刘丹妮
- 作品数：18 被引量：12H指数：3
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 克氏担孢酵母脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达被引量：4
- 2015年
- 以克氏担孢酵母V3脂肪酶基因为研究对象,构建毕赤酵母稳定的高效表达系统。采用同源克隆法从克氏担孢酵母V3中获得一个脂肪酶基因,并将其构建到表达载体pPICZαA,转入毕赤酵母X33中,成功实现了克氏担孢酵母V3脂肪酶基因在毕赤酵母X33中的表达。重组工程菌摇瓶培养120 h后,酶活力可达18 U/mL。重组酶的最适反应温度为60 ℃,最适pH值为5.0。1 mmol/L的Mg2+、K+和Na+以及质量浓度为1 g/100 mL的曲通-100、吐温-80、吐温-20对重组KLIP具有激活作用。重组酶的最适底物为三硬脂酸甘油酯(C18)。
- 王建荣刘丹妮李鹏李阳源
- 关键词：脂肪酶毕赤酵母
- 热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Arg59Ser/Gly60Glu/Ser61Asn及基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Arg59Ser/Gly60Glu/Ser61Asn及基因和应用。其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，突变体TTL‑Gly60Glu在80℃水...
- 夏雨李阳源王建荣刘丹妮杨玲
- 文献传递
- 脂肪酶突变体TTL-Arg59Ser/Gly60Glu/Ser61Asn/Ile62Val及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Arg59Ser/Gly60Glu/Ser61Asn/Ile62Val及其基因和应用。其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，突变体TTL‑Gly...
- 李阳源周银华王建荣李天碧刘丹妮
- 文献传递
- 脂肪酶变体Ala36Ser/Asp49His/Ala52Val/Asn55Asp
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Ala36Ser/Asp49His/Ala52Val/Asn55Asp及其基因和应用。所述脂肪酶TTL突变体TTL‑Ala36Ser/Asp49...
- 周银华李阳源刘丹妮王建荣夏雨杨玲
- 脂肪酶变体Ala36Ser/Asp49His/Ala52Val/Asn55Asp
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Ala36Ser/Asp49His/Ala52Val/Asn55Asp及其基因和应用。所述脂肪酶TTL突变体TTL‑Ala36Ser/Asp49...
- 周银华李阳源刘丹妮王建荣夏雨杨玲
- 文献传递
- 一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Ser61Asn及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Ser61Asn及其基因和应用。所述脂肪酶TTL突变体TTL‑Ser61Asn的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，突变体TTL‑Ser61...
- 周银华夏雨刘丹妮杨玲李阳源
- 文献传递
- 一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu及其基因和应用。所述脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。突变体TTL‑Gly60...
- 周银华刘丹妮夏雨王建荣杨玲李阳源李天碧
- 文献传递
- 一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL-Gly60Glu/Ser61Asn及其基因和应用
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种热稳定性提高的脂肪酶TTL突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn及其基因和应用，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。突变体TTL‑Gly60Glu/Ser61Asn在80...
- 周银华杨玲刘丹妮李天碧夏雨李阳源
- 文献传递
- 雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究被引量：7
- 2014年
- 采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA-rnl。将表达载体pPICZαA-rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达,重组菌株摇瓶培养144 h后,酶活可达48 U/mL。重组酶最适pH值为8.5,最适反应温度为35℃。1 mmol/L的Mn2+,Ca2+和K+以及1%的表面活性剂吐温20,吐温80,曲通100对重组脂肪酶具有激活作用。重组酶的最适底物为三月桂酸甘油酯(C12)。
- 王建荣刘丹妮李鹏刘金山周平发陈丽芝聂金梅钟开兴李阳源
- 关键词：脂肪酶
- 密码子优化及透明颤菌血红蛋白共表达提高耐热脂肪酶在毕赤酵母的表达被引量：1
- 2016年
- 根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因(tll)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(tll-opt)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb-opt)中碱基GC含量分别由原来的46%提高到49%和42%提高到51%,碱基A、T、C、G均匀分布,减少了AT和GC富集区,利于tll-opt和vhb-opt基因在毕赤酵母X33中的表达。将tll和tll-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。摇瓶培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为7 U/m L和16 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为201 U/m L和430 U/m L。为了进一步提高含tll-opt重组工程菌的表达酶活性,将vhb-opt转入该重组工程菌得到工程菌VHb^+(含有tll-opt和vhb-opt)。重组工程菌VHb+在摇瓶培养条件下最大酶活力为23 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.39倍和3.28倍。重组工程菌VHb+在50 L发酵罐瓶培养条件下最大酶活力为610 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.41倍和3.03倍。
- 王建荣刘丹妮夏雨杨玲刘金山唐业陈丽芝黄佳乐李阳源
- 关键词：密码子优化脂肪酶透明颤菌血红蛋白高密度发酵
