杭州博林生物技术有限公司 作品数:21 被引量:23 H指数:3 相关机构: 浙江工业大学 艾博生物医药(杭州)有限公司 更多>> 发文基金: 浙江省科技厅项目 浙江省科技计划项目 浙江省科技厅资助项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 理学 化学工程 更多>>
人绒促性素单克隆抗体的制备与分离纯化 被引量:2 2010年 目的制备人绒促性素(hCG)单克隆抗体。方法hCG抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1融合,间接ELISA法筛选阳性孔,有限稀释法进行克隆化培养;制备腹水抗体;间接ELISA法测定抗体效价;采用HiTrap rProtein A FF亲和色谱柱纯化抗体。结果得到2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清中抗体效价达10-3以上,腹水抗体效价达10-7以上,纯化后的单抗纯度达98%以上,回收率达75%。结论成功获得两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,可用于早孕、肿瘤等诊断的研究。 沈泓 易喻 梅建凤 朱克寅 李敏 应国清关键词:单克隆抗体 杂交瘤细胞 hCG单克隆抗体的蛋白A亲和色谱纯化 被引量:1 2010年 建立了亲和色谱法从小鼠腹水中纯化人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体。将含hCG单克隆抗体的小鼠腹水经离心、过滤预处理后,采用蛋白A亲和色谱柱纯化,考察了上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液的pH和流速对抗体纯度及回收率的影响。用间接ELISA法测定纯化后单克隆抗体生物学活性。结果显示,以20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0,含3mol/L氯化钠)为上样缓冲液,0.1mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH3.0)为洗脱液,流速为5ml/min时,hCG单抗的纯度大于98%,回收率为75%。纯化后的单抗效价没有下降。 易喻 沈泓 朱克寅 李敏 应国清关键词:单克隆抗体 人绒毛膜促性腺激素 纯化 金属螯合亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体 被引量:3 2009年 采用金属螯合亲和层析法,纯化了小鼠腹水来源的抗乙肝核心抗原单克隆抗体,对上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液种类和洗脱方式进行优化。结果表明,采用降低pH分步洗脱时,最佳上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+0.5mol/LNaCl,抗体在pH5.0被洗脱下来,抗体回收率80%,纯度85%。采用咪唑浓度梯度洗脱时,最佳的上样缓冲液为pH8.0,20mmol/LPB+5mmol/L咪唑,抗体纯度大于95%,回收率65%;在上样缓冲液中不添加NaCl而添加少量的咪唑,更有利于抗体分离。以上洗脱方式都能较好地保持mAb的生物学活性,为该抗体的应用提供了必要的实验基础。 祝骥 易喻 吴银飞 朱克寅 梅建凤 陈建澍 应国清关键词:金属螯合亲和层析 单克隆抗体 乙肝核心抗原 小鼠腹水 氯霉素单克隆抗体的制备与纯化 被引量:3 2012年 目的制备氯霉素(CAP)单克隆抗体。方法用人工合成抗原氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1的比例融合,间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;制备腹水抗体;采用HiTrap rProtein A FF亲和色谱柱纯化抗体,用间接竞争ELISA法和间接ELISA测定抗体特异性。结果得到两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清中抗体效价达10-4以上,腹水抗体效价达10-7以上,纯化后的单克隆抗体纯度达98%,回收率达80%,抗体活性好并且与BSA、甲砜霉素、磺二甲基嘧啶等无交叉反应。结论成功获得两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,对动物性食品中CAP的检测具有较大的价值。 易喻 汪竹环 朱克寅 李敏 应国清关键词:氯霉素 单克隆抗体 纯化 一种茶碱人工抗原的制备方法 本发明提供了一种茶碱人工抗原的制备方法,第一步为半抗原的制备及检测:用5,6-二氨基-1,3-二甲基脲嘧啶(1)和戊二酸酐反应得到含羧基的半抗原;第二步为人工抗原的制备与检测:通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合... 王百龙 邵越水文献传递 一种丙氧酚人工抗原的制备方法 本发明提供了一种丙氧酚人工抗原的制备方法,第一步为半抗原的制备及检测:以chirald为原料,通过与戊二酸酐的缩合反应,在氮位上引入羧基得到含羧基的半抗原;第二步为人工抗原的制备与检测:通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(B... 邵越水 徐建文献传递 应用蛋白A亲和层析法纯化hCG单克隆抗体 目的建立从小鼠腹水中纯化人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的一步层析法。方法将hCG单克隆抗体的腹水经离心、过滤预处理后,采用HiTraprProteinAFF亲和层析柱纯化,并探讨了上样缓冲液的pH值和离子强度、洗... 沈泓 易喻 梅建凤 朱克寅 李敏 应国清关键词:单克隆抗体 人绒毛膜促性腺激素 纯化 文献传递 一种新型壳聚糖分离介质的制备 被引量:6 2011年 以壳聚糖为载体、液体石蜡为分散介质、戊二醛为交联剂、Span80为乳化剂,采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,以环氧氯丙烷为活化剂、亚氨基二乙酸为螯合配基制备新型壳聚糖分离介质,并研究分离介质制备过程中各参数对壳聚糖分离介质性能的影响。确定最佳活化工艺为:40%DMSO/NaOH(0.6 mol/L)、ECH体积分数10%、反应温度40℃、反应时间4 h,测得环氧基修饰密度可达到0.15 mmol/g(gel);最佳螯合工艺:IDA(0.6 mol/L)/NaOH(2.0 mol/L)混合液,反应时间为6 h,制备的新型壳聚糖分离介质对Cu2+吸附量达到172.787 g/g gel,壳聚糖分离介质含水率为45.60%,孔隙率为69.45%,得到一种新型金属螯合层析填料。 易喻 崔国艳 王鸿 李敏 朱克寅 应国清关键词:壳聚糖 环氧氯丙烷 温敏载体固定化木瓜蛋白酶的特性及其消化HCG抗体的应用 被引量:4 2013年 以温敏性材料N-羟基琥珀酰亚胺活化的聚(N-异丙基丙烯酰胺)为载体制备固定化木瓜蛋白酶,对其酶学性质进行了研究。结果表明:固定化酶的最适pH值为7.5,最适温度为65℃,米氏常数为2.72 mg/mL;经过24次温敏循环操作,剩余相对活力86.6%;在4℃条件下放置60 d,剩余相对活力为71.5%。与游离酶相比,固定化酶pH值稳定性、热稳定性、操作稳定性和储存稳定性都有显著提高。将此固定化酶应用于HCG单克隆抗体消化,与纤维素固定化酶相比,水解能力更强,更适合于大分子的酶解,特别是抗体片段的制备。 梅建凤 黄婷婷 陈建澍 易喻 朱克寅 应国清关键词:木瓜蛋白酶 固定化 聚(N-异丙基丙烯酰胺) 酶学性质 一种丙氧酚人工抗原的制备方法 本发明提供了一种丙氧酚人工抗原的制备方法,第一步为半抗原的制备及检测:以chirald为原料,通过与戊二酸酐的缩合反应,在氮位上引入羧基得到含羧基的半抗原;第二步为人工抗原的制备与检测:通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(B... 邵越水 徐建文献传递