唐国敏
- 作品数：36 被引量：174H指数：9
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 丝状真菌外源基因表达分泌系统的受体菌的构建
- 丝状真菌因其具有高强度启动子,高蛋白分泌能力,类似哺乳动物细胞的翻译后加工能力以及成熟的发酵工艺,已成为新一代的外源基因表达分泌系统,黑曲霉更因其安全性而成为最主要的宿主菌。但丝状真菌包括黑曲霉,其自身产生的蛋白酶会引起...
- 刘丽刘谨唐国敏
- 文献传递
- 黑曲霉诱变株Aspergillus niger T21糖化酶产量提高的分子基础被引量：10
- 2001年
- 黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ Ｔ２１是以Ａ．ｎｉｇｅｒＡＳ３．７９５为出发株经诱变获得的糖化酶高产菌株，产量比原株提高１０～１７倍．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析知Ｔ２１的糖化酶ｍＲＮＡ含量约为ＡＳ３．７９５的２０倍，表明糖化酶基因（ｇｌａＡ）转录水平的提高是糖化酶产量提高的主要原因．以编码葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）的 Ｅ．Ｃｏｌｉ ｕｉｄＡ 为报告基因，分别与 Ｔ２１和 ＡＳ３．７９５的 ｇｌａＡ５＇调控区融合后，引入Ａ． ｎｉｇｅｒ，根据转化子 ＧＵＳ酶活性测定结果， Ｔ２１ｇｌａＡ ５＇调控区的启动子活性是ＡＳ３．７９５相应启动子活性的３倍多，提示ｃｉｓ调控的改变是Ｔ２１ ｇｌａＡ转录水平提高的重要原因之一，但ｔｒａｎｓ调控的改变是Ｔ２１ ｇｌａＡ转录水平提高的更重要的原因．作为 ｔｒａｎｓ调控研究的第 １步，进行了 Ｔ２１ ｇｌａＡ ５＇调控区的功能分析，结果表明，ＡＴＧ上游－４０８～－５１３间的约 １００ ｂｐ区域与 ｇｌａＡ基因高水平表达相关．
- 范晓春仇润祥刘丽唐国敏
- 关键词：黑曲霉糖化酶发酵工业
- 水解淀粉的酿酒酵母菌的构建被引量：8
- 1996年
- 把黑曲霉糖化酶cDNA,酵母磷酸甘油激酶基因启动子区和终止区以及酵母Ty因子的δ序列构建成整合型的糖化酶表达分泌质粒pKG 1。该质粒转化酿酒酵母Y33得到整合型转化子。转化子分泌糖化酶活力在3.0μ/ml以上,在以5％可溶性淀粉为碳源的培养基中静止培养7d,淀粉利用率达86％,生成酒精的浓度与以5％葡萄糖为碳源时相等。
- 唐国敏郗乔然钟丽婵杨开宇
- 关键词：水解淀粉酿酒酵母酒精发酵
- 青霉素生产菌株的基因工程育种
- 由产黄青霉Penicillin chrysogenum生产的青霉素是重要的,产销量最大的抗菌药物,经世界范围半个世纪的努力,运用诱变育种已使青霉素发酵效价增长了数百倍。但自Lilly公司获得产黄青霉突变株E-15.1后,...
- 陈玉庆钟丽婵唐国敏
- 文献传递
- 具有a-乙酰乳酸脱羧酶活性的啤酒酵母菌的构建及其工业发酵试验
- 唐国敏李秀英袁庆利赵峰王敖全范晓春刘效红王燕王汝建赵萍杨晓强纪祥东
- 该组将细菌来源的α-乙酰乳酸脱羧酶（α-ALDC）编码基因引入啤酒酵母，该基因表达产生的α-ALDC能催化去除生成DA的前体，使DA生成量降低，从而达到提高啤酒质量，缩短发酵周期的目的，并同时获得稳定生产，简化工艺，节约...
- 关键词：
- 关键词：Α-乙酰乳酸脱羧酶啤酒酵母基因工程菌
- niaD基因与uidA基因共转化糖化酶高产菌株Aspergillus niger T21被引量：2
- 1999年
- 从AspergillusnigerT21分离到自发性的氯酸盐抗性株，再经氮源生长试验获得硝酸盐还原酶缺陷的niaD突变体N44。用含有niaD的质粒pSTA10转化N44，转化频率为5个／μg（转化子／DNA）。转化子的Southern印迹分析表明niaD基因同源整合到N44的染色体DNA中。pSTA10与含葡糖苷酸酶基因（uidA）的质粒pNOM102共转化N44，共转化频率为40％。共转化子的GUS（葡糖苷酸酶）活力测定结果表明uidA基因已在N44中表达。由此可知，以niaD为选择标记，uidA为报告基因，以N44为受体的转化系统可用于丝状真菌启动子功能检测和已知调控序列的功能分析。
- 钟丽婵范晓春唐国敏
- 关键词：报告基因
- 黑曲霉htmA基因的分离鉴定及其功能分析被引量：1
- 2006年
- 本研究通过分析比较黑曲霉基因组与人、哺乳动物和酿酒酵母基因组序列同源性,首次分离鉴定了黑曲霉htmA基因,该基因长3459bp,编码1083个氨基酸。已知真核生物的htmA基因编码一种类α-甘露糖苷酶I的非必须蛋白HTMA,在内质网中参与降解非正确折叠的糖蛋白,htmA基因的破坏会延迟非正确折叠糖蛋白的降解。为分析htmA基因在黑曲霉中的功能,运用同源重组技术敲除黑曲霉基因组中的htmA基因,获得htmA基因缺失突变菌株,并进行了缺失株外源漆酶分泌能力的检测。结果表明黑曲霉htmA基因的破坏延缓了外源漆酶的降解,由此推测黑曲霉htmA基因编码蛋白HTMA具有与酵母、哺乳动物HTM1P/EDEM类似的功能作用。
- 赵颖秦浚川王敖全唐国敏王华明
- 黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究 Ⅰ.高产及低产菌株糖化酶表达的总体分析和比较被引量：14
- 1997年
- 对黑曲霉(Aspergillus niger)高产菌株T21和原始菌株3.795糖化酶的基因表达从菌体生长、酶形成动力学、glaA基因拷贝数、糖化酶mRNA含量及其稳定性等多个方面进行了分析和比较。T21和3.795糖化酶的大量产生均自菌体生长的静止期开始。培养72h后,两者的菌体浓度相同,但T2l产生的糖化酶量为3.795的10～17倍,说明糖化酶产量的差异不是因生物量或酶起始合成期不同引起的,而是由于细胞内酶表达量不同引起的。Northern杂交显示T21总RNA中糖化酶mRNA含量为3.795的4.3～4.4倍.两菌株glaA基因拷贝数及糖化酶mRNA的稳定性分析结果排除了这两个因素的影响,因此T21糖化酶mRNA含量的增加主要是glaA基因转录水平提高的结果。T21与3.795之间糖化酶水平差异(10～17倍)与糖化酶mRNA水平差异(4.3～4.4倍)的不一致性,提示T21和3.795之间除转录水平外可能还存在着翻译水平上的差异(2～4倍)。此外,T21和3.795均存在着对糖化酶基因表达的碳源调控机制,根据两者在淀粉、麦芽糖和葡萄糖培养条件下所产生的mRNA比均为4:3:2,可以认为,这种调控作用发生在转录水平上,并且具有相同的调控方式。
- 乔殿华唐国敏钟丽婵郗乔然杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶基因表达
- 黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究──Ⅱ.A.niger T21和3.795glaA基因5'调控区功能的体内分析被引量：8
- 1998年
- 对糖化酶高产菌株A.nigerT21和原始菌株Aniger3．795的glaA5＇上游区的序列分析证明，两者在1．5kb的区域内有9个部位的碱基不同。为考察这些碱基差异是否是引起T21glaA基因转录水平提高的原因，构建了以T21和3．795glaA基因转录调控区及A．nidulans trpC基因终止子为表达元件的E．colihph基因表达载体（pXH2和pGH1），用pXH2和pGH1分别转化A.nigerT21，对两种转化子的HmB抗性水平测定和Southern杂交分析显示，在转化子XH2C和GH1C中，pXH2和pGH1以相同拷贝数（2拷贝串联）整合到染色体DNA的相同位置上，XH2C的HmB抗性水平（3000μg／ml）为GH1C（1500μg／ml）的2倍。这一结果表明，诱变引起的调控区序列改变使T21glaA基因转录调控区的功能水平比3．795提高1倍。
- 乔殿华钟丽婵唐国敏杨开宇
- 关键词：黑曲霉糖化酶基因表达
- 黑曲霉糖化酶在酿酒酵母中的表达和分泌被引量：11
- 1994年
- 从黑曲霉糖化酶高产株T21合成的糖化酶cDNA,经5＇端和3＇端改造后克隆到酵母质粒YFD18上,转化酿酒酵母。转化子的淀粉培养基平板检测,培养滤液蛋白电泳和糖化酶活力分析都表明,含有糖化酶基因表达质粒的酵母转化子能有效地分泌有功能的糖化酶到细胞外。实验证明酵母α因子启动子和分泌信号序列能促使黑曲霉糖化酶cDNA在酵母中表达和分泌,实验还表明,黑曲霉糖化酶原的翻译后加工序列很可能亦能被酵母识别,加工生成有功能的成熟的糖化酶。以上成功为构建有实用意义的淀粉水解酵母工程菌迈出了重要的一步。
- 唐国敏龚辉钟丽蝉杨开宇
- 关键词：糖化酶酿酒酵母分泌黑曲霉
