辽宁师范大学生命科学学院生物技术与分子药物研发重点实验室
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 相关机构：扬州大学动物科学与技术学院大连医科大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅课题基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 同源重组敲除Myostatin基因绵羊成纤维细胞的构建
- 肌肉生长抑制素(MSTN)又名GDF-8(转化生长因子)，首次于1997年Mcpherron科研小组在研究TGF-β(转化生长因子超家族)时利用简并PCK法在该家族的保守区域扩增得以发现。将小鼠的Myostatin基因C...
- 孙丹张小宁金梅陆健杜立新魏彩虹张莉路国彬任航行徐凌洋刘佳森张世芳
- 关键词：绵羊MYOSTATIN基因基因敲除
- 谷氨酸信号通路对黑素细胞黑素转运的作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨谷氨酸信号通路在黑素转运中的作用。方法原代培养并纯化黑素细胞及角质形成细胞，免疫荧光显微镜观察离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDARl）和N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（NMDAR2A）在黑素细胞内的分布，共聚焦显微镜观察100μmo]／LNMDAR激动剂NMDA和100μmol／L拈抗剂地卓西平马来酸盐（dizocilpinemaleate，MK801）作用5min和1h后黑素细胞内钙离子浓度的变化以及100μmol／LMK801对黑素细胞内微管蛋白的影响。结果100μmol／LNMDA可使黑素细胞内瞬时钙离子浓度升高，但100μm01]LMK801可使其降低；MK801先作用于黑素细胞5min或1h阻断NMDA受体后，NMDA均不能再次诱导瞬时钙离子浓度升高。共聚焦显微镜观察发现MKS01作用24h后，胞内微管蛋白重新分布聚集于核周。扫描电镜观察发现100μmol／LMK801作用于黑素细胞一角质形成细胞共培养体系48h后，黑素细胞和角质形成细胞之间以及两种细胞表面的丝状伪足数量明显减少。共培养体系下，100μmol/LMK801作用后，角质形成细胞中的黑素含量明显降低，即从黑素细胞向角质形成细胞转移的黑素数量明显减少。结论谷氨酸信号通路对黑素细胞胞内钙离子浓度、微管蛋白分布、黑素细胞伪足形成以及黑素细胞及角质形成细胞间的黑素转运具有一定调节作用。
- 高丽丽刘晶邹伟刘鹏张媛高船舟王楠宋智琦
- 关键词：黑素细胞伪足角蛋白细胞微管蛋白
- 谷氨酸信号通路调控恶性黑素瘤侵袭与增殖的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨谷氨酸信号通路在恶性黑素瘤发病中的作用机制。方法取对数生长期恶性黑素瘤WM451LU细胞，分为6组，①阴性对照组加入100μl的PBS液；②MK801组加入100μmol／LNM—DAR非竞争性拮抗剂MK801；③CPCCOEt组加入10μmol／L代谢型谷氨酸受体1（mGluR1）非竞争性拮抗剂CPCCOEt；④MAP2组加入腺病毒一微管相关蛋白2a（Ad—MAP2a）；⑤MK801＋MAP2组加入100μmol／LMK801和Ad—MAP2a；⑥CPCCOEt＋MAP2组加入10μmol／LCPCCOEt和Ad—MAP2a。用Western印迹观察转染Ad—MAP2a载体后WM451LU细胞中离子型谷氨酸受体甲基一D-天冬氨酸受体2A（NMDAR2A）的变化。并通过细胞迁移、侵袭实验分别研究上调MAP2表达与MK-801、CPCCOEt分别或共同作用下，肿瘤细胞的迁移及侵袭性的变化。同时进行了裸鼠恶性黑素瘤动物模型的体内研究，比较上述药物的体内抑瘤作用。结果Western印迹发现，转染Ad—MAP2a的WM451LU细胞NMDAR2A表达降低。体外迁移实验结果显示，MAP2组发生迁移的细胞为（117．04±2．76）个／高倍视野（HP），MK801组（107．64±6．50）个／HP，CPCCOEt组（97．36±4．79）个／HP，MK801＋MAP2组（43．28±3．02）个／HP，CPCCOEt＋MAP2组（30．76±3．97）个／HP，与阴性对照组（152．3±5．75）个／HP比较，P值均〈0．01。体外侵袭实验结果显示，MAP2组发生侵袭的细胞数为（102．56±3．81）个／HP，MK801组（98．21±5．52）个／HP，CPCCOEt组（118．23±7．96）个／HP，与阴性对照组（178．43±8．75）个／HP相比，P值均〈0．05；MK801＋MAP2组（43．89±5．08）个，HP，CPCCOEt＋MAP2组（58．45±6．88）个／HP，与阴性对照组相比，P值均〈0．01。裸鼠体内研究发现，用药第15天时，MAP2组肿瘤体积为（224．02±46．19）mm^2，MK801组（160．33±33．91）mm^2，MK801＋MAP2组（91．49±21．48）mm^2，CPCCOEt组（202．30±52．37）mm^2，CPCCOEt＋MAP2组（111．13±69�
- 李丽丽单路娟张媛高船舟高海芹高文婷刘越坚宋智琦
- 关键词：黑素瘤细胞系细胞运动
- 谷氨酸信号通路对黑素细胞树突形态的调节作用被引量：1
- 2010年
- [目的]探讨谷氨酸信号通路在黑素细胞中的作用机制。[方法]培养人原代黑素细胞。采用多巴染色法及透射电镜鉴定细胞;以Western Blot方法测定人原代黑素细胞内NMDAR2A的表达。采用扫描电镜观察谷氨酸受体激动剂N-Methyl-D-aspartic acid(NMDA),Quisqualate(Q-LA)和非竞争性拮抗剂MK-801作用下黑素细胞树突形态的变化。[结果]Western Blot实验发现人原代黑素细胞内有NMDAR2A蛋白的表达。扫描电镜观察发现谷氨酸受体激动剂NMDA及Q-LA作用后细胞树突长度明显变短,树突末端明显变宽,二、三级树突增加;谷氨酸受体拮抗剂MK801作用后细胞树突末端明显变窄,二、三级树突减少。[结论]除神经系统外,黑素细胞内存在谷氨酸信号通路,且该信号通路与细胞形态有关。
- 李丽丽单路娟张媛高船舟刘越坚宋智琦
- 关键词：黑素细胞树突
- 绵羊Myostatin基因敲除载体的构建被引量：2
- 2011年
- 根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除载体。利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9 kb,包括全部的exon1,intron1,exon2及部分启动子和大部分intron2;同源短臂1.1 kb,包括部分exon3和3′非翻译区序列,将二者连入PloxpII正负筛选敲除骨架载体,利用骨架载体上Neo基因替代Myostatin基因的exon3,从而成功构建专门针对Myostatin第3外显子区域缺失的置换型敲除载体PloxpⅡ-OVIS-MSTN。酶切和测序鉴定证明载体构建正确,为后续获得绵羊Myostatin基因缺失型体细胞株奠定试验基础。
- 孙丹金梅杜立新魏彩虹张莉路国彬陆健吕延飞
- 关键词：绵羊MYOSTATIN基因基因敲除
- 绵羊MSTN基因真核表达载体的构建及在原代成纤维细胞中的表达
- Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一，通过抑制肌细胞的扩增而调控肌肉的生长和发育。基因敲除MSTN基因的小鼠呈现肌纤维数目增加、面积增大和脂肪数量降低的表型。而MSTN刑...
- 陆健魏彩虹丁家桐李碧春杜立新孙丹任航行徐凌洋刘佳森张世芳张小宁路国彬张莉
- 关键词：绵羊MSTN基因真核表达载体成纤维细胞
- 同源重组敲除MYOSTATIN基因绵羊成纤维细胞的构建
- 关键词：绵羊MYOSTATIN基因敲除
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- 绵羊MSTN基因真核表达载体的构建及在原代成纤维细胞中的表达
- 关键词：绵羊MSTN真核表达载体成纤维细胞
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