彭朝晖
- 作品数：36 被引量：157H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 用“乒乓效应”提高包装细胞培养上清中逆转录病毒滴度的方法
- 1997年
- 逆转录病毒是基因治疗研究中最为主要的基因转移载体,目前批准的基因治疗试验方案中绝大多数采用逆转录病毒作为载体。逆转录病毒具有稳定、安全、高效的优点,但仍存在病毒滴度低的问题。目前多从质粒结构和病毒包装两方面来提高病毒滴度。
- 韩虹彭朝晖张晓志吴小兵徐钤
- 关键词：病毒滴度包装细胞重组逆转录病毒载体培养上清分子生物学研究基因转移载体
- p53 cDNA的克隆及在CV-1细胞中的表达被引量：1
- 1994年
- 构建了可在哺乳动物细胞表达人p53基因的重组质粒pSV2neo-p53,并通过脂质体lipofectin介导转染猴肾细胞CV-1,用新霉素类抗生素G418筛选出阳性克隆。用原位杂交法检测转化细胞中的p53 mRNA;用免疫组化ABC法证明转化细胞的胞核中有p53蛋白表达。
- 赵健彭朝晖徐钤
- 关键词：P53基因基因表达
- TK基因/GCV对瘢痕组织成纤维细胞增生的体外抑制研究
- 1997年
- 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确有效的方法,主要问题是难以控制其复发。我们通过逆转录病毒载体GTK介导HSV-TK基因转移联合9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(更昔洛韦,ganciclovir,
- 张晓志彭朝晖吴小兵韩虹徐钤
- 关键词：瘢痕组织HYTK基因细胞增生体外抑制成纤维细胞重组逆转录病毒载体
- 大鼠肝tRNA^(Ile)基因的克隆与体外转录被引量：1
- 1997年
- 采用PCR扩增出大鼠肝tRNAIle基因，构建了重组质粒pGWIW，并用T7RNA聚合酶／启动子系统对其进行了体外表达．经过对转录产物片段大小及运用Northernblot鉴定，证明获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝tRNAIle生物学活性检测显示：合成基因体外转录产物氨基酰化活性是天然tRNA的40％。
- 张璐钟雄霖彭朝晖徐钤
- 关键词：体外转录基因克隆
- 基因释放剂结合异源双链分析快速检测β地贫最常见的一种突变被引量：1
- 1996年
- β地贫是一种分子病理具有高度异质性的、我国南方最为常见的遗传性血液病.在已发现的23种β地贫突变中,CD41-42(-TCTT)移码突变基因频率最高(达41.6%).根据PCR原理和该突变的特点,作者设计了一对引物进行PCR特异扩增,电泳分析即可检出此种突变.并引进基因释放剂DNA模板快速制备法,从而使此技术更为简便和实用.作者运用此法检测了广东珠海地区114份β地贫样品,CD41-42突变捡出率为40.35%,并成功地应用于产前诊断中.根据实验结果,作者建议在分析未知β地贫突变时,首先采用本法先对CD41-42突变进行初筛,而将RDB和ASO技术作为补充.
- 周玉球卢金汉朱兰芳李文典侯志贤吴丽蓉徐湘民刘志英张基增彭朝晖
- 关键词：Β地中海贫血
- HyTK基因转移联合ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用被引量：5
- 1998年
- 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的过度增生主要是由于高度增生活性的成纤维细胞的数量异常增多及细胞外基质合成增加所致．用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的转移，随后应用药物９－（１，３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可选择性地杀死增生细胞．采用组织块贴壁法在体外原代培养成功增生性瘢痕病人的成纤维细胞（ＦＢ）．重组逆转录病毒ＧＴＫ转染ＦＢ细胞后，用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＦＢ／ＧＴＫ），经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入ＦＢ中，但不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＦＢ／ＧＴＫ及ＦＢ，光镜下观察不同时间后细胞形态变化及ＭＴＴ法检测细胞活性．结果表明，ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对ＦＢ／ＧＴＫ有显著的杀伤作用，且具有强有力的“旁观者效应”
- 张晓志彭朝晖吴小兵韩虹徐钤
- 关键词：瘢痕胸苷激酶基因基因转移
- 经免疫的柞蚕蛹提取物对人直肠癌细胞的杀伤作用被引量：24
- 1998年
- 目的探讨柞蚕免疫血淋巴（主要成分为柞蚕杀菌肽）对肿瘤细胞的杀伤及选择性杀伤作用机制．方法采用３ＨＴｄＲ掺入法及扫描、透射电子显微镜观察柞蚕免疫血淋巴对人直肠癌细胞的生长抑制、细胞ＤＮＡ合成及超微结构的影响．结果柞蚕免疫血淋巴在低浓度（１∶１６）即可抑制癌细胞生长及３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ，随浓度增加，作用时间延长，作用逐渐增强；扫描、透射电子显微镜下见作用３０ｍｉｎ人直肠癌细胞超微结构即出现改变，２４ｈ～４８ｈ细胞膜结构破坏致细胞溃解．而作用于正常猴肾细胞ＣＶ１２４ｈ未见细胞生长及３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ受到抑制；亦未见细胞超微结构破坏．结论柞蚕免疫血淋巴（柞蚕杀菌肽）对肿瘤细胞具有杀伤及选择性杀伤作用；主要作用部位在细胞的膜性结构；
- 张卫民彭朝晖黄自然
- 关键词：血淋巴
- 应用免疫组织化学技术检测非小细胞性肺癌的P53蛋白被引量：1
- 1994年
- 正常P53蛋白半衰期短,用普通免疫组织化学方法检测不出。而突变后的P53蛋白主要通过与病毒蛋白结合使其稳定性增强,延长其半衰期,从而细胞内P53蛋白增多,使用普通免疫组织化学方法即可检出。Iggo等通过对P53蛋白和p53基因的检测分析,发现p53基因在肿瘤组织中的高表达可以预示p53基因产生了点突变。
- 毕向军李金翰王继德彭朝晖
- 关键词：非小细胞性肺癌P53蛋白肺癌手术化学疗法正常血清
- 人乳头瘤病毒在人大肠癌中检出被引量：4
- 1992年
- 用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)法对28例大肠癌(均为分化程度不同的腺癌)及18例相应癌旁组织中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16和18型DNA分别进行检测。在28例大肠癌组织中分别检测到3例(10.8％)呈HPV16DNA阳性和18例(64.5％)呈HPV18DNA阳性。而相应的18例癌旁组织中仅检测到3例(16.7％)呈HPV18DNA阳性,未检测到HPV16DNA。为了证实扩增产物的特异性,我们用限制性内切酶对PCR产物分别进行了酶切分析,结果与预期的完全相符。本文提示HPV感染可能是大肠癌的发病因素之一。
- 吴小兵彭朝晖徐钤谭旭鹏
- 关键词：腺癌人乳头瘤病毒大肠肿瘤
- 用T7RNA聚合酶体外转录合成大鼠肝tRNA^(Ile)被引量：3
- 1997年
- 采用PCR技术从rec M1 3mp1 8中扩增出 1 2 0bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段 ,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板 ,利用T7RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因 ,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化 ,回收的tRNA产量可达DNA模板量的 4
- 张璐钟雄霖彭朝晖徐钤
- 关键词：TRNAT7RNA聚合酶体外转录
