喻晓蔚
- 作品数：44 被引量：106H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程理学更多>>
- 重组华根霉脂肪酶的酶学性质及其对面团热机械学和烘焙特性的影响被引量：10
- 2010年
- 对一种新型重组华根霉脂肪酶(Rhizopus chinensis lipase,RCL)的酶学性质进行研究,并利用酶流变分析仪、质构分析仪研究该酶对面团热机械学特性及烘焙特性的影响。结果表明:该酶的最适反应条件为40℃、pH8.5;其在40℃内、pH3～9范围内稳定性较好,冻干粉酶比活力约为17640U/g。通过与另一种商业脂肪酶(AY"AMANO")的对比研究发现,重组华根霉脂肪酶不仅显著影响面团的热机械学特性,而且能够增加面包的比容和弹性,降低面包的硬度、黏聚性和咀嚼性。
- 张峦黄立群喻晓蔚徐岩黄卫宁TILLEY Michael
- 关键词：酶学性质烘焙质构分析
- D190V点突变提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCCM 201021脂肪酶的最适温度和热稳定性被引量：6
- 2013年
- 【目的】对来源于Rhizopus chinensis CCTCC M201021的脂肪酶进行了D190V定点突变,提高该酶的最适温度和热稳定性。【方法】对毕赤酵母表达的突变酶D190V与野生型酶r27RCL进行酶学性质比较。【结果】D190V的最适温度比r27RCL高5°C,65°C下的半衰期提高了一倍,在其他性质方面,突变酶D190V与r27RCL基本相似。【结论】通过结构分析表明,定点突变D190V提高该酶稳定性的主要原因可能在于提高了突变位点所在的α螺旋的稳定性以及增强了稳定蛋白质结构的氢键作用力。
- 吴厚军喻晓蔚沙冲徐岩
- 关键词：定点突变最适温度热稳定性
- β-1,3-葡聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的表达与性质
- 2022年
- 藤黄节杆菌(Athrobacter luteu)β-1,3-葡聚糖酶(βglⅠ)能够特异性的作用于β-葡聚糖中的β-1,3-糖苷键,在酵母裂解活性上具有突出优势,但是βglⅠ在生产上存在表达低、生产成本高的问题。作者利用无缝克隆技术构建表达载体,实现了βglⅠ在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,并通过比较不同Tat类型和Sec类型信号肽、RBS、5′UTR等表达元件来提高βglⅠ的胞外产量。结果表明,信号肽SPLipA使得βglⅠ表达水平提高了0.4倍,在此信号肽基础上继续比较各RBS和5′UTR序列,其中cry3A 5′UTR使βglⅠ产量高出出发菌株1.2倍。此外,利用Ni2+亲和层析柱纯化βglⅠ并对其酶学性质进行研究,结果表明该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,在0~45℃、pH 4.0~9.0的范围内稳定性较好,比活为973 U/mg。
- 张佳妮徐岩喻晓蔚
- 关键词：枯草芽孢杆菌分泌表达信号肽
- 华根霉脂肪酶晶体结构解析
- 张萌喻晓蔚徐岩黄骏翔郭瑞庭
- BMMYA'平板-Fast blue RR顶层琼脂法高效筛选高酶活脂肪酶
- 2012年
- 摘建立了一种高效筛选高酶活或高产脂肪酶菌株的平板方法。该方法以华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)脂肪酶基因proRCL在毕赤酵母中构建的基因突变文库为筛选对象,利用BMMYA'平板-FastblueRR顶层琼脂法对其中高酶活或高产的脂肪酶突变株进行筛选,将待筛菌株接种至含有2%甲醇的BMMYA'平板上,30℃生长并诱导4～5 d后,平板经脂肪酶致死温度65℃处理1 h,冰浴、室温平衡后,向平板中倾入Fast blue RR顶层琼脂。2 min内周围显示出明显的黑褐色的菌株为高酶活或高产突变株。该方法简便,快速,高效而且准确,筛选阳性率可达到90%。
- 王睿喻晓蔚沙冲徐岩
- 关键词：FASTBLUE高温处理
- 定向进化-易错PCR方法提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力被引量：15
- 2009年
- 运用定向进化-易错PCR的方法,提高了华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力。经过两轮易错PCR和pNPP顶层琼脂法筛选,从第一轮和第二轮突变库中分别筛选获得最佳突变株1-11和2-28,脂肪酶酶活与野生菌株相比分别提高2倍和4倍。基因比对结果表明,突变脂肪酶2-28有4个氨基酸发生了突变:A129S、K161R、A230T、K322R。蛋白质分子空间结构模拟显示,突变A129S、K161R、A230T位于脂肪酶分子表面。突变A230T增强了α-螺旋盖结构的稳定性。突变K322R处在loop上,靠近脂肪酶底物结合区域,与邻近的Asp(带负电)形成盐桥。静电引力将该loop向底物进入酶活性中心的通道口反方向牵引,使底物分子更易进入酶活性中心。酶学性质研究表明,突变株2-28脂肪酶的Km值比出发菌株下降了10%,Kcat值提高为原来的2.75倍。
- 王睿喻晓蔚沙冲徐岩
- 关键词：定向进化易错PCR
- PCR依赖型方法构建高质量酵母基因突变文库被引量：2
- 2011年
- 针对定向进化中利用亚克隆的方法建立酵母突变文库建库周期长、效率低、库容量低、丰度低等问题,建立了一种基于体内同源重组构建酵母整合型基因突变文库的新方法。步骤为：构建目标基因的重组表达质粒;以此为模版,设计长引物片段,PCR/易错PCR/DNA Shuffling等方法扩增得到两端带有与表达载体40~70 bp同源序列的突变基因;再利用PCR扩增得到表达载体;将扩增得到的目标基因和表达载体以一定的摩尔比混合电转化酵母,目标基因和表达载体在酵母体内同源重组成为完整的表达盒,整合入酵母基因组,获得基因突变文库。对构建的突变文库进行筛选,分别得到了酶活、蛋白表达量及热稳定性提高的突变株。该方法为完全PCR依赖型（PDM）,在体内构建表达盒,效率高,操作方便,将建库周期由2周缩短为3 d,将库容量从传统的103~104提高到105以上,库阳性率达到95%。
- 王睿喻晓蔚徐岩郅岩孔宇
- 关键词：同源重组毕赤酵母
- 重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的陶瓷膜微滤除菌工艺研究
- 2012年
- 在重组毕赤酵母生产脂肪酶的提取中,应用并优化了陶瓷膜微滤除菌工艺,确定了最佳条件为膜截留分子量500 kDa、膜操作压力0.3MPa、温度20℃、湿菌体含量35%,先对发酵液稀释1.5倍后再进行洗滤。40 L处理量的小试结果显示,在5 h处理时间内,能获得高达92.70%的酶活回收率。560 L处理量的中试放大,酶活回收率为89.91%,耗时5.5 h。在膜的清洗与再生中,采用2%NaClO和2%NaOH在60℃、0.3 MPa膜压力下进行清洗40 min,清水膜通量恢复率为98.14%。陶瓷膜与板框除菌的比较试验发现,两种方法都获得了微生物限量合格的产品和较高的酶活回收率,但陶瓷膜微滤的滤液微生物检出量更低,处理时间较短,动力能耗更低,易与超滤膜耦合提取,废水产生量更少,菌体废渣易于回收,是一种节能减排、清洁环保的新型除菌工艺。
- 谢甲有喻晓蔚徐岩
- 关键词：毕赤酵母脂肪酶陶瓷膜
- 产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选鉴定及其离子束诱变被引量：1
- 2011年
- 利用经过改良的初筛培养基,以p-NPG为底物作为筛子,从葡萄园土壤及葡萄表皮中筛选到一株产β-葡萄糖苷酶酶活较高的菌株,经18S rDNA鉴定为黑曲霉。通过离子束注入技术对该菌株进行诱变,获得了一株高产β-葡萄糖苷酶诱变菌株H68,与原菌株相比,酶活提高了53%。
- 郭慧女徐岩喻晓蔚康文怀
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶黑曲霉
- 微生物法在有机相中合成没食子酸丙酯的方法
- 本发明公开了一种微生物法在有机相中合成没食子酸丙酯的方法。方法的步骤如下：1)将黑曲霉孢子培养得到的菌丝体收集过滤，用0.85%(w/v)NaCl溶液冲洗，在0.01～0.2mol/L pH 2.2～5.8缓冲溶液中平衡...
- 李永泉喻晓蔚
- 文献传递
