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PU-379重庆地区牛和猪外周血博尔纳病病毒的自然感染调查: 张英英徐鸣明展群岭余建萍谢鹏

重庆地区部分牛和猪外周血博尔纳病病毒自然感染的调查被引量：3: 2009年; 采用荧光定量巢式实时逆转录聚合酶链反应检测了重庆地区牛和猪各50例外周血单核细胞中博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)p24基因片段,并对其进行BDV p40基因片段的检测以确保结果的可靠性。检出的阳性序列与GenBank中5个国家4个动物种属25例BDV p24基因序列进行比对,分析其核苷酸和氨基酸序列的同源性,重建基因系统发生树。结果显示,3例牛和2例猪血标本BDV p24检测呈阳性,阳性率分别为6.00%和4.00%;5例标本BDV p40片段检测均为阳性,其余标本均为阴性;BDVp24扩增产物序列与BDV标准病毒株He/80的同源性为100%,与H1766和Strain V相比,变异程度小,所编码的氨基酸序列亦无变化;从发生树可以看出,5例BDV p24片段序列汇聚德国-瑞士-奥地利-日本-重庆混合支系。提示,重庆地区牛和猪中可能存在BDV的自然感染,其流行株可能源于外来疫病病原的传入。; 张英英徐鸣明展群岭余建萍翟红刘妍汐陈晓彭丹朱丹谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒种系发生

博尔纳病病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的评价与应用被引量：1: 2009年; 目的评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)实时荧光定量PCR(FQ RT-PCR)试剂盒的各项指标,并了解其实际应用效果。方法使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDV RT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。结果试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为102,相当于1.5个病毒拷贝数。特异性好,无非特异检出。不同批次的试剂盒的检测结果变异系数接近1。加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内。对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.4%。结论试剂盒敏感性、特异性、重复性和稳定性均佳,是BDV基础研究、流行病学调查、临床检测的良好工具。; 徐鸣明展群岭张英英何丰冯裕星张亮金戈李雷雷谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒实时荧光定量PCR 检测试剂盒

PU-377博尔纳病病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的评价与应用: 徐鸣明展群岭张英英宋武琦谢鹏

BDV核蛋白FQ RT-PCR试剂盒的评价与应用: 2010年; 为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDVRT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。实验结果显示:试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为2.5×101,相当于1个病毒拷贝数,无非特异检出;不同批次的试剂盒的检测结果变异系数小于0.7;加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内;对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.2%(猪)和1.5%(马)。可见该试剂盒重复性和稳定性均好;敏感性、特异性优于普通探针试剂盒,是BDV基础研究、流行病学调查和临床检测的良好工具。; 徐鸣明展群岭张英英张亮宋武琦张凤鸣谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒实时荧光定量PCR 核蛋白

动物外周血单个核细胞分离方法探讨被引量：4: 2010年; 目的探索用人淋巴细胞分离液分离多种属动物外用血单个核细胞（PBMCs）的可行性及评价其分离效果,建立一种适于野外大规模多种属动物PBMCs的分离方法.方法采用人淋巴细胞分离液分离来源于新疆的伊犁马、新疆驴、不同品种犬、新疆双峰驼、天山马鹿和来源于重庆的荣昌猪、中国荷斯坦奶牛、简阳大耳黑山羊外周血PBMCs.随机抽样检测分离的动物PBMCs细胞总数、细胞纯度和细胞活率.结果用人淋巴细胞分离液成功分离上述8种动物PBMCs,每毫升动物外周血分离的PBMCs细胞总数为0.52×106～2.03×106个,纯度为67%～93%,细胞活率为92.5%-98.0%.结论用人淋巴细胞分离液分离多种动物PB-MCs的方法宜在动物的病毒分子流行学调查中进一步推广.; 胡永波展群岭刘海朋霍康杨德雨徐鸣明张英英何丰胡子成谢鹏; 关键词：动物细胞分离

新疆伊犁地区马的西尼罗病毒感染情况调查: 2008年; 目的:探讨西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)在新疆伊犁地区马群中的流行状况。方法:采用一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,Real-time RT-PCR)检测120份伊犁地区马的外周血液单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中WNV包膜蛋白(E)基因片段,并对可能的阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析。结果:所检测的120份血液标本中未发现WNVE基因阳性片断。结论:目前没有证据表明我国新疆伊犁地区的马群中存在西尼罗病毒感染。; 翟红谢鹏曾志磊刘妍汐徐鸣明余建萍张英英陈晓展群岭朱丹彭丹; 关键词：西尼罗病毒一步法 TAQMAN探针

新疆伊犁地区马的尼帕病毒感染情况研究被引量：1: 2008年; 目的:探讨尼帕病毒(Nipah virus,NiV)在新疆伊犁地区马群中的自然感染情况。方法:采用尼帕病毒一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(One step real time reverse transcriptase polymerase chain reaction,Real-time RT-PCR)检测120匹马外周血液单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中的NiVN基因片段,对阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析。结果:所检测120匹马PBMCsNiVN基因片段阳性率为0%(0/120)。结论:本研究未发现新疆伊犁地区马中存在尼帕病毒自然感染。; 刘妍汐谢鹏曾志磊翟红徐鸣明张英英余建萍陈晓彭丹朱丹; 关键词：尼帕病毒 REAL-TIME RT-PCR 一步法 TAQMAN探针

新疆伊犁地区不同品种犬博尔纳病病毒自然感染调查被引量：2: 2009年; 目的调查新疆伊犁地区不同品种犬博尔纳病病毒（BDV）流行现状和分析其可能的种系来源。方法采用改进的巢式反转录PCR（nRT-PCR）方法，检测犬外周血单核细胞（PBMCs）BDV磷蛋白（p24）RNA基因片段。用BDV核蛋白（p40）RNA片段和质粒PMD19标准品验证p24阳性产物，排除可能的假阳性。验证后的阳性产物进行基因测序、同源比对、氨基酸序列和系统发生学分析。结果8个品种150只犬中，仅哈萨克牧羊犬检出BDVp24片段，阳性率为11．0％（10／91）。基因序列与德国马He／80和德国绵羊s6病毒株同源相似度分别为99．2％和95．7％，氨基酸相似度为100％和89．3％，亲缘关系与He／80最近，其次为s6。结论新疆伊犁地区哈萨克牧羊犬可能存在BDV自然感染，其流行株与该地区伊犁马感染的He／80和引进德国美利奴绵羊的S6病毒株有关。; 展群岭张英英徐鸣明胡永波吴秀玲余建平陈晓朱丹杨德雨谢鹏; 关键词：博尔纳病病毒 TAQMAN探针

核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)概述被引量：6: 2008年; 　　随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐.本文就NASBA方法作一综述.……; 张英英谢鹏; 关键词：NASBA 扩增技术 RNA 携带污染敏感性

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张英英

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