南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室
- 作品数：30 被引量：92H指数：6
- 相关作者：胡林朱洁莲赵鹏更多>>
- 相关机构：河南科技大学动物科技学院中国科学院微生物研究所河南科技大学动物科技学院兽医肿瘤免疫学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家生猪现代产业技术体系建设项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 副猪格拉瑟菌6个候选抗原对小鼠的免疫特性分析
- 2023年
- 旨在获得具有良好免疫效果的候选抗原,本研究原核表达了副猪格拉瑟菌6个具有潜在保护力的蛋白,对小鼠免疫后进行攻毒,以期筛选获得具有免疫保护效果较好的候选抗原,从而为开发具有交叉保护作用的副猪格拉瑟菌亚单位疫苗奠定基础。63只BALB/c小鼠随机平均分为9组:HPSNAG-1330、CyaY、HPSNAG-0978、HPSNAG-0140、AfuA以及Fe^(3+)ABC-tbp 6个亚单位疫苗组、G.parasuis-5灭活苗组、攻毒对照组和空白组;亚单位疫苗组每种对应蛋白各免疫50μg·只^(-1),灭活苗组免疫4×10^(9)CFU,一免与二免间隔14 d,二免14 d后攻毒,副猪格拉瑟菌Nakasaki菌株攻毒剂量为1.26×10^(9)CFU。在二免14 d后检测特异性抗体水平、淋巴细胞增殖和IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的表达,攻毒后观察小鼠的临床症状并观察肺、脾的组织病理变化。免疫组小鼠均能产生体液免疫反应;淋巴细胞增殖试验显示:除rAfuA外,其它重组蛋白均能刺激灭活苗组中小鼠淋巴细胞显著增殖(P<0.05),而6个重组蛋白对相应的亚单位疫苗组和空白组小鼠淋巴细胞增殖均不显著;同时,CyaY组和HPSNAG-1330组小鼠机体的炎性反应和脾、肺的损伤程度相对温和,综合评价效果优于灭活苗组。本研究通过小鼠免疫保护试验筛选出CyaY和HPSNAG-1330两个具有免疫保护性的候选抗原,为后续开展多个抗原的联合免疫和猪体试验提供了素材。
- 伭婷杨凯一蔡金双耿琰李玉峰
- 关键词：亚单位疫苗免疫效果评价
- EAEC噬菌体PNJ1809-11和PNJ1809-13作为环境消毒剂的杀菌效果评估被引量：4
- 2021年
- 【目的】分析2株肠聚集性大肠杆菌(EAEC)CVCC232噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性,并对其作为环境消毒剂的杀菌效果进行评估。【方法】透射电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13的形态;通过宿主谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、对pH和温度耐受性的测定分析PNJ1809-11、PNJ1809-13的生物学特性;比较2株噬菌体的体外杀菌效果和喷雾、雾化处理后的杀菌效果;检测噬菌体在模拟养殖环境下的耐受性,及喷雾处理的噬菌体制剂在模拟养殖环境下的杀菌效果和对宿主菌生物被膜的清除效果;分析宿主菌的抗性突变率。【结果】电镜下观察PNJ1809-11、PNJ1809-13均为肌尾病毒科噬菌体;PNJ1809-11可裂解155株大肠杆菌,PNJ1809-13可裂解46株大肠杆菌;噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13的最佳感染复数(MOI)均为10,最适pH均为7;与PNJ1809-13相比,PNJ1809-11具有较好的热稳定性;在模拟的封闭装置中,将两株噬菌体分别经喷雾、雾化处理后,二者对宿主菌的杀灭效果均可达99%以上;对人工污染的粪便表面细菌的杀灭效果均达到99%以上。噬菌体PNJ1809-11、PNJ1809-13及两者的混合制剂(噬菌体鸡尾酒)对宿主菌CVCC232形成的生物被膜的裂解效率分别为78%、30%和83%。噬菌体PNJ1809-11在养殖温度、粪便pH以及阳光照射下,其耐受性均强于PNJ1809-13。宿主菌对PNJ1809-11、PNJ1809-13的抗性突变率分别为2.5×10^(-3)和1.0×10^(-3)。【结论】综上,噬菌体PNJ1809-11的环境耐受力更强,噬菌体鸡尾酒对生物被膜的裂解效果更好,提示噬菌体PNJ1809-13或噬菌体鸡尾酒经喷雾处理后具有作为环境杀菌剂的潜力。
- 钱新杰李一昊曾颃殷晗杰王瑜欣黄豪圣巩倩雯李德志薛峰汤芳戴建君
- 关键词：噬菌体消毒剂耐受性生物被膜
- 塞内卡病毒A VP2蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：3
- 2021年
- 为加强塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的鉴别诊断及流行病学监测。本研究以SVA重组VP2蛋白及其对应的辣根过氧化酶(HRP)标记的单克隆抗体,建立了检测SVA抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后,抗原最佳包被浓度为0.25μg/m L,37℃孵育2 h后4℃过夜;最佳封闭液为1%BSA,37℃孵育1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,37℃孵育1.5 h;酶标单抗最佳稀释度为1∶1000,37℃作用45 min;TMB最佳显色时间为37℃作用10~15 min。本方法的判定标准:当阻断率(PI)≥41.25%时为阳性,PI≤25.29%时为阴性,25.29%
- 孙培培朱慧欣延君芳刘文文姜平白娟
- 关键词：VP2蛋白单克隆抗体阻断ELISA
- 整合禽冠状病毒S糖蛋白的假型鼠白血病病毒
- 假病毒是指一种反转录病毒能够整合另外一种不同种类病毒的囊膜糖蛋白,从而形成具有外源性病毒的囊膜,而基因组保持着反转录病毒本身基因组特性的病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复
- 李鹏郑其升仇妍虹曹瑞兵张秋伟陈德胜陈溥言
- 文献传递
- 法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的基因表达谱及功能分析
- 2021年
- 试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。
- 李彤彤张则陈佳静李陈飞卢安然周广防冯秀丽
- 关键词：基因表达谱通路分析生物学功能
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用被引量：10
- 2019年
- 本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;采用不同滴度的PRRSV测定,当Ct≤32且有明显的指数扩增曲线,判定为PRRSV阳性,Ct>32或者无Ct值则判定为PRRSV阴性。该方法检测下限为1×10^0.5TCID50病毒,高于常规RT-PCR国家标准(GB/T18090-2008),批内和批间变异系数均小于1%。PRRSV人工感染仔猪15份肺脏组织和60份血清样品检测结果均为阳性,SPF仔猪8份肺脏组织和25份血清检测结果均为阴性。采集245份临床仔猪肺脏组织病料检测,PRRSV阳性率为67.35%,明显高于普通RT-PCR检测阳性率(56.33%)。上述结果表明,本方法可用于PRRSV临床病料检测。
- 张杰刘雪威白娟宋中宝姜平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征实时荧光定量PCR
- 疫苗制造新技术被引量：2
- 2002年
- 传统疫苗是用于传染性疾病的,但新技术已将其扩展到非传染性疾病疫苗、治疗性疫苗和生理调控疫苗。本文将使您对各种不同类型的疫苗的主要制造技术、关键问题及其免疫目的有一个全面的了解。
- 姜平丁铲
- 关键词：疫苗免疫学技术活疫苗死疫苗DNA疫苗
- 2011—2017年华东地区猪圆环病毒3型分子流行病学调查被引量：15
- 2018年
- 为了明确我国猪场PCV3流行情况,采用PCR方法对2011—2017年采自山东、浙江、安徽、江苏及江西省的660份临床病料组织进行了PCV3检测。结果显示,PCV3于2011年即存在于我国猪场,阳性率为4.1%,此后呈现上升趋势,2017年阳性率为35.0%,并且冬季最高。对13份PCV3阳性病料的Cap基因进行了测序,进化树分析结果表明,该地区的流行毒株主要属于PCV3a亚型。本研究结果为PCV3的防控研究提供了重要依据。
- 李勇姜辰龙刘刚姜平白娟
- 关键词：PCR分子流行病学种间传播
- 猪白细胞介素21基因的原核表达与多抗血清的制备
- 2015年
- 为了制备猪白细胞介素21(porcine interleukin-21,pIL-21)的多克隆抗体,采用RT-PCR从猪外周血单个核细胞(PBMC)扩增获得pIL-21基因,然后将其克隆至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)之中,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,pIL-21以可溶性蛋白形式表达,分子质量为35ku,具有良好的反应原性。经过Ni-NTA镍离子亲和层析纯化,获得纯化的重组蛋白pIL-21。用其免疫BALB/c小鼠制备抗pIL-21血清抗体。Western-blot分析结果显示,该抗体可与杆状病毒表达的重组Cap-pIL-21、ConA和PHA共刺激的猪PBMC细胞发生特异性反应,ELISA抗体效价可达1∶12 800。上述研究结果为pIL-21的生物学功能研究奠定了重要基础。
- 周雪晨刘星朱雪蛟范宝超白娟姜平
- 关键词：白细胞介素21原核表达多克隆抗体
- 猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白在昆虫细胞中的分泌表达与免疫特性研究被引量：5
- 2019年
- 以猪瘟病毒石门株E2囊膜糖蛋白基因序列为基础,构建了3种重组杆状病毒rAc-E2、rAc-E2oKm和rAc-HE2oKm。Western-blot和间接免疫荧光试验结果显示,这3种重组杆状病毒均可正确表达重组E2蛋白,与E2蛋白和His的单克隆抗体均有良好的抗原反应特性,其中rAc-HE2oKm可分泌表达重组E2蛋白,可形成病毒样颗粒,可诱导免疫仔猪产生高水平抗体和中和抗体,免疫效果与猪瘟活疫苗相当,为猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗研究奠定了重要基础。
- 高莹白娟宋中宝姜平
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗
