张新中
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省科技厅国际合作项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 红笛鲷头肾消减cDNA文库的构建与分析
- 张新中吴灶和简纪常鲁义善
- 关键词：红笛鲷抑制性消减杂交技术CDNA文库
- 红笛鲷主要组织相容性复合物Ⅰα抗原基因的克隆与表达分析被引量：4
- 2012年
- 为研究红笛鲷免疫防御相关基因的作用机理和调控机制,实验应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)成功克隆了红笛鲷组织相容性复合物Ⅰα(MHCⅠα)抗原基因的全长cDNA序列,MHCⅠα的全长序列为1 369 bp,编码354个氨基酸残基。BLAST分析显示,红笛鲷MHCⅠα与其他已知物种MHCⅠα基因的最高同源性为84%。构建的系统进化树显示,红笛鲷MHCⅠα与石斑鱼等MHCⅠα亲缘关系较近。Real-time PCR分析表明,MHCⅠα在头肾中的最大表达量出现在哈氏弧菌ZJ0706诱导后6～15 h内;构建的重组表达质粒pET32a-MHCⅠα经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了正确表达。将纯化后的重组蛋白与佐剂混合后免疫新西兰纯种大白兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示,所获得的兔抗血清效价约为1∶40 000。Western blot检测发现,本实验制备的抗血清能特异性地与重组蛋白发生抗原抗体反应。
- 张新中鲁义善吴灶和简纪常
- 关键词：红笛鲷原核表达
- 红笛鲷头肾消减cDNA文库的构建与分析被引量：5
- 2011年
- 应用抑制性消减杂交技术(SSH)构建红笛鲷(Lutjanus sanguineus)头肾消减cDNA文库,筛选红笛鲷免疫相关基因的EST。以哈氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活疫苗体内诱导红笛鲷为实验组,以注射无菌生理盐水的红笛鲷为驱动组,通过SSH技术构建红笛鲷头肾消减cDNA文库。利用PCR技术和斑点杂交对文库进行筛选,从2424个含插入片段的阳性克隆中筛选了680个克隆在上海生工进行了序列测定。使用BLASTx和BLASTn工具对获得的ESTs与GenBank数据库进行同源性比较并根据相似性序列的名称通过GO法对ESTs进行注释。结果获得了30个与红笛鲷免疫防御相关基因的EST,如组织相容性抗原复合物基因(MHCI和MHCⅡ)、免疫球蛋白基因(IgH和IgL)、热休克蛋白基因(HSP10、HSP70和HSP90)等。本研究构建了哈氏弧菌灭活疫苗免疫后与正常组织差异表达的消减cDNA文库,并获得一批与红笛鲷免疫防御相关的ESTs,旨在为探讨红笛鲷分子免疫防御机制、筛选参与免疫防御调控相关的功能基因,揭示红笛鲷免疫抗病机制、提高机体抗病力、实现遗传改良奠定基础。
- 张新中吴灶和简纪常鲁义善
- 关键词：红笛鲷抑制性消减杂交技术CDNA文库免疫基因
- 红笛鲷α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的克隆及序列分析
- 2011年
- 应用已知的标签序列通过RACE-PCR和RT-PCR方法成功克隆红笛鲷（Lutjanus sanguineus）α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的全长cDNA序列。α-珠蛋白和β-珠蛋白基因的cDNA全长分别为560和563 bp,开放阅读框分别为429和444 bp,各编码143和148个氨基酸,理论相对分子质量分别为15690和16400,理论等电点为7.79和6.61。氨基酸序列BLAST结果表明,红笛鲷α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性分别在59%-79%和55%-80%之间。用邻接法（Neighbor-Joining）构建的α-珠蛋白基因和β-珠蛋白基因的系统发育树表明,红笛鲷与真鲷（Pagrus major）、金头鲷（Sparus aurata）和鰤（Seriola quinqueradiata）等亲缘关系较近。
- 张新中鲁义善吴灶和简纪常
- 关键词：红笛鲷Α-珠蛋白Β-珠蛋白基因序列
- 红笛鲷头肾消减cDNA文库的构建与分析
- 应用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建红笛鲷头肾消减cDNA文库,筛选红笛鲷免疫相关基因的EST.以哈氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活疫...
- 张新中吴灶和简纪常鲁义善
- 关键词：红笛鲷抑制性消减杂交技术CDNA文库
