付元芳
- 作品数：114 被引量：65H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因主要表位区的表达及活性检测
- 2008年
- 根据测定的口蹄疫病毒(FMDV)2C基因序列,设计了一对特异性的表达引物,用于扩增2C基因5′-端174bp和3′-端279 bp连接片段,该区含有较丰富的B细胞表位编码序列。扩增片段通过NcoⅠ和SalⅠ酶切位点插入表达载体pET-30a。序列测定表明,目的基因片段连接正确,按正确的读码框插入表达载体中。重组表达质粒转化BL21(DE3)pLys,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,2C基因主要表位区成功地在大肠杆菌表达,表达产物为约23 ku的融合蛋白,能够与FMDV感染动物血清发生特异性反应,而不与健康和灭活疫苗免疫动物血清反应。该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫转印(EITB)方法提供了所需的材料。
- 付元芳卢曾军田美娜张小丽刘在新才学鹏
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白
- 口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法
- 本发明公开了口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法，包括五种NSP印迹膜条、血清稀释液、25×浓缩PBST洗涤液、膜显色底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、阳性对照血清和阴性对照血清以及20孔血清稀释板；同...
- 卢曾军刘在新付元芳曹轶梅孙普包慧芳李平花白兴文陈应理李冬谢宝霞刘湘涛
- 文献传递
- 一种敲降HS3ST5基因的sgRNA及其敲降载体和应用
- 本发明提供了一种敲降HS3ST5基因的sgRNA及其敲降载体和应用，本发明属于基因敲除技术领域。本发明利用靶向HS3ST5基因的sgRNA构建敲降HS3ST5的重组载体，经过慢病毒包装后，感染BHK‑21细胞系，得到敲降...
- 袁红白兴文卢曾军黄磊宫晓华刘在新孙普李平花包慧芳李冬马雪青陈应理曹轶梅付元芳赵志荀张婧王健
- 三种大肠杆菌表达的口蹄疫病毒A型多表位蛋白对猪的免疫原性比较
- 2019年
- 【目的】研制猪口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)A型多表位蛋白疫苗,为猪FMDV A型的防控提供安全有效的疫苗。【方法】根据前期试验结果及国内外FMDVA型流行病学信息,设计并合成了3种多表位免疫原基因A10、IA10和FA10。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白纯化复性后,制苗免疫猪。分别于免疫前和免疫后14和28d采血分离血清,用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法检测血清IgG抗体滴度。免疫28d后用FMDV强毒攻毒,以评估免疫保护效果。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果证实A10、IA10和FA10三种蛋白均获得表达,分子量分别为35、57和64 kDa,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV感染阳性血清所识别。LPB-ELISA结果表明,A10+201免疫组IgG滴度低于灭活疫苗组,但高于其他免疫组。攻毒后A10+201免疫组和灭活疫苗免疫组全部猪(5/5)获得保护,IA10+201和FA10+201免疫组80%(4/5)猪保护,A10和FA10免疫组只有20%(1/5)猪保护,而PBS+201组所有猪均未保护。【结论】A10+201免疫保护效果较好,可作为候选疫苗进行进一步评价。
- 曹轶梅王兴凯王省李坤付元芳李冬卢曾军刘在新
- 关键词：口蹄疫病毒
- 3B蛋白优势表位缺失的口蹄疫标记疫苗株及其构建方法和应用
- 本发明提供一种3B蛋白优势表位缺失的口蹄疫标记疫苗株及其构建方法和应用，该标记疫苗株3B1和3B2非结构蛋白编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.8所示。本发明构建的疫苗株具有3B1和3B2非结构蛋白氨基酸的突变修...
- 李平花刘在新卢曾军寻广谨孙普白兴文包慧芳曹轶梅付元芳陈应理李冬马雪青张婧
- 文献传递
- A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2022年
- 为了研究A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western-blot与间接免疫荧光试验鉴定其特异性。结果表明,重组SVA VP3蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)以包涵体形式表达,分子质量约为44 ku;制备的家兔多克隆抗体能与SVA表达的VP3蛋白特异性结合,而不与口蹄疫病毒抗原反应,表明制备的SVA VP3蛋白家兔多抗血清具有良好的反应原性和特异性。重组SVA VP3蛋白及其多克隆抗体的成功制备为SVA血清学检测方法的建立、SVA致病机制及VP3蛋白功能的研究提供了材料支撑。
- 马雪青孙婕妤李平花付元芳朵瑞锦杨林张婧白兴文刘在新卢曾军孙普
- 关键词：VP3蛋白原核表达多克隆抗体
- 一种口蹄疫基因工程混合表位疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种口蹄疫病毒混合表位疫苗及其制备方法，该疫苗由四部分组成，由中国型、泛亚、缅甸98三个谱系O型口蹄疫病毒主要中和性抗原表位组成的串联B细胞表位重组蛋白BI，其基因序列为SEQ ID NO：1，氨基酸序列为S...
- 卢曾军刘在新曹轶梅孙普李冬包慧芳李平花付元芳陈白兴文应理谢宝霞
- 文献传递
- VP3 G–H环中氨基酸突变对O型口蹄疫病毒生物学特性的影响被引量：2
- 2019年
- 【目的】为了研究O型口蹄疫病毒VP3 G–H环中氨基酸突变对其生物学特性的影响。【方法】借助口蹄疫病毒反向遗传操作技术平台拯救出2株定点突变体rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C。进行蚀斑形成试验、一步生长曲线的绘制、TCID50和LD50的测定、间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜检测。【结果】结果显示,与骨架病毒rHN相比,虽然rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C对BHK-21细胞的感染性及其蚀斑表型和复制动力学无显著性差异;但rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C对乳鼠的致病力明显减弱,且均获得了小窝蛋白介导侵染CHO-K1细胞的能力。【结论】VP3上第3174位特征性氨基酸突变影响O型口蹄疫病毒感染宿主细胞的毒力及其内吞作用路径,这有助于我们认知VP3 G-H环在口蹄疫病毒粒子立体空间构象中潜在的作用。
- 陈冬冬白兴文宫晓华包慧芳李平花李冬付元芳白启峰袁红孙普马雪青曹轶梅陈应理卢曾军刘在新
- 关键词：VP3定点突变体内吞作用
- 一种用于捕获PRRSV核衣壳蛋白抗体的融合蛋白3AN及其应用
- 本发明提供了一种用于捕获PRRSV核衣壳蛋白抗体的融合蛋白3AN及其应用，属于病毒检测技术领域。本发明提供了一种用于捕获猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白抗体的融合蛋白3AN，氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。试验表...
- 张婧卢曾军李坤孙普王健张海霞白兴文付元芳曹轶梅刘在新
- 文献传递
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3A单克隆抗体的制备和鉴定被引量：6
- 2010年
- 以原核表达并纯化的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3A免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,获得3株能稳定分泌抗3A蛋白单抗的杂交瘤细胞,分别命名为3H2、4B1、7F5,并对这3株单抗进行了生物学鉴定。结果显示,单抗3H2和4B1为IgG2a亚型,7F5为IgG2b亚型。单抗7F5针对的表位与3H2和4B1两株单抗的表位不一致;这3株单抗均能够与FMDV特异性结合,且单抗4B1与所有3A相关蛋白均反应。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。研究结果为进一步探索3A蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。
- 吴磊田美娜卢曾军付元芳孙普刘在新王建科
- 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体
