冯丽玲
- 作品数：33 被引量：78H指数：5
- 供职机构：广州中医药大学热带医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人细胞因子基因在转基因中药细胞中的瞬时表达被引量：9
- 2003年
- 目的 利用转基因中药表达人细胞因子基因 ,探讨培育基因修饰 (GM)中药的可行性。方法 将体外扩增分别获得的人 α-干扰素基因与 RANTES基因酶切回收后插入中间载体 ,用 Eco R 和 H ind 双酶切鉴定重组子。由大肠杆菌分离重组质粒并导入根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens,通过加入卡那霉素 (Km)和利福平(Rif)筛选含重组双元载体的转化子 ,用叶盘共培养法转化苦瓜和夏枯草外植体。结果 经 RT- PCR检测到人 α-干扰素基因与 RANTES基因在中药转化愈伤组织中的瞬时表达。结论 首次报道了重组人 α-干扰素基因与RANTES基因在转基因苦瓜和夏枯草细胞中的表达 ,为探讨利用转基因中药抗病毒尤其是抗艾滋病开创了新途径。
- 曾庆平冯丽玲杨瑞仪符林春郭兴伯
- 关键词：RANTES基因
- 黄花蒿Dbr2基因的分离与诱导表达特性分析
- 2011年
- 目的：从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶——青蒿醛双键还原编码基因（Dbr2）并研究其表达特性，藉此探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径。方法：采用PCR法从黄花蒿总RNA中分离Dbr2基因编码序列，并采用实时荧光定量PCR法定量检测Dbr2基因在多种人工模拟环境中的转录表达模式。结果：从黄花蒿中分离出1179bp的Dbr2基因编码序列。经过低温、紫外辐射、淹水、脱水、复水、真菌诱激子、葡萄糖、水杨酸处理，Dbr2 mRNA水平分别提高2.5、3.7、10.8、6.0、34.5、28.7、6.3和8.5倍。结论：黄花蒿Dbr2基因可能具有环境诱导表达特性。
- 杨瑞仪杨雪芹冯丽玲曾庆平
- 关键词：黄花蒿青蒿素
- 人RANTES基因在转基因青蒿植株中表达的测定被引量：9
- 2004年
- 目的 为了增强青蒿的特异药理活性,探讨人β-趋化因子RANTES基因在青蒿细胞中表达的可能性。方法 将克隆的RANTES基因经Ti质粒衍生的双元表达载体pROKII导入根癌农杆菌LBA4404菌株,通过叶盘共培养法已获得一批表现卡那霉素抗性的转基因青蒿植株。结果 PCR和Southern印迹杂交分析表明,RANTES基因已导入并整合到青蒿基因组中;RT-PCR、Northern印迹、Western印迹杂交结果证实,RANTES基因已在转基因青蒿植株中成功表达。结论 首次报道了RANTES基因在转基因青蒿植株中的表达,为基因工程改造青蒿打下了良好的基础。
- 冯丽玲曾庆平杨雪芹
- 关键词：青蒿RANTES基因
- 恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因克隆、可溶性表达及突变体活性分析
- 2007年
- 为了建立以代谢酶类为靶点的新型抑制剂乃至抗疟药高通量筛选和体外评价平台,从恶性疟原虫海南株FCC1中扩增出乳酸脱氢酶基因(PfLDH)。利用融合表达载体pGEX-2TK和pET-29a(+)将PfLDH基因导入大肠杆菌BL21和BL21(DE3)中高效表达,结果成功地在菌体裂解上清液中检测到高酶促活性的PfLDH。以pGEX-2TK为载体的PfLDH基因主要以包涵体形式表达,以pET-29a(+)为载体的PfLDH基因则能大量表达可溶性PfLDH,表明后者更适合用来大量制备重组PfLDH。同时,根据SDS-PAGE图谱并结合序列分析结果,对基因扩增中随机产生的PfLDH截短序列进行了筛选和克隆,从中获得4个携带终止突变并分别编码45、80、149和263个氨基酸残基的“提早成熟”基因PfLDH-Δ271、-Δ236、-Δ167和-Δ53。通过基因表达及酶促活性测定,评价了提前终止突变对PfLDH活力的影响,为探讨PfLDH结构与功能的关系提供了依据。
- 徐小玲杨瑞仪杨雪芹冯丽玲曾庆平
- 黄花蒿ADS启动子的分离及表达特性分析被引量：1
- 2011年
- 目的:从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶——紫穗槐二烯合酶编码基因(ADS)的启动子序列并研究其表达特性,藉此探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径。方法:采用PCR法从黄花蒿DNA中分离ADS 5'端非翻译区(5'UTR)序列,构建与GUS报告基因融合的植物表达载体,通过农杆菌介导转化烟草。GUS组织化学染色法和分光光度法分别定性和定量检测ADS 5'UTR序列调控GUS基因在正常条件和胁迫条件下的表达。结果:从黄花蒿中分离出2 448 bp的ADS 5'UTR序列,获得与GUS基因融合表达的转基因烟草并检测到GUS活性。GUS活性定量检测结果显示,在4℃和紫外辐射条件下,转化烟草GUS活性分别提高1.6,2.2倍。结论:从黄花蒿分离出的ADS 5'UTR序列具有启动子功能并且可能具有环境诱导表达特性。
- 杨瑞仪杨雪芹冯丽玲曾庆平
- 关键词：黄花蒿ADS启动子青蒿素
- 大肠杆菌CodA基因表达赋予转基因青蒿负选择表型被引量：1
- 2005年
- 目的为了验证CodA基因是否适宜作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。方法用PCR法扩增大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因CodA,经克隆和测序后插入植物基因表达载体pROK,并导入根癌农杆菌LBA4404(pAL4404)中。以共培养法转化青蒿叶盘,在添加25μg/mL卡那霉素(Kan)的N6培养基上选择青蒿转化愈伤组织并再生绿芽。将Kan抗性转基因青蒿芽转植到含有500μg/mL5-氟胞嘧啶(5-FC)和25μg/mLKan的MS培养基上继续培养2周。结果转基因青蒿芽全部死亡,而未转化青蒿芽仍正常生长,表明导入CodA基因的青蒿细胞已赋予其预期的负选择表型。经RT-PCR检测,转基因青蒿芽显示CodA阳性扩增带,而未转化青蒿芽无此特异扩增带。这一结果显示,CodA基因已在青蒿细胞中转录生成相应的mRNA,从而进一步印证了表型检测结果。结论CodA基因可作为有效的青蒿基因打靶负选择标记。
- 冯丽玲杨瑞仪杨雪芹曾庆平
- 关键词：青蒿基因打靶负选择
- 重组人β趋化因子RANTES基因融合表达产物活性分析被引量：1
- 2002年
- 为研制基于病毒受体的抗艾滋病毒感染基因药物 ,将重组人 β趋化因子RANTES基因导入大肠杆菌中表达谷胱甘肽S 转移酶 (GST) RANTES融合蛋白 ,并回收携带末端延伸肽 (TEP)的RANTES修饰蛋白 .荧光免疫化学分析表明 ,2种非天然RANTES蛋白均显示对人外周血淋巴细胞的结合活性 .暗示在细胞表面可能已发生RANTES与CCR5之间的相互作用 .2种修饰RANTES蛋白都能使人外周血细胞的过氧化物酶活性显著升高 ,提示这 2个人造蛋白可能仍存在对淋巴细胞的趋化性诱导 .
- 杨瑞仪冯丽玲曾庆平
- 关键词：受体结合艾滋病RANTES活性分析
- 金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2作用研究被引量：2
- 2019年
- 【目的】探讨金翘片体内抗甲型H3N2流感病毒及禽流感病毒H9N2的作用。【方法】分别以甲型H3N2流感病毒与禽流感病毒H9N2感染小鼠为模型,以小鼠肺指数及肺指数抑制率为评价指标,考察金翘片抗甲型H3N2流感病毒及抗禽流感病毒H9N2的作用,并观察金翘片的解热、镇痛、抗炎作用。【结果】金翘片具有明显的抑制甲型H3N2流感病毒致肺病变作用(P <0.05或P <0.01),抑制率随剂量增大而增大,呈量效关系;同时也对禽流感病毒H9N2感染鼠肺病变表现出明显的抑制作用(P<0.01)。并具有显著的解热、镇痛、抗炎作用。【结论】金翘片在体内具有显著的抗甲型H3N2流感病毒、抗禽流感病毒H9N2及解热、镇痛、抗炎作用。
- 张美义何家靖杨子峰杨兆丽杨家庆詹利之曾庆慕冯丽玲李国桥朱宇同
- 关键词：小鼠
- 基因工程酵母全合成青蒿素的策略
- 2010年
- 目的 构建青蒿细胞色素P450单加氧酶（CYP71AV1）和青蒿醛△11（13）双键还原酶（DBR2）基因酵母表达载体,为在微生物体内重建青蒿素合成途径打下基础.方法 采用PCR扩增、片段连接表达载体、转化大肠杆菌、双酶切和序列分析鉴定重组子,并将CYP71AV1-DBR2双基因表达载体导入酵母菌中.结果 分别获得1488 bp的CYP71AV1基因和1246 bp的DBR2基因,构建了重组子pESC-CYP-DBR2,测序结果与GenBank上已登录的相应基因序列吻合,将其导入酵母菌后,已检测到它们的表达.结论 成功构建了青蒿素前体合成基因的酵母表达载体,为下一步培育青蒿素全合成酵母工程菌打下了基础.
- 曾丽香冯丽玲
- 关键词：青蒿基因克隆酵母
- 青蒿反义鲨烯合酶基因转化培育青蒿素高产植株的研究
- 青蒿素是由我国科研人员自主研发并为国际所公认的一种抗疟有效单体。野生青蒿中青蒿素含量过低，难以满足疟疾治疗中对青蒿素的迫切需求。由于常规育种在青蒿素高产方面的作用有限，因此在青蒿素合成代谢途径已被阐明的情况下，通过基因工...
- 冯丽玲
- 关键词：青蒿素转基因植株冷胁迫基因转化
- 文献传递
