何晓梅
- 作品数：14 被引量：26H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的高效表达被引量：9
- 2005年
- 目的 提取具有弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)临床分离株的染色体DNA ,PCR扩增弹性蛋白酶基因成熟蛋白编码区,A -T克隆于质粒pMD 18-T载体中,阳性重组子经酶切后连接至相应线性化的表达型载体pQE - 31中,转化大肠杆菌JM 10 9感受态,筛选高效表达株,表达产物经SDS -PAGE初步鉴定。所克隆的基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物经重组质粒测序初步确定为铜绿假单胞菌弹性蛋白酶。本研究为该表达蛋白的纯化、复性和酶动力学研究奠定了基础。
- 黄春基周世文钱桂生何晓梅张克斌
- 关键词：铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因克隆基因表达
- 大型医院综合科研实验室人员生物安全教学的实践与体会被引量：3
- 2014年
- 目前，国内大型医院特别是各医科大学教学医院，纷纷建立自己的中心实验室，为医学科研和研究生培养提供场所，保证大型仪器和专职科研人员等资源的集约式使用，易于形成良好的学术交流氛围，有益于科研产出。但大型实验室由于人员流动性大，所涉及试剂、动物和各种生物标本种类繁多，容易造成各类安全特别是生物安全事件。实验室生物安全是指为避免微生物和医学实验室各种活动中生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施、人员培训及管理措施，以达到对人、环境和社会的安全防护目的的一种综合行为。但目前，在国内进行系统生物安全教学的实验室非常有限，近期，本实验室将实验室生物安全教育作为研究生入室后的培训课程，对研究生们的生物安全和自身防护意识的培养起到了很好效果，现将本实验室的教学实践和体会总结如下。
- 张克斌盛哈蕾何晓梅
- 关键词：实验室生物安全研究生培养自身防护意识
- 人源性exCAR蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人源性柯萨奇病毒-腺病毒受体胞外区蛋白(exCAR),纯化表达蛋白并进行Western-blot-ting鉴定。方法从Hela细胞株中扩增exCAR基因片段,连接至表达质粒pET-28a(+)构建为重组质粒pET-28a-exCAR,转化至大肠杆菌BL21株中,筛选高表达株,诱导表达,利用Ni+株亲和纯化表达蛋白,SDS-PAGE后,转印PVDF膜后,进行Western-blotting鉴定。结果获得纯化的大肠杆菌表达蛋白exCAR,表达形式为包涵体,经Western-blotting鉴定为人源性exCAR蛋白。结论本研究获得了纯化的exCAR表达蛋白,为下一步的蛋白复性和腺病毒感染的阻断实验提供了基础。
- 张克斌周小波光丽霞周世文何晓梅盛哈蕾钱桂生
- 关键词：腺病毒柯萨奇-腺病毒受体胞外区
- 铜绿假单胞菌LexA蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2
- 2006年
- 目的克隆铜绿假单胞菌PAO1株的LexA蛋白编码区,在大肠杆菌中表达并纯化表达蛋白。方法提取铜绿假单胞菌PAO1株基因组DNA,PCR扩增LexA蛋白编码区,A-T克隆于质粒pMD 18-T载体中,阳性重组子经酶切后,回收目的片段连接至相应线性化的表达型载体pET-28a(+)中,重组质粒经测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21感受态,筛选高效表达株,表达产物经SDS-PAGE初步鉴定后,用镍珠吸附一步法纯化,表达蛋白转印PVDF膜后,经N-端测序证实。结果本研究成功克隆到PAO1株的LexA蛋白编码区并在大肠杆菌中获得表达,纯化表达蛋白经N-端测序证实确为PAO1的LexA蛋白。结论研究结果为铜绿假单胞菌PAO1株基因组中SOS盒的实验鉴定及LexA蛋白调控基因的筛选奠定了基础。
- 张克斌周世文光丽霞何晓梅钱桂生
- 关键词：铜绿假单胞菌基因克隆蛋白表达蛋白纯化
- 一种融合蛋白及其融合蛋白表达载体
- 本发明提供一种融合蛋白及其融合蛋白表达载体。该融合蛋白包含人源性柯萨奇病毒-腺病毒受体胞外区与人IgG1的Fc段。该融合蛋白基因序列经密码子优化。该融合蛋白表达载体包含上述的融合蛋白优化后的基因序列和pPIC3.5K质粒...
- 张克斌钱桂生周世文黄春基余华吕胜青盛哈蕾何晓梅熊竣智
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌PAO1株基因组中2个SOS盒序列的初步鉴定
- 2009年
- 目的鉴定铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)PAO1株基因组中的SOS盒序列。方法挑选铜绿假单胞菌PAO1株基因组中16个可能含有SOS盒序列的DNA片段,经PCR扩增后,用纯化的LexA表达蛋白做凝胶滞后实验;将获得的2个阳性DNA片段进一步用DNaseⅠ足纹法进行LexA蛋白结合序列即SOS盒的鉴定;分析所获得的2个SOS盒中的回文序列,以此回文序列在PAO1基因组中进行检索,初步分析出可能的SOS盒序列和可能的调控基因。结果通过DNaseⅠ足纹法初步鉴定了PAO1基因组中2个SOS盒序列,即位于基因组4 052 647～4 052 662 bp位置的CTGTCTACTTATACAG序列和5 349 888～5 349 903 bp位置的CTGTATAAATAACCAG序列,分析其回文结构为"CTG…CAG",以此回文序列在基因组中进行检索,共获得了10个候选的SOS盒序列。结论初步证实了PAO1基因组中的2个SOS盒,并获得了10条SOS盒候选序列。
- 张克斌周世文光丽霞何晓梅盛哈雷张国斌钱桂生
- 关键词：回文序列DNASE
- 小檗碱用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病的药物的用途
- 本发明涉及一种小檗碱用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病的药物的用途。采用本发明所述药物治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病，具有抗CVB3作用，抑制促炎因子和趋化因子的表达效果明显，可用于制备治疗病毒性心肌...
- 张克斌代黔钱桂生周世文余华张迪何晓梅熊浚智辛榕谢玮
- 文献传递
- 人源性exCAR原核表达蛋白体外阻断腺病毒感染实验研究
- 2009年
- 目的在培养乳鼠心肌细胞上检测人源性柯萨奇病毒-腺病毒受体胞外区(exCAR)大肠杆菌原核表达蛋白阻断腺病毒感染的活性。方法纯化人源性exCAR表达蛋白并通过透析复性,进一步体外实验,在腺病毒感染乳鼠心肌细胞模型上检测表达蛋白阻断腺病毒感染效率。结果获得纯化表达蛋白exCAR,经复性后,在体外实验中检测到其阻断腺病毒感染心肌细胞效应,其终浓度为500ng/mL时,获得最高阻断效率约75%。结论本研究获得了具有生物活性的exCAR表达蛋白,为腺病毒感染防治提供了新的思路和基础。
- 张克斌周小波光丽霞周世文何晓梅盛哈蕾钱桂生
- 关键词：腺病毒柯萨奇-腺病毒受体胞外区
- 二甲双胍用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎药物的用途
- 本发明涉及一种二甲双胍用于制备治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病药物的用途。采用本发明所述药物治疗柯萨奇病毒B3所致病毒性心肌炎疾病，具有抗CVB3病毒复制的作用，改善心肌功能，抑制心肌炎症及纤维化效果明显，可用于制...
- 张克斌谢玮王蕾周小波代黔钱桂生周世文余华何晓梅熊浚智辛榕
- 文献传递
- 采用Red重组系统敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因被引量：7
- 2013年
- 目的敲除铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,获得无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株。方法采用PCR从pKD46质粒上扩增λ噬菌体的Red重组酶基因,并将其克隆到大肠杆菌和铜绿假单胞菌穿梭质粒pUCP多克隆位点上,电击转化铜绿假单胞菌PAO1感受态细胞,构建PAO1/pUCP-Red基因敲除体系。常规基因操作构建两端与弹性蛋白酶基因上、下游同源,中间为庆大霉素抗性基因的线性打靶片段;并将其电击转化pUCP-Red/PAO1感受态;采用庆大霉素和羧苄青霉素抗性平板初步筛选阳性重组菌;通过PCR、RT-PCR及弹性蛋白酶活性检测方法,鉴定菌株弹性蛋白酶基因的敲除情况。结果本研究通过构建Red重组系统,获得了无弹性蛋白酶活性的铜绿假单胞菌菌株。结论本研究成功敲除了铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,所获无弹性蛋白酶活性的菌株将为系统深入研究弹性蛋白酶在铜绿假单胞菌致病性中的详细作用机理提供材料和基础。
- 余华熊浚智何晓梅盛哈蕾蔡文强谢玮张克斌
- 关键词：铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因敲除RED重组系统
