠杆菌检测到armA基因,没有检测到rmtA,且3种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0;所检大肠杆菌中携带2种及2种以上耐药基因的菌株占33.5%(75/224),有1株大肠杆菌同时携带4种耐药基因。结果表明,氨基糖苷类钝化酶及16S甲基化酶广泛存在于禽源大肠杆菌菌中,其耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,表明还存在其他耐药机制。; 孙慧雷战邹金峰魏宗王鑫谢之景姜世金; 关键词：大肠杆菌耐药性

我国鸡白血病的流行状况、危害及其防控策略--二十年的经验和教训: 禽白血病病毒(ALV)是一类反转录属病毒，既可横向传播更能通过种蛋垂直传播。20年间“血”的教训使得我国蛋鸡业懂得如何预防控制ALV这一主要通过种鸡传播的肿瘤病并采取了相应坚决的措施，使蛋鸡中的ALV-J问题显著减少。当...; 崔治中; 关键词：鸡白血病流行病学病毒传播疫病防控

鸭甲肝病毒1型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立及其在雏鸭体内动态分布规律的研究: 引言我国鸭病毒性肝炎主要由鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)引起,两种病毒感染雏鸭发病后的临床症状和病理变化非常相似,并且二者在临床症状混合感染情况比较普遍,给该病的正确诊断和防治带来了极大的困难。本研...; 林少莉李井新张瑞华夏琳琳陈君豪谢之景王玉姜世金

LHR基因在济宁青山羊发情周期不同阶段子宫中表达差异的研究被引量：8: 2009年; 从济宁青山羊子宫组织中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增黄体生成素受体(LHR)基因,获得一条286bp的片段,以pGEM-TEasy vector为载体,转染大肠杆菌E.coliDH5α,筛选阳性克隆并测序。采用优化的半定量RT-PCR技术,以山羊GAPDH为分子内参,比较研究了发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫组织中LHR基因的表达差异。结果表明:得到的片段为山羊LHR基因的部分序列,与GenBank中登录的山羊LHR基因(AF379199)41-326 bp序列同源性高达100%。LHRmRNA在整个发情周期的子宫中都有表达。其中,发情期的表达水平最低(0.454±0.06),且与其它时期比较均差异显著(P<0.05),随之在间情期升至最高值(0.705±0.09),尔后在发情前期降至(0.553±0.07)。这一研究结果为山羊的生殖内分泌调控机制研究提供了分子水平的数据。; 申颖王慧王树迎王立芹侯衍猛黄丽波; 关键词：半定量RT-PCR 发情周期济宁青山羊

种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定被引量：19: 2014年; 某祖代种鸡群临床表现正常,在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒(ALV-Ab)和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平,但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维细胞(CEF)后均未分离到病毒。为探明该鸡群是否存在内源性禽白血病病毒(ALV—E)以及能否干扰商品化抗体检测试剂盒的结果判定,将23只种鸡所产种蛋分别孵化后逐一制备成CEF培养,盲传3代后检测到其中1只鸡的细胞培养上清抗原检测为阳性。从该细胞培养上清液提取RNA,RTPCR扩增其gp85基因,序列分析证明该检出病毒为E亚群ALV。将该E亚群ALV接种SPF鸡胚来源CEF后又可检出p27抗原,显示该内源性ALV具备传染性。同时,对该病毒gp85基因进行了原核表达,表达产物免疫鸡后部分鸡血清经ALV—Ab抗体检测试剂盒检测为阳性。本研究分离到1株对CEF具备传染性的内源性ALV-E,并证明其诱导产生的抗体能够干扰对外源性ALV的鉴别诊断,提示在进行临床类似情况的判定时要结合鸡群实际表现做全面分析。; 徐海鹏孟凡峰董宣赵鹏崔治中; 关键词：GP85基因 P27抗原

我国鸡白血病的流行状况、危害及其防控策略被引量：1: 2011年; 禽白血病病毒(ALV)是一类反转录属病毒,既可横向传播更能通过种蛋垂直传播。由禽白血病病毒引起的鸡白血病不仅表现为不同内脏不同组织肿瘤及皮肤血管瘤,更多的感染鸡则仅表现为产蛋下降、免疫抑制或生长缓慢等亚临床表现。在上世纪八十年代以前,对鸡呈致病性禽白血病病毒有A、B,C、D四个亚群。后来在白羽肉用型鸡中又出现了致病性更强的J亚群禽白血病病毒,并迅速蔓延到全球几乎所有的肉用型种鸡群。大多数育种公司由此倒闭,少数公司花巨资基本完成了对J亚型淋巴白血病病毒的净化工作,得以继续维持发展。; 崔治中; 关键词：鸡白血病禽白血病病毒防控策略产蛋下降种鸡群肉用型

鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定被引量：4: 2012年; 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。; 张兴晓邹金峰相琪旺王鑫陈琳谢之景姜世金; 关键词：鸭圆环病毒 IFA

猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4抗体制备与鉴定被引量：2: 2017年; 为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp4的抗体,根据HP-PRRSV TA-12株(Gen Bank Accession No.HQ416720)的nsp4基因序列,设计并合成一对引物。用RT-PCR扩增后克隆到原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组质粒p ET28a-nsp4,转化至Trasseta(DE3),经IPTG诱导重组蛋白获得了高效可溶性表达,大小约为26 k Da。经镍离子亲和柱(Ni+-NTA)纯化获得了高纯度重组蛋白,将纯化的nsp4蛋白免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。ELISA检测抗体效价可达106,Western blotting和IFA检测结果表明所制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应特异性,能够识别PRRSV感染宿主细胞中的nsp4蛋白。本研究成功制备了针对nsp4的多克隆抗体,为进一步研究nsp4的功能及PRRSV致病机制奠定了基础。; 蔡鑫娜谭敏曹胜亮黄艳孙法超商营利刘思当肖一红; 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒 NSP4 多克隆抗体

地方品种皖南黄肉种鸡ALV-J与REV的共感染及其分子变异分析被引量：18: 2011年; 【目的】探讨地方品种皖南黄肉种鸡群中禽白血病病毒(ALV)与禽网状内皮增生病病毒(REV)的感染状态,同时对J亚型ALV(ALV-J)分离株的囊膜糖蛋白基因(env)和非编码区3′UTR序列进行分子变异分析,并对近十年的分离株非保守序列区段进行统计比较,探讨ALV-J分子变异趋势。【方法】取7只300日龄皖南黄肿瘤病鸡分别进行病理组织学观察、IFA检测肝脏组织切片后激光共聚焦观察、细胞培养后的IFA以及PCR方法检测。【结果】7只皖南黄肉种鸡有6只同时感染ALV-J与REV,而且ALV-J和REV已经共感染同一个肝细胞。取2个ALV-J分离株进行env基因与非编码区3′UTR扩增与序列分析,两分离株的env全长均为1 704 bp,3′UTR全长均为400 bp,3′UTR区段rTM和E元件同发生双缺失;3′UTR-E元件与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株比较,基因缺失表现为共性,但3′UTR-rTM基因缺失呈现多样性;5′LTR作为保守序列较之前所有国内外毒株有11 bp缺失。【结论】研究发现,地方品种皖南黄肉种鸡群存在ALV-J与REV的共感染,且呈现普遍性(6/7),表明地方品种鸡高肿瘤发生率与ALV-J、REV共感染密切相关;ALV-J的基因缺失主要集中于3′UTR-E与3′UTR-rTM,3′UTR-E元件基因缺失显示,皖南黄肉种鸡群ALV-J分离株与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株有共同的来源。; 张振杰刘绍琼王波崔治中张永光孙淑红; 关键词：J亚群禽白血病病毒共感染

羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究: 2024年; 为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。; 吴瑶焉鑫孙明军屈海龙郭晓涵闫昊张培培孙世雄李嘉琪孙翔翔刘蒙达张皓博南文龙南文龙邵卫星王方昆樊晓旭; 关键词：布鲁氏菌抗原性免疫原性

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