哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室
- 作品数:20 被引量:35H指数:3
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- 发文基金:哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目黑龙江省教育厅振兴老工业基地项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
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- 电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5抗血清的制备及特性鉴定
- 2010年
- 目的制备电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5的多克隆抗体,对其特性进行鉴定。方法利用生物信息学方法分析Kv 1.5蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段8个氨基酸序列,据此合成Kv 1.5多肽片段,并将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗Kv 1.5抗血清。辛酸-硫酸铵法纯化抗血清,对纯化后的抗血清进行ELISA、Western blot鉴定。结果成功获得抗Kv 1.5合成肽的抗血清,该抗血清效价为1:64 000,可与Kv 1.5合成肽及天然Kv 1.5蛋白出现特异性反应,该抗血清识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为59 kD。同时,Western blot结果显示,所制备的抗血清能识别大鼠心脏天然Kv 1.5蛋白。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗血清,并且制备的抗血清经ELISA、Western blot鉴定后特异性较好。
- 于学薇李淑珍鄢成伟唐晓波
- 关键词:KV1.5合成肽多克隆抗体
- 高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定
- 2013年
- 目的重组及表达高免疫原性骨桥蛋白(OPN)的融合蛋白。方法使用Lasergene软件分析OPN基因,选取出免疫原性高的区域作为目的片段。提取总RNA,应用逆转录、PCR等技术扩增OPN基因目的片段,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接。构建表达载体,诱导表达OPN融合蛋白(分别含有His,GST—Tag),并进行SDS—PAGE及Western blotting鉴定。结果扩增后获得一条351bp的DNA片段,经测序鉴定为目的片段序列,并实现了可溶性高表达,经Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白。结论采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫原性的OPN融合蛋白,为进一步开发OPN诊断试剂打下基础。
- 汤伟松孟琴刘亮李淑珍唐晓波
- 关键词:骨桥蛋白肝癌
- 川陈皮素对高血压大鼠的血压调节作用及机制被引量:17
- 2019年
- 目的探讨川陈皮素对高血压大鼠的血压调节作用及分子机制。方法使用L-NNA制造内皮损伤型高血压大鼠模型,给予不同浓度的川陈皮素,分别在造模前、造模后、给药14天及给药28天时测量大鼠血压、心率和体重的改变。处死给药28天大鼠,取动脉血,使用ELISA法测量NO、EDHF、ANG-2和PGI2含量。结果川陈皮素给药14天及28天后,高血压大鼠血压明显下调,且ELISA结果显示高血压大鼠动脉血中NO和PGI2的含量增加,但EDHF和ANG-2含量无影响。结论川陈皮素可影响血管内皮细胞功能,提高NO和PGI2的含量,使高血压大鼠血压下降。
- 祁云龙李淑珍朱大岭
- 关键词:川陈皮素高血压大鼠模型舒张因子
- 鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定被引量:2
- 2009年
- 目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。
- 包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭
- 关键词:CD20原核表达融合蛋白抗体制备
- 20-羟基-二十碳四烯酸对肺动脉平滑肌细胞凋亡的抑制效应
- 目的研究20-羟基-二十碳四烯酸(20-HETE)对牛肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的抑制效应。方法采用细胞毒性实验(MTT)测定细胞活力、hoechst 核染色观察细胞核形态、Annexin V/PI 结合测定定...
- 王志刚李郁梅郑晓东郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词:细胞凋亡
- 文献传递
- 抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用
- 2009年
- 目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。
- 吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词:原核表达融合蛋白多克隆抗体
- 非小细胞肺癌生物标记物角蛋白19基因的克隆、表达及纯化被引量:1
- 2013年
- 目的克隆人角蛋白19(CK19)基因,原核表达重组蛋白并纯化,为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础。方法从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA,经RT—PCR合成eDNA,设计特异性的引物,用PCR的方法扩增目的片段,构建pET.32a—CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体,在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化,并进行SDS—PAGE及Westernblot鉴定。结果经PCR扩增后得到一条420bp的DNA片段,构建载体后DNA测序,结果与预期序列一致。初步结果鉴定表明,表达和纯化的融合蛋白,与预期结果一致。结论成功克隆CK19基因,并获得高纯度的CK19融合蛋白,为进一步制备体外诊断试剂打下基础。
- 孙晓林李梅唐佳昕李淑珍唐晓波
- 关键词:非小细胞肺癌克隆纯化
- 15-HETE抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞Kv1.5通道的表达与全细胞钾电流
- 目的证明亚急性低氧通过15-HETE 对 Kv1.5通道的抑制作用导致肺动脉血管收缩。方法使用15-LO 的阻断药(5μmol·LCDC、30 μmol·LNDGA),组织浴槽血管环,逆转灵-聚合酶链反应(RT-PCR)...
- 褚晓杰郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词:15-HETE钾电流
- 文献传递
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定被引量:1
- 2013年
- 目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础。方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450 bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白。结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径。
- 于华实孙晓琳张天竹李梅李淑珍唐晓波
- 关键词:肝癌克隆
- 兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定
- 2009年
- 目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。
- 朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波
- 关键词:重组蛋白多克隆抗体