吴萌
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项陕西省教育厅省级重点实验室科研与建设计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人端粒酶逆转录酶永生化MRC-5细胞方法的建立被引量：2
- 2015年
- 目的 通过携带人端粒酶逆转录酶（hTERT）的慢病毒颗粒转染法,制备可用于人巨细胞病毒（HCMV）培养的永生化MRC-5细胞.方法 以携带hTERT基因的质粒pLXSN-hTERT为分子基础,通过PCR构建慢病毒载体质粒pLVX-EFl a-hTERT.pLVX-EF1 a-hTERT质粒与Lenti-X HTXPackaging Mix2混合后转染293T细胞,并经Real-time PCR定量所获得的慢病毒颗粒,在慢病毒原液感染MRC-5细胞后连续传代获得永生化的MRC-5T细胞,并观察HCMV在MRC-5T细胞中的感染特性.结果 获得了表达hTERT基因的慢病毒颗粒LVX-EF1a-hTERT,制备了可用于HCMV培养的永生化MRC-5细胞.结论 建立了人端粒酶逆转录酶永生化MRC-5细胞的方法,为永生化原代细胞等其他种类细胞提供了技术保障和物质基础.
- 吴萌殷建忠朱武洋鲁茁壮
- 关键词：细胞巨细胞病毒HIV-1逆转录酶
- 黄病毒检测工程细胞系的构建及功能鉴定
- 2015年
- 目的:构建黄病毒检测工程细胞系并对其功能进行鉴定。方法:以含有登革4型病毒814669株全长感染性克隆的质粒P4质粒为基础,缺失pr M-E基因1 945bp,构建含有红色荧光蛋白m Cherry报告基因的登革病毒复制子载体P4-△pr ME-m Cherry。以P4-△pr ME-m Cherry为基础,通过融合PCR方法,以真核表达载体p CDNA3.1+为骨架,构建用于黄病毒检测细胞筛选的缺陷型真核表达质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry。脂质体转染法将质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry转染BHK-21细胞,G418进行筛选,获得的阳性细胞克隆经96孔板系列稀释筛选、纯化克隆细胞BHKFlavivirus。结果:BHK-Flavivirus细胞感染登革病毒60h后,能够在荧光显微镜下检测到红色荧光蛋白m Cherry的表达,说明BHK-Flavivirus能够用于外源黄病毒的检测。BHK-Flavivirus细胞分别感染黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4),可以检测到红色荧光;而辛德毕斯病毒(XJ-160)、和基孔肯雅病毒(SD08Pan)、盖塔病毒(HB0234)等正链RNA病毒感染后则不出现红色荧光。结论:以上结果表明BHK-Alphavirus细胞可用于未知蚊媒黄病毒检测,该方法通过报告基因表达与否,能够高效、特异的甄别主要蚊媒甲病毒和黄病毒,同时该方法有利于稀缺病毒的分离、保存,操作方法简单、直观,有望应用于临床检测及病毒性生物战剂的早期甄别。
- 尉研王焕琴吴萌张凤娟梁国栋朱武洋
- 关键词：黄病毒细胞系红色荧光蛋白
- 人巨细胞病毒感染指示细胞株的建立
- 2015年
- 目的 建立指示细胞株,该细胞株被人巨细胞病毒（HCMV）感染后能够诱导表达绿色荧光蛋白（GFP）.方法 使用PCR方法克隆GFP基因和HCMV UL54基因的启动子（UL54p）;用GFP替换质粒pGL4.17[luc2/Neo]中的luc2基因,并将UL54p序列插入多克隆位点得到报告质粒pGL4UL54p-GFP.将该质粒转染永生化的人胚肺成纤维细胞MRC-5T,通过G418筛选,获得多株克隆化的MRC-5TUG细胞.使用HCMV（AD169毒株）感染各株MRC-5TUG,利用荧光显微镜观察GFP表达情况.使用人5型腺病毒和H1N1甲型流感病毒感染筛得的目的细胞株,观察GFP表达情况.结果 构建的报告质粒pGL4UL54p-GFP经酶切和测序鉴定,证实与预计的一致.质粒转染MRC-5T细胞,筛得9株MRC-5TUG克隆化细胞株;HCMV感染后,有2株细胞GFP表达由阴转阳,其中MRC-5TUG#7细胞GFP表达最强.人腺病毒和流感 病毒感染MRC-5TUG#7,GFP不表达.结论 成功构建了MRC-5TUG细胞,该细胞可以用于指示HCMV的感染。
- 郭小娟邹小辉吴萌屈建国鲁茁壮洪涛
- 关键词：巨细胞病毒基因表达荧光抗体技术
- 甲病毒检测细胞株的构建及其功能鉴定
- 2015年
- 目的 构建和鉴定可用于甲病毒快速检测的工程细胞株.方法 以辛德毕斯病毒缺陷型复制子载体系统pVaXJ-EGFP-△NSP4为基础,利用慢病毒表达载体pCDH系统,获得含有绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）报告基因的慢病毒表达质粒pCDH-XJ-EGFP.使用脂质体转染法将质粒pCDH-XJ-EGFP和包装质粒pPACKHl Mix共转染HEK293T细胞,48 h、72 h收集慢病毒颗粒用于感染BHK-21细胞,经嘌呤霉素筛选获得用于蚊媒甲病毒检测的细胞系BHK-Alphavirus.结果 BHK-Alphavirus感染辛德毕斯病毒48 h后,可检测到EGFP的表达,表明BHK-Alphavirus能够用于外源甲病毒的检测.BHK-Alphavirus细胞感染甲病毒属中的辛德毕斯病毒（XJ-160和YN87448）、基孔肯雅病毒（SD08Pan）及盖塔病毒（HB0234）均可以检测到特异的绿色荧光,而被黄病毒属的乙脑病毒（P3）、4型登革病毒（P4）和布尼亚病毒属的塔希纳病毒（XJ0625）等其他正链RNA病毒感染后则检测不到绿色荧光.结论 BHK-Alphavirus细胞可用于蚊媒甲病毒的快速检测,且该检测方法特异性良好.
- 张克佩尉研王焕琴吴萌张凤娟梁国栋王小平朱武洋
- 关键词：甲病毒细胞系
- 质粒型甲病毒复制子载体系统的构建及其功能鉴定
- 2014年
- 目的 构建质粒型甲病毒复制子载体系统,并对其功能进行鉴定.方法 在XJ-160病毒感染性cDNA克隆的基础上,将病毒非结构基因序列分为三个片段扩增,分步克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游,并用多克隆位点序列替代病毒的结构基因构建XJ-160病毒质粒型复制子载体.将病毒核蛋白基因及包膜糖蛋白基因分别克隆至pVAX1 CMV启动子下游构建载体的两个辅助质粒.通过绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因的表达检验该质粒型载体系统的功能特性.结果 成功构建了包括复制子载体和辅助质粒的质粒型甲病毒复制子载体系统,且该复制子载体系统可成功表达绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因.结论 本研究构建了能够表达外源基因的质粒型甲病毒复制子载体系统,为目标基因表达、重组病毒颗粒制备等奠定了基础.
- 张凤娟唐丽尉研王焕琴杨蕴芝吴萌张鹏梁国栋朱武洋
- 关键词：复制子基因
- 原代细胞永生化的研究进展被引量：1
- 2014年
- 现代生物技术一般包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,细胞培养更具有特殊的作用和价值.有学者研究发现,由于永生化细胞在体内可多次传代,具有相对稳定的增殖特性和功能状态,将其作为细胞工程和组织工程等研究领域的标准细胞,促进了体外实验的标准化和科学化.
- 吴萌殷建忠朱武洋
- 关键词：原代细胞细胞培养细胞永生化
- 登革病毒质粒型微复制子载体的构建和鉴定
- 2015年
- 目的构建登革病毒质粒型微复制子载体，并对其功能进行鉴定。方法以登革病毒4型感染性cDNA克隆p4为分子基础，通过融合PCR方法构建删除病毒结构基因和大部分非结构基因的表达盒，并将其克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋）的CMV启动子下游以构建包含病毒复制和翻译必需顺式作用元件和NS5关键序列的质粒型微复制子载体pcDEN-△prME。结果为验证微复制子载体的包装功能，将定性的绿色荧光蛋白报告基因和定量的海肾荧光素酶基因分别克隆至pcDEN-△prME构建工程载体pcDEN—△prME—EGFP和pcDEN-△prME—GLUC。转染实验结果显示，微复制子载体可成功表达绿色荧光蛋白报告基因及海肾荧光素酶报告基因。结论本研究所构建的DNA型微复制子载体pcDEN-△prME在保留病毒必要的顺式作用元件和NS5部分关键序列的同时缺失了大部分非结构基因，使得该载体在简化实验操作的同时大大提高了病毒载体的容量，为深入研究以登革为代表黄病毒抗病毒药物筛选和新型疫苗研发提供了有力工具，更为病毒复制及翻译的分子调控机制提供了新的技术平台。
- 李木丽张凤娟尉研孙继国王焕琴吴萌梁国栋赵玉敏朱武洋
- 关键词：登革病毒质粒
- 应用食物频率法评价普米族膳食多不饱和脂肪酸摄入与高血压、血脂异常的关系被引量：8
- 2013年
- 目的研究普米族膳食中多不饱和脂肪酸的摄入与高血压、血脂异常的关系。方法选择云南省怒江州兰坪白族普米族自治县18岁以上376例普米族居民为研究对象,采用问卷调查收集研究对象过去一年中各种食物的摄入频率及摄入量、现病史和家族史情况;测量研究对象血压;采集调查对象空腹血测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。结果普米族居民的膳食脂肪摄入量较高,占RNI的198.5%;三大产能营养素的供能比失衡,但n-3PUFA、EPA、DHA的人均摄入量并不高。普米族居民高血压患病率为15.4%;血脂异常类型主要表现为低高密度脂蛋白血症,占54.8%,高胆固醇血症占8%,高甘油三酯血症占19.1%,TC或TG异常人群占25.0%。PUFAs与血脂异常、n-6PUFA与高血压呈负相关关系。结论普米族居民应减少油脂类及高脂肪食物的摄入,增加富含DHA、EPA类食物的摄入,以防止心血管疾病的发生与发展,降低血脂。
- 王瑞欣殷建忠冉旭张雪辉徐芳王琦吴少雄王心昕杨茜吴萌
- 关键词：普米族高血压血脂异常
