张廷芬
- 作品数：21 被引量：34H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- 结核分枝杆菌热休克蛋白Hspl6.3及其合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答
- 目的 比较结核分枝杆菌Hsp16.3和Hsp16.3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法80只BALB/e小鼠随机分5组共免疫3次,间隔2周.分别于O、2、4、6、8周采集血液,ELISA法检测在抗原Hsp16...
- 张廷芬师长宏朱德生张海赵勇岳晨莉赵雷刘建利
- 关键词：结核分枝杆菌HSP16.3亚单位疫苗
- 微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3)的基因表达及单克隆抗体制备
- 目的 克隆LC3基因,体外表达后制备抗LC3单克隆抗体.为自噬研究提供相关实验材料.方法 RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆1,123基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5(进行诱...
- 张海师长宏赵勇缪珊张廷芬伍静
- 关键词：LC3单克隆抗体
- 结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp16.3及其合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答
- 2008年
- 目的比较结核分枝杆菌Hsp16.3和Hsp16.3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法80只BALB/c小鼠随机分5组共免疫3次,间隔2周。分别于0、2、4、6、8周采集血液,ELISA法检测在抗原Hsp16.3和Hsp16.3合成肽包被时血清中的抗体浓度及第8周时血清中的抗体滴度。末次免疫完成后4周,取每组8只免疫小鼠分离脾淋巴细胞,用Hsp16.3和Hsp16.3合成肽分别刺激后,MTT法测定脾淋巴细胞的增殖指数,夹心ELISA法检测同样抗原刺激下脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平。每组剩余小鼠用H37Rv毒株攻击,4周后取小鼠脾脏分离脾淋巴细胞,倍比稀释后涂平板,3周后计数CFU。结果抗Hsp16.3和Hsp16.3合成肽的抗体在免疫的前4周均增长迅速,而后趋于缓和。Hsp16.3/DDA/MPL、Hsp16.3合成肽/DDA/MPL、Hsp16.3合成肽/FIA、BCG组和生理盐水组在第8周时抗Hsp16.3的抗体滴度分别为1:3000、1:1500、1:1500、1:500和1:100,抗Hsp16.3合成肽的抗体滴度分别为1:2000、1:2000、1:1000、1:500和1:100;在Hsp16.3和其合成肽的刺激下,各组平均刺激指数分别为(3.13±0.18)和(2.895±0.13)、(3.21±0.21)和(3.54±0.2)、(2.395±0.15)和(3.125±0.12),(1.67±0.12)和(1.93±0.14),(1.04±0.09)和(1.16±0.08);在同样抗原刺激下,各组诱生的IFN-γ水平分别为(182.43±6.01)pg/mL和(182.43±8.67)pg/mL、(193.522±9.26)pg/mL和(198.915±6.16)pg/mL、(179.135±7.83)pg/mL和(188.32±5.13)pg/mL,(274.56±10.26)pg/mL和(283.47±6.19)pg/mL,(71.14±3.34)pg/mL和(72.91±2.45)pg/mL;各组脾脏的荷菌数分别为(6.74±0.14)、(6.60±0.13)、(6.81±0.28)、(5.95±0.17)和(7.82±0.21)。结论二者在免疫学特性方面各有优势,提示Hsp16.3和Hsp16.3合成肽均有望成为TB疫苗的候选组分。
- 张廷芬师长宏朱德生张海赵勇岳晨莉赵雷刘建利
- 关键词：结核分枝杆菌HSP16.3亚单位疫苗
- 微管相关蛋白I轻链3(LC3)的基因表达及单克隆抗体制备
- 2008年
- 目的克隆LC3基因,体外表达后制备抗LC3单克隆抗体,为自噬研究提供相关实验材料。方法RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆LC3基因,连接至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5(进行诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB/C小鼠制备LC3抗单克隆抗体。结果克隆了LC3基因,并对其在E.coli DH5(进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子质量Mr为20×103有特异条带,Western blot结果证明表达产物具有一定的生物学活性。表达蛋白免疫小鼠后获得了能分泌抗LC3蛋白的杂交瘤细胞株。结论:在E.coli中对LC3进行表达,并制备抗蛋白的单克隆抗体,为自噬研究提供了有力实验工具。
- 张海师长宏赵勇缪珊张廷芬伍静
- 关键词：LC3单克隆抗体
- Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力被引量：3
- 2008年
- 目的研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni-NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连续免疫3次,每次间隔2周,最后一次免疫结束后两周,分离5只小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖指数,IFN-γ和IL-2水平,以及特异性淋巴细胞杀伤功能,其余5只免疫小鼠用于MTB毒株攻击实验。结果获得融合蛋白可分别与抗Hsp65和抗hIL-2的单抗发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞被有效活化,诱导产生的-γIFN和IL-2的水平以及CTL杀伤功能均显著高于BCG和单纯Hsp65免疫组(P<0.05)。融合蛋白免疫组可有效抵抗MTB毒株攻击,脾脏细菌数显著减少(4.36±0.48),提供的保护力与BCG相当(4.30±0.53)。结论Hsp65与hIL-2的融合蛋白是一种有效的亚单位疫苗,可用于TB的预防。
- 师长宏张海席丽张廷芬赵勇王丽梅徐志凯
- 关键词：热休克蛋白65人白细胞介素2
- 结核分枝杆菌HSP65亚单位疫苗和基因疫苗的构建及免疫学特性被引量：2
- 2008年
- 目的:构建HSP65蛋白的亚单位疫苗和基因疫苗,并与BCG相比较,评价这两种疫苗在小鼠体内的免疫学特性.方法:从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出hsp65基因,连接进入pMD18-T载体中,测序后,利用不同酶切位点将完整的hsp65基因分别克隆到pProEX HTb原核表达载体和pcDNA3.1(-)真核表达载体,前者在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化;后者通过阳离子聚合物瞬转P815细胞,用间接免疫荧光检测细胞内HSP65蛋白的表达.用上述原核表达蛋白和真核质粒(分别为亚单位疫苗和基因疫苗)免疫BALB/c小鼠,ELISA测定特异性抗体的滴度,MTT测定脾淋巴细胞特异性增殖指数.结果:获得的结核分枝杆菌hsp65基因序列与GenBank公布的完全一致;Western Blot结果显示,在Mr约65000处有与鼠抗HSP65 mAb和临床结核患者血清的特异性结合带;免疫荧光结果显示转染重组质粒的P815细胞的表达蛋白与HSP65 mAb有特异性结合.两种疫苗免疫小鼠体内产生特异性抗体,经蛋白刺激后可引起脾淋巴细胞特异性增殖.结论:所构建的两种疫苗能引起免疫动物的特异性体液和细胞免疫反应,应进一步研究其抵抗结核分支杆菌感染的保护力机制,以用于结核病的防治研究.
- 席丽师长宏靳亚平张海张廷芬赵勇岳晨莉
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白质类亚单位疫苗基因疫苗
- Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力
- 目的 研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力.方法 在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni- NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连...
- 师长宏张海席丽张廷芬赵勇王丽梅徐志凯
- 关键词：热休克蛋白65人白细胞介素2
- A型肉毒聚合类毒素的制备及免疫原性研究
- 2011年
- 通过制备A型肉毒聚合类毒素,研究获得较好的免疫原性和反应原性的方法。通过碳二亚胺法,聚合A型肉毒类毒素,免疫小鼠,用ELISA检测抗体,成功地制备了A型肉毒聚合类毒素,免疫小鼠获得高效价免疫血清,且该免疫血清具有中和活性,研究A型肉毒聚合类毒素抗原的作用机制,获得具有中和活性的保护性抗体,对肉毒毒素中毒的防治具有重要意义。
- 曹馨匀何彦林高建军刘卫涛张廷芬陈晓航罗树权
- 关键词：碳二亚胺酶联免疫吸附测定法
- 结核分枝杆菌热休克蛋白16．3及其合成肽诱导小鼠免疫应答的研究被引量：3
- 2009年
- 目的比较MTB的热休克蛋白（HSP）16．3和HSP16．3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法80只BALB／c小鼠分为5组，3个实验组：蛋白组：HSP16．3／溴化二甲基双十八烷酸铵（DDA）／单磷酰脂质A（MPL），合成肽组：HSP16．3合成肽／DDA／MPL，佐剂组：HSP16．3合成肽／弗氏不完全佐剂组；2个对照组：卡介苗组和生理盐水组。每只小鼠蛋白和合成肽免疫剂量为50μg／次，共免疫3次，间隔2周。卡介苗为单次免疫5×10^6CFU／只。分别于第1次免疫后0、2、4、6、8周采集血液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中抗HSP16．3的抗体浓度及第8周时血清中抗体滴度。末次免疫完成后4周，每组取8只小鼠分离脾淋巴细胞，用HSP16．3刺激后，噻唑蓝法测定脾淋巴细胞的增殖指数，夹心ELISA法检测相同抗原刺激下脾淋巴细胞诱生的γ-干扰素水平。每组剩余小鼠用10’CFU的H37Rv毒株攻击，4周后取小鼠脾脏和肺脏，组织匀浆，倍比稀释后涂7H10平板，4周后计数菌落数。采用LSD-t检验统计学分析。结果抗HSP16．3抗体在免疫的前4周均增长迅速，之后趋于缓和。免疫8周时，3个实验组（蛋白组、合成肽组和佐剂组）抗体水平分别为1：2000、1：2000和1：1000，均高于卡介苗组（1：500）。3个实验组（蛋白组、合成肽组和佐剂组）的脾淋巴细胞增殖指数（3．13±0．18、3．21±0．21和2．40±0．15）均显著高于卡介苗组（1．67±0．12）和生理盐水组（1．04±0．09），蛋白组和合成肽组均显著高于佐剂组。3个实验组诱生的γ-干扰素水平·（182±6）、（194±9）和（179±8）mg／L]均显著低于卡介苗组[（275±10）mg／L]，高于生理盐水组[（71±3）mg/L]，3个实验组之间均无显著差别。3个实验组均对MTB在脾脏[细菌数为（6．74±0．14）-（6．81±0．28）lgCFU]和肺脏[细菌数为（5．74±0．27）-（6．65
- 师长宏张廷芬朱德生张海白冰赵勇岳晨莉赵雷刘建利
- 关键词：分枝杆菌结核热休克蛋白质类亚单位
- 胞壁表达HSP65-IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌的构建和鉴定
- 2008年
- 目的:获得胞壁表达结核分枝杆菌热激蛋白65(HSP65)和人白细胞介素2(IL-2)融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法:将HSP65和IL-2融合基因克隆入大肠杆菌-卡介苗(E.coli-BCG)穿梭质粒pCW,构建成重组质粒HSP65-IL-2-pCW,电穿入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选和PCR方法选取阳性克隆;用间接免疫荧光法对重组耻垢分枝杆菌进行表型鉴定;用重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的抗体水平。结果:筛选获得的重组耻垢分枝杆菌增殖特性与普通耻垢分枝杆菌无明显区别;与抗人的IL-2抗体和HSP65抗体均可形成免疫印迹条带;间接荧光染色后,可见细菌表面有极强的绿色荧光;重组耻垢分枝杆菌免疫BALB/c小鼠2周后,小鼠血清中HSP65抗体平均滴度为1∶4000,而生理盐水组的抗体几乎为阴性。结论:结核分枝杆菌HSP65和人IL-2融合基因在耻垢分枝杆菌胞壁获得表达,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。
- 栗文彬师长宏张海张廷芬王丽梅赵勇白冰
- 关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌白细胞介素2融合蛋白
