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利用绿色荧光蛋白建立包涵体变-复性新方法被引量：2: 2010年; 为提高常规稀释复性方法的复性效率,以重组绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)包涵体为模型,开发一种新的双变性-稀释复性方法。新方法选取含有精氨酸的碱性复合溶液作为第一变性剂溶解GFP包涵体,通过梯度降低变性液的酸碱度析出溶解目的蛋白,再以尿素为第二变性剂溶解析出的蛋白,随后进行稀释复性。结果显示:与常规方法比,新方法复性的绿色荧光蛋白活性收率提高至1.5～2.3倍,复性蛋白对温度、溶液酸碱度及变性剂的稳定性提高。增强型绿色荧光蛋白(enhanced GFP,EGFP)及其融合蛋白的包涵体采用新方法进行复性,均取得80%以上的活性回收率,说明新方法对GFP系列融合蛋白的包涵体具有一定的适用性。新方法从变性剂使用与包涵体结构的关系出发,突破常规操作中变性剂单次使用的局限,既保留了简便性又提高了常规稀释复性方法的效率。; 张颋冯延叶沈亚领金维荣杨忠王菊芳王小宁; 关键词：大肠杆菌包涵体复性绿色荧光蛋白

MMP-12蛋白包涵体复性时折叠状态核磁共振图谱与荧光光谱研究被引量：1: 2012年; MMP-12是癌症治疗药物靶标.为了更好研制新药,需要大量制备MMP-12,但MMP-12在大肠杆菌中以包涵体形式表达.因此如何优化蛋白复性过程是大量获取MMP-12蛋白的关键.采用核磁共振、稳态荧光法、外源性ANS(8-anilinol-naphthalenesulfonic acid)荧光探针三种方法监控MMP-12变性蛋白的再折叠过程,以探究其复性折叠机制.研究发现MMP-12再折叠中点值与对应的尿素浓度几乎相等(Cm≈4,mid-point of transition).不同尿素浓度中MMP-12的二维1H-15NHSQC(heteronuclear single quantum correlation)谱图显示,尿素浓度从4mol/L降低到3mol/L是MMP-12蛋白复性折叠的关键步骤.据此我们将MMP-12蛋白复性从常规的梯度透析复性方法改进成等容透析复性法(即确保尿素从4mol/L到3mol/L的浓度变化缓慢),实现复性收率提高一倍.; 张琳琳冯延叶蓝文贤曹春阳徐殿胜杨忠; 关键词：核磁共振稳态荧光 MMP-12

变性蛋白复性装置及复性方法: 本发明提供了变性蛋白复性装置及复性方法。具体地，本发明的变性蛋白复性装置包括：变性蛋白复性釜；超滤模块；柱复性模块；用于驱动液体流动的数控泵；用于控制液体流向的电磁阀门；用于检测溶液状态的在线检测器；以及与所述数控泵、电...; 冯延叶杨忠王小宁; 文献传递

变性蛋白复性装置及复性方法: 本发明提供了变性蛋白复性装置及复性方法。具体地，本发明的变性蛋白复性装置包括：变性蛋白复性釜；超滤模块；柱复性模块；用于驱动液体流动的数控泵；用于控制液体流向的电磁阀门；用于检测溶液状态的在线检测器；以及与所述数控泵、电...; 冯延叶杨忠王小宁; 文献传递

Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系: 本发明属于分子生物学和生物技术领域，具体为一种人工合成的Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系。该表达体系包括表达载体和Cry1Ac-a蛋白基因片段，所述基因片段根据大肠杆菌密码子偏爱性进行优化而获得，优化后的Cry1A...; 宋志平覃晓萍肖满秋冯延叶杨忠

可溶性预测模型在包涵体复性中的应用被引量：5: 2009年; 目的研究包涵体复性后可溶性的预测方法,区分复性类型,提高复性效率。方法利用可溶性预测模型对43个疾病相关重组蛋白的表达进行预测,并采用双变性-复性方法对表达形成的包涵体进行复性。结果预测有可溶性表达倾向的14个蛋白表达的包涵体,复性后均收率高、可溶性好。预测为高不溶性表达倾向的29个蛋白,表达的包涵体复性后高收率与低收率并存,对这两种收率包涵体特性的统计学分析显示理论等电点间存在显著性差异(P<0.05)。结论可溶性预测模型可以应用于区分包涵体复性类型,预测复性后蛋白可溶性,为提高复性效率提供了新方法。同时提示蛋白的理论等电点在模型应用中有重要作用。; 张颋王菊芳冯延叶杨忠马骊王小宁; 关键词：蛋白表达包涵体复性

Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系: 本发明属于分子生物学和生物技术领域，具体为一种人工合成的Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系。该表达体系包括表达载体和Cry1Ac-a蛋白基因片段，所述基因片段根据大肠杆菌密码子偏爱性进行优化而获得，优化后的Cry1A...; 宋志平覃晓萍肖满秋冯延叶杨忠; 文献传递

变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究: 在后基因组时代,蛋白质结构和功能的研究常需要大量的活性蛋白。大肠杆菌仍然是目前最常用的外源蛋白表达系统。但外源蛋白在大肠杆菌中大多表达为不可溶的包涵体蛋白,从而限制了蛋白质科学研究。因此,从包涵体中获取有活性的目的蛋白是...; 冯延叶; 关键词：蛋白质包涵体复性; 文献传递

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冯延叶