孙平楠
- 作品数：32 被引量：88H指数：4
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学社会学更多>>
- 信号肽生物信息学分析在Neurospora crassa phyA基因鉴定中的应用被引量：9
- 2009年
- 目的对Neurospora crassa基因组中与黑曲霉phyA具有46.85%相似性的EAA33149.1蛋白基因进行鉴定并确定其功能。方法利用信号肽预测软件SignalP 3.0 Server,真核蛋白序列中精氨酸和赖氨酸前导肽切割位点以及信号肽切割位点预测软件ProP 1.0 server,跨膜结构域预测软件Tmpred和TMHMM Server v.2.0,GP I锚定位点预测软件big-P I Predictor以及亚细胞器中蛋白定位分布预测软件TargetP v1.01对EAA33149.1蛋白基因进行预测分析,根据分析结果将该基因克隆到酿酒酵母中表达。结果确定了该蛋白的信号肽、信号肽切割位点以及分泌途径。重组酿酒酵母表达的54000重组蛋白,显示了植酸酶活性。结论初步确定该蛋白基因为N.crassa phyA基因。
- 孙平楠周小玲王正祥
- 关键词：信号肽生物信息学分析基因鉴定
- 转人-鲑嵌合降钙素串联基因酵母YS-5hsCT及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种转人-鲑嵌合降钙素串联基因酵母YS？-5hsCT及其制备方法和应用，本发明构建含5拷贝人-鲑嵌合降钙素串联基因的质粒，酶切获得线性DNA片段rDNA2-ura3-P<Sub>pgk</Sub>-5hsCT...
- 臧晓南孙恒一张学成徐涤李清王玉梅孙平楠姜勇
- 文献传递
- 摄食转基因集胞藻牙鲆的安全性评价
- ＜正＞为评价转牙鲆生长因子基因集胞藻作为鱼类饲料添加剂的安全性,将摄食转基因集胞藻的牙鲆肌肉以10.Dg/kg·BW·d 剂量给小鼠连续灌喂8周,对试验鼠的摄食量、体重、血液常规和血生化指标、脏体系数以及生殖机能进行了检...
- 刘顺梅臧晓南张学成刘滨张维芬孙平楠况成宏
- 文献传递
- 摄食转基因集胞藻牙鲆的安全性评价被引量：4
- 2007年
- 评价转牙鲆生长因子基因集胞藻作为鱼类饲料添加剂的安全性。将摄食转基因集胞藻的牙鲆肌肉以10.0 g/kg.BW.d剂量给小鼠连续灌喂8周,对试验鼠的摄食量、体重、血液常规和血生化指标、脏体系数以及生殖机能进行了检测,对组织器官进行了病理学检查。研究结果显示,灌喂摄食转基因藻牙鲆的小鼠,其摄食量、体重、血液常规、血生化指标及脏体系数与对照小鼠无显著差异(P>0.05),其生殖机能和肝、肾等组织器官未受损害。表明转基因集胞藻作为牙鲆饲料添加剂不能通过食物链对食鱼生物造成不良影响,是安全无毒的。
- 刘顺梅臧晓南张学成刘滨张维芬孙平楠况成宏
- 关键词：牙鲆小鼠安全性评价
- HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究
- 2009年
- 目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母。方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,SacI位点酶切线性化,采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DDT)对巴斯德毕赤氏酵母Pichia Pastoris GS115预处理,在电压1.5kv、电容25F条件下进行电击转化。电击后立即迅速稀释在冰预冷的1M的山梨醇中,混匀后取100l的菌液均匀涂布YNBG平板,利用HIS4标记筛选转化子。结果:发现改进后的转化方法pPIC9K-EGFP-preS1的转化率提高到164×104个转化子/1μgpPIC9K-EGFP-preS1 DNA,是传统方法的6.6倍。结论:采用改进后的方法能有效的提高质粒pPIC9K-EGFP-preS1的转化率,为筛选高表达HBVPreS1-EGFP融合蛋白的转化子打下基础。
- 周小玲李子龙孙平楠
- 关键词：乙肝病毒前S1蛋白毕赤氏酵母
- HBV研究模型新进展被引量：2
- 2019年
- 慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝炎、肝硬化、肝癌的主要诱因之一,已成为全球性的公共健康问题。乙型肝炎疫苗的推广应用显著降低了HBV感染率,但现阶段慢性乙肝病毒感染仍然无法根治。HBV研究模型对推动HBV相关研究和临床治疗起到了重要的作用。然而,由于缺乏合适的研究模型,HBV生物学以及HBV与宿主之间相互作用等方面仍存在很多问题未明了,制约了抗HBV新药研发。近年来,HBV功能性受体钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的发现以及干细胞技术的发展应用,极大推动了HBV研究模型的发展。本文分别从病毒来源、细胞和动物感染模型等角度对HBV研究模型领域的进展进行综述。
- 毕延伟杨小强孙平楠周小玲
- 关键词：乙型肝炎病毒类肝细胞
- 一种简便的高通量细胞内GFP报告基因检测方法
- 2015年
- 目的:建立一种简单、快速、高通量的检测GFP蛋白的方法。方法:用TECAN多功能酶标仪Infinite M200pro检测GFP蛋白在不同缓冲液中的荧光强度;用酶标仪检测含GFP的蛋白样品梯度稀释后的荧光强度,建立荧光强度与GFP相对含量之间的标准曲线;分别比较荧光酶标仪的检测结果与流式细胞术和Western-blotting检测结果的相关性。结果:使用50 mmol/L TrisHCl(p H=10)的缓冲液稀释GFP蛋白更有利于检测低浓度的GFP;荧光酶标仪检测GFP的荧光读数同GFP相对含量之间的回归系数2R>0.99。荧光酶标仪检测GFP蛋白的结果与流式细胞术、Western-blotting的检测结果之间均呈现明显的相关性。结论:建立的利用多功能酶标仪检测GFP蛋白方法方便快捷,可以实现短时间对大样本进行检测。
- 杨少哲石海军褚欣然周小玲孙平楠
- 关键词：绿色荧光蛋白报告基因
- 一种新型干细胞3D分化方法
- 本发明涉及一种新型干细胞3D分化方法，通过完成定型内胚层诱导阶段或肝祖细胞阶段，将细胞酶解后的细胞悬液与海藻酸钠和间充质干细胞相关制品等溶液混合制备成细胞海藻酸钠混合液，再与氯化钙反应液反应形成细胞水凝胶，并继续完成肝样...
- 孙平楠周小玲谢晓灵
- 转鲑鱼降钙素基因酵母及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种转鲑鱼降钙素基因酵母及其制备方法和应用，将鲑鱼降钙素在酿酒酵母这种真核系统中表达。酿酒酵母发酵技术成熟，表达量较高，而且酿酒酵母可以直接食用，得到的转化降钙素的酿酒酵母不需要纯化可以直接口服，从而降低了生...
- 张学成孙平楠臧晓南陈云松
- 文献传递
- 一种转导人原代肝细胞的LV-HBx诱导调控表达系统
- 2017年
- 目的:建立一种在人原代肝细胞中可诱导调控表达HBx的慢病毒表达系统,以便研究HBx生物学特性及其对人肝细胞功能的影响。方法:采用Tet-on系统构建四环素诱导调控的慢病毒-HBx表达系统,并用流式细胞术对其进行优化以达到较高的表达效率。应用该系统制备LV-HBx和LV-rtTA重组慢病毒共同转导肝癌细胞系HepG2和人原代肝细胞后,再加入强力霉素(Dox)诱导调控HBx表达,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人原代肝细胞中肿瘤转移相关基因1(MTA1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、转化生长因子β1(TGFB1)、上皮型钙黏附素1(CDH1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)mRNA的表达水平。结果:重组慢病毒-HBx表达系统构建成功,LV-HBx和LV-rtTA重组慢病毒用量配比经过优化,采用1∶1或2∶1转导后可达到较高的表达效率,Dox诱导产生的表达HBx的阳性细胞率分别为67.3%和66.7%。应用该系统将HBx基因转导入肝癌细胞系HepG2和人原代肝细胞后,可用Dox进行诱导调控HBx的高效表达。其中人原代肝细胞中Dox诱导组的HBx表达水平约为对照组(不加Dox诱导)的45倍,经qPCR检测高表达HBx的人原代肝细胞中MTA1、VEGFA、TGFB1 mRNA的表达水平较对照组均显著升高(P均<0.05),而CDH1、IGFBP3 mRNA表达水平显著降低(P均<0.05)。结论:成功建立了转导人原代肝细胞的LV-HBx四环素诱导调控表达系统,该系统的建立为研究HBx等乙肝病毒基因对人原代肝细胞的影响打下了基础。
- 周小玲熊小芳谢庆东孙平楠
- 关键词：HBX慢病毒载体
