刘仲凤
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- Iloprost对猪早期胚胎体外发育的影响被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在探讨PGI2类似物iloprost对猪胚胎体外发育的影响。试验以IVF胚胎为研究对象,分别在不同时期(0、24、48、72h)将不同浓度(0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol.L-1)iloprost加入到猪胚胎培养液中,于156h时记录囊胚发育率和囊胚细胞数,筛选获得最佳添加方案,检测胚胎脂肪代谢速度和代谢相关基因(cox2、creb、pparδ、pdk、cpt2)的表达水平,分析iloprost影响胚胎发育的机制。结果显示,最佳的添加方案为,在受精后48h加入2.0μmol.L-1 iloprost,胚胎囊胚发育率(28%)和囊胚细胞数(49.42)显著高于(P<0.05)对照组的囊胚发育率(16%)和囊胚细胞数(28.22);添加iloprost后,胚胎脂肪酸降解速度也显著加快(P<0.05),脂肪酸代谢相关基因cox2、creb、pparδ、cpt2的表达量上升,糖代谢相关基因pdk表达量无显著变化。结果表明,PGI2类似物iloprost可以促进胚胎降解脂肪酸,为胚胎发育提供能量,提高了胚胎体外发育能力。
- 王峰刘仲凤史春荣张朔吕明孔庆然刘彪刘忠华
- 关键词：PGI2胚胎体外发育脂代谢
- 不同激活条件及半胱氨酸处理对猪ICSI胚胎发育影响研究被引量：2
- 2010年
- 本试验探讨了不同辅助激活方法(Calciumionophore A23187激活、Calciumionophore A23187+6-DMAP联合激活和电激活)、不同精子预处理方法(液氮冻融处理和0.1%Triton X-100处理)和在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养不同时间(0 h、4 h、12 h和168 h)对猪卵母细胞内单精子注射(ICSI)胚胎体外发育的影响。结果显示:与无辅助激活相比,A23187+6-DMAP联合激活和电激活均能显著提高ICSI卵母细胞的激活率、卵裂率和囊胚率(P<0.05),A23187+6-DMAP联合激活能显著提高ICSI卵母细胞的受精率(P<0.05)。液氮冻融精子组ICSI卵母细胞的雄原核形成率显著高于活精子组(P<0.05)。在添加半胱氨酸的胚胎培养液中培养4 h的ICSI卵母细胞受精率、雄原核形成率和囊胚率显著高于0 h组(P<0.05)。以上结果表明,猪卵母细胞在ICSI后需要辅助激活来启动胚胎顺利发育,A23187+6-DMAP激活效果较好。液氮冻融精子可以促进ICSI后雄原核的形成。半胱氨酸处理4 h对猪ICSI卵母细胞受精和发育均有促进作用。
- 孙爽王媛刘仲凤吕明王峰刘忠华
- 关键词：ICSI
- 猪植入前胚胎体外培养条件的优化被引量：3
- 2009年
- 探讨了更换胚胎培养液及添加FBS、高渗透压和不同浓度VE对猪卵母细胞体外受精(IVF)和孤雌激活(PA)胚胎体外发育的影响,进一步优化了猪植入前胚胎体外培养体系。试验一:在第2天、第4天更换新的培养液(换液组),在换液基础上第4天更换为添加10%FBS的培养液(FBS组)。试验二:胚胎分别在0.05 mol/L蔗糖(蔗糖组)和138 mmol/L氯化钠(氯化钠组)的PZM-3(300~320 mOsmol)中培养2 d后移至PZM-3(288 mOsmol)中培养5 d。试验三:在培养液中分别添加50、100和200μmol/L VE。对照组均在PZM-3(288 mOsmol)中培养7 d。结果表明:试验一,IVF和PA胚胎FBS组囊胚率显著高于对照组和换液组(P<0.05);试验二,IVF胚胎氯化钠组卵裂率、囊胚率均显著高于对照组与蔗糖组(P<0.05);试验三,IVF胚胎添加100μmol/L VE组囊胚率显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,在换液的基础上添加FBS有利于猪IVF和PA胚胎的体外发育;氯化钠调节的高渗透压可以促进猪IVF胚胎的早期发育;添加100μmol/L VE可以改善猪IVF胚胎的体外发育体系。
- 王媛孙爽刘仲凤吕明王峰郇延军周佳勃刘忠华
- 关键词：FBS渗透压体外受精孤雌激活
- TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育影响被引量：3
- 2011年
- 曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂。有研究表明TSA处理可以提高核移植胚胎的发育率。为探讨TSA对猪核移植胚胎发育的作用,试验重点研究了TSA浓度及处理时间对核移植胚胎体外发育的影响,同时也探索了TSA对不同供核细胞构建的重构胚体外发育的影响。结果表明,40nmo·lL-1的TSA处理核移植胚胎可以显著提高其体外囊胚发育率;40nmo·lL-1TSA处理重构胚12和24h,两组重构胚的卵裂率与囊胚发育率差异不显著;40nmo·lL-1TSA处理12h对不同供核细胞构建的重构胚均具有提高囊胚发育率的效果,不同供核细胞所构建的重构胚发育率无显著差异。由此可知,40nmo·lL-1TSA处理12或24h可以提高猪体细胞核移植胚胎体外发育能力。
- 黄波郇延军石永乾王峰何文腾张鑫淼刘仲凤朱江吕明刘忠华
- 关键词：曲古抑菌素A体细胞核移植体外发育
- TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达被引量：6
- 2011年
- 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。
- 孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华
- 关键词：TSA体细胞核移植胚胎发育外源基因表达
- 卵泡直径对猪卵母细胞胞质成熟的影响
- 获取高质量的体外成熟卵母细胞是成功进行哺乳动物体外受精、胚胎生产和克隆的关键,在体内,卵母细胞的受精与发育能力是伴随着卵泡由小到大的生长过程逐渐获得的,由此推测卵泡直径可能是卵母细胞体外成熟质量的关键性影响因素。因此本文...
- 刘仲凤
- 关键词：卵母细胞
- 猪不同直径卵泡内卵母细胞胞质成熟及体外发育潜力差异原因的初探被引量：3
- 2014年
- 试验根据直径将猪卵泡分为2组：G1组（4~7mm）和G2组（2~4mm）,对2组卵泡内获取的卵母细胞体外成熟率和发育潜能进行了比较,利用相对定量PCR检测了卵丘细胞中卵丘扩展相关基因Has2、Ptgs2、Ptx31及Pgr的表达水平,应用绝对定量PCR检测了成熟培养前后卵母细胞线粒体拷贝数,并利用5,5′-二巯基-2-硝基苯酸（DTNB）酶循环法检测了体外成熟培养过程中卵母细胞谷胱甘肽（GSH）的含量。结果显示,G1组和G2组卵母细胞体外成熟率分别为95.06%和68.19%,G1和G2组排出第一极体的成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚率分别为51.47%和29.44%,2组卵母细胞在体外成熟率和孤雌发育率上均差异显著（P〈0.05）。G1组卵丘细胞在体外成熟培养过程中的扩展程度明显高于G2组,G1组卵母细胞对应的卵丘细胞扩展相关基因Has2、Ptgs2、Ptx31、Pgr的表达水平高于G2组（Has2基因在卵母细胞成熟培养0、24h除外）;G1组卵母细胞线粒体数、谷胱甘肽含量均高于G2组。以上结果表明,大卵泡来源的卵母细胞体外成熟能力和发育潜力优于小卵泡来源的卵母细胞,这可能与卵母细胞成熟过程中卵丘扩展程度、卵丘扩展相关基因表达激活情况、卵胞质内谷胱甘肽含量和线粒体拷贝数有关。
- 焦明霞刘仲凤王峰刘世超格日乐其木格周洋孔庆然尹智郭诗萌刘忠华
- 关键词：猪卵母细胞体外成熟发育潜力谷胱甘肽线粒体
