孔宪刚
- 作品数：241 被引量：964H指数：17
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达被引量：5
- 2000年
- 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子 ｐＵＣＨ５。然后将 ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体 ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ，筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后，在脂质体转染试剂介导下，ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒 ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－Ｂｌｕｅ ＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化，获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验结果表明 ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞，血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达，为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 刘明于康震张云孔宪刚徐宜为
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒
- 新城疫流行病学变化及综合防制进展被引量：1
- 2008年
- 新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，被国际动物卫生组织（OIE）列为危害禽类的两种A类传染病之一。尽管世界各国对ND采取了严格的防控措施，如对强毒感染的扑杀措施、限制使用中等毒力疫苗及强制性免疫等措施，但它仍然是危害禽类的主要传染病，并且呈现新的流行趋势，使防制工作变得复杂化。
- 刘怀然孔宪刚
- 关键词：新城疫病毒综合防制国际动物卫生组织强毒感染中等毒力
- 表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建被引量：3
- 2011年
- 为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为rAdV-S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及western blot检测证实S1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明,该重组病毒的毒价为108.25TCID50/mL,并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。
- 耿合员孙元韩宗玺邵昱昊仇华吉孔宪刚刘胜旺
- 关键词：禽传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒
- 牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究
- 利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDN...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌DNA疫苗免疫应答
- 文献传递
- 马传染性贫血发病过程中细胞毒性T细胞的作用及其表位研究进展
- 2007年
- 马建孔宪刚沈荣显周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒细胞毒性发病过程猴免疫缺陷病毒EIAV
- 禽流感发生的流行病学分析
- 2004年以来在亚洲蔓延的高致病性禽流感引起人们的强烈关注.禽流感虽然没有像2003年的SARS疫情那样明显地影响和改变我们的生活,但接连由动物引发的威胁到人类健康甚至生存的瘟疫,还是让人产生很多的联想和思索.微生物远在...
- 崔尚金李曦符芳王靖飞吴春燕童光志孔宪刚
- 关键词：禽流感流行病学
- 文献传递
- 牛分枝杆菌单基因及双价融合基因DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME。转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达。以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况。结果表明,7种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著(P<0.05),其中pCA组血清抗体水平明显高于其他6种DNA疫苗免疫组(P<0.05);三免两周后,融合基因免疫组的刺激值(SI值)与单基因免疫组相比差异显著(P<0.05),其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN～γ高于单基因DNA疫苗组(P<0.05),而两对照组则未检测到IFN～γ的产生。成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础。
- 宫强刘思国王春来王勇刘建东迟磊赵昆周媛媛常月红云孟克孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌单基因融合基因DNA疫苗
- 应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测被引量：1
- 1992年
- 应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42盼健康马血清中均未捡出单抗相应抗原。病理学检查表明,弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变。以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明,弱毒免疫马体内不存在致病性病毒。这为阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。
- 孔宪刚刘滨东卢景良
- 关键词：马传贫单克隆抗体疫苗抗原
- 不同禽源及基因型新城疫病毒对番鸭致病性分析被引量：2
- 2016年
- 鸭是新城疫病毒(NDV)重要的自然宿主,在NDV的传播和进化中起着重要作用。为研究鸭对不同NDV株易感性及在NDV传播中的作用,本研究选取5株不同禽源及基因型NDV,以不同剂量经滴鼻点眼途径接种15日龄番鸭,鉴定对鸭的致病性、排毒情况、血清抗体变化以及病毒的组织脏器分布;并设立同居鸭、鸡测定NDV水平传播能力。结果显示,疫苗病毒株La Sota和WB383(基因Ⅰ型)株能够在番鸭体内有限复制;La Sota仅诱导产生低水平抗体,而WB383诱导的抗体水平较高,未检测到这2株病毒的水平传播;F48E9对番鸭致病性强,具有较强水平传播能力;同为基因Ⅶ型病毒,鸭源MD株呈现出对番鸭高致病性,野鸭源WB363株则对番鸭致病性较低,但其水平传播能力高于MD株。实验结果显示,5株NDV对番鸭致病性差异较大,La Sota和WB383株对番鸭无致病性,排毒和水平传播能力弱;F48E9对番鸭具有高致病性;同属于基因Ⅶ型的强毒株对番鸭致病性差异较大,这种差异原因尚需进一步研究。本研究结果表明番鸭感染NDV的F48E9、WB363、MD株后水平传播能力较强,应重视其在NDV传播和进化过程中的作用研究。
- 赵晨辰石跃王新蒋艳玉刘培欣孔宪刚刘怀然
- 关键词：新城疫病毒宿主基因型番鸭
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxⅡCA基因的克隆和基因缺失
- 该研究通过PCR克隆了血清型7型25-4株的ApxⅡC基因和部分ApxⅡA基因,并同已经发表的其他各血清型进行了核苷酸序列和氨基酸序列的比较.在此基础上,利用PCR方法完成了ApxⅡC基因的缺失工作,这不仅为分析Apx毒...
- 王春来刘思国王牟平孔宪刚
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌基因缺失
- 文献传递
