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水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达被引量：3: 2005年; 水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果.; 杨宇峰周建耿旭董亚芳吴自荣; 关键词：RGD序列重组水蛭素枯草芽孢杆菌融合蛋白基因凝血酶抑制剂

水蛭素-RGD序列融合基因在枯草芽孢杆菌中的克隆和表达: 水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,它是天然存在的最有效和专一的凝血酶抑制剂,可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病。它由多种含有的～66个氨基酸的单链类系物组成,分子量约为7000Da,主要分为HV1、HV2、HV...; 杨宇峰周建耿旭吴自荣; 文献传递

枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达被引量：9: 2004年; 利用PCR技术 ,从枯草杆菌DB40 3染色体上扩增出谷氨酰胺转胺酶基因 ,将其克隆到大肠杆菌载体pET32a( + )中 ,成功构建谷氨酰胺转胺酶表达载体pET32 BTGase ,并转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。重组克隆在IPTG诱导下 ,表达出硫氧还蛋白谷氨酰胺转胺酶 (Trx BTGase)融合蛋白 ,表达量占细菌总蛋白量的 2 6%。利用金属螯合层析纯化菌体裂解上清中表达的融合蛋白 ,纯度超过 80 %,再通过分子筛层析进一步纯化得到融合蛋白纯品。酶活性分析表明表达的Trx BTGase融合蛋白具有交联蛋白的活性 ,并发现Trx; 周建董亚芳吴自荣; 关键词：枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶克隆大肠杆菌基因

论陈亮的豪杰观: 在南宋理想人格不断内圣化之际,陈亮一反主流声音将豪杰作为理想人格。对此,朱熹还曾劝陈亮以“醇儒之道”自律,但陈亮并未接受朱熹的劝诫。在他看来豪杰是仁、智、勇具一身且通过实践展为积极事功取向的人格。豪杰这种外王与事功取向实...; 周建; 关键词：豪杰理想人格; 文献传递

我国城乡居民养老保险待遇水平影响因素研究: 随着我国经济社会的发展，城市化进程的加快，城乡居民的养老需求与日俱增，作为我国的一项基本社会养老保险制度，城乡居民养老保险在保障广大居民老年生活方面发挥着越来越显著的作用。2014年2月国务院发布了《关于建立统一的城乡居...; 周建; 关键词：城乡居民养老保险待遇水平精算模型; 文献传递

枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶基因的克隆、表达及性质研究: 谷氨酰胺转胺酶（Transglutaminase，TGase）是一种催化酰基发生转移的蛋白酶，主要催化蛋白质或多肽分子中谷氨酰胺残基的γ-酰基发生转移反应，当酰基受体为赖氨酸的ε-氨基时，TGase催化蛋白分子之间或之内...; 周建; 关键词：枯草杆菌谷氨酰胺转胺酶融合蛋白; 文献传递

血小板生成素在枯草杆菌中的表达分泌及前肽作用被引量：2: 2005年; 利用PCR方法扩增得到枯草杆菌本身的表达调控序列SP(含有信号肽)和Pro序列(包含信号肽和前肽).分别与血小板生成素(TPO)结构基因及枯草杆菌载体片段连接,构建两个重组TPO枯草杆菌表达载体,转化受体菌,得到DB403(SP-TPO)和DB403(Pro-TPO)重组克隆, 比较有无前肽对其表达分泌的作用.用ELISA和Western Blot检测TPO的表达分泌,发现DB403(Pro-TPO)能够表达分泌TPO,而DB403(SP-TPO)未发现TPO的分泌.对小鼠腹腔注射DB403(Pro-TPO)发酵浓缩液,发现能够明显增加血小板数目.与自身对照相比增加84.2%, 与生理盐水对照比较增加99.7%.以上实验说明Pro-TPO能够表达分泌有明显活性的TPO蛋白,而且前肽对外源蛋白的分泌是必要的.; 张美华周建杨宇峰吴自荣; 关键词：血小板生成素枯草杆菌分泌前肽

安舒克栓酶和水蛭素融合基因在枯草杆菌中的表达: 2005年; 安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的水蛭素(hirudin,Hir)是凝血酶的最强有力的天然抑制剂,是极具优势的抗凝药物[1].但仍各有不足:安舒克栓酶只有溶栓功能,不能抗栓,不能解决血栓治疗中再栓塞的问题;水蛭素只有抗凝作用,不具溶栓功能.如果将这两种从不同途径治疗血栓的药物,通过融合蛋白基因工程技术结合在一起,理论上能让两者互补所短,研究出具溶栓、抗凝双功能的新药.虽然蛋白酶和其他蛋白融合有过成功的报道[2],但安舒克栓酶有强烈的蛋白水解作用,它能否和其他蛋白融合,目前还未见报道.对这一课题的研究,一方面能深入对安舒克栓酶结构、功能的了解,另一方面也为今后此类融合蛋白的构建打下基础,提供有用的信息.; 张嘉敏周建黄静吴自荣; 关键词：克栓酶水蛭素纤维蛋白融合基因纤溶酶原激活剂枯草杆菌

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周建