戴永刚
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 人凝血因子Ⅸ-R338A高活性突变体在毕赤酵母中的表达及活性测定被引量：1
- 2017年
- 目的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用。hFⅨ表达量绝对或相对不足会导致B型血友病。本研究用毕赤酵母生产重组高活性突变体hFⅨ-R338A。方法首先构建pPICZaA-hFⅨ-R338A酵母分泌表达载体,其次将其用电转化入毕赤酵母SMD1168中,再次利用G418抗药性的能力筛选表达量高的单克隆重组菌株,培养并将表达产物纯化,稀释后检测其凝血活性。结果通本研究获得的重组SMD1168-hFⅨ-R338A表达量达到(90-120)mg/L;比活力约为人血中野生型hFⅨ凝血活性的(38.93±5.1)%,比野生型的酵母重组hFⅨ高6.85倍。结论人凝血因子Ⅸ高活性突变体R338A是潜在的天然凝血因子替代品。
- 戴永刚尹胜菊程凤凤程世亮张艳丽李萌王园刘新风
- 关键词：毕赤酵母蛋白表达
- 凝血因子Ⅸ在CHO细胞中的表达和鉴定
- 2013年
- 人类B型血友病，是一种由于不能合成正常凝血因子Ⅸ（hVⅨ）所引起的遗传性疾病。补充hFⅨ是控制此种疾病最有效的方法。本文用CHO细胞作为表达系统，pcDNA3．1作为表达载体表达hFIX。经过对细胞进行免疫组化和免疫荧光分析，证明构建的细胞株表达了重组hFIX蛋白。
- 戴永刚刘新风
- 关键词：蛋白表达PCDNA3
- 毛细管电泳技术在T细胞淋巴瘤诊断中的应用被引量：2
- 2017年
- 目的淋巴瘤的发生被认为是B或T淋巴细胞被阻断在其分化过程中某一阶段而造成淋巴细胞的克隆性增生所致。多数淋巴系统增生性疾病通过组织形态学和免疫表型分析能够明确诊断,但对于T细胞淋巴瘤(T cell Lymphoma,TCL)的诊断,仅凭形态学与免疫表型分析难以明确。本研究旨在探讨毛细管电泳技术在TCL诊断中的应用价值。方法回顾性分析2014-01-04-2015-06-30齐鲁医学检验所经形态学和免疫组织化学诊断的TCL和不能明确诊断的淋巴组织增生性病变共63例,利用毛细管电泳基因片段分析技术分析基因重排产物的克隆性。结果 25例TCL中,T细胞受体-G(T-cell receptor G,TCRG)、TCRB、TCRD基因重排的检出率分别为88.0%(22/25)、72.0%(18/25)和20.0%(5/25),三者联合检出率为96.0%(24/25)。38例未明确诊断的淋巴组织增生性病变中,21例为多克隆性增生。结论毛细管电泳基因片段分析对TCL的诊断能够提供遗传学的支持,并且对形态学及免疫组化不典型或疑难病例可以提供诊断方向,利于TCL的病理诊断及鉴别诊断。
- 程凤凤房爱菊孙琳于静张晓莹戴永刚刘新风
- 关键词：毛细管电泳技术T细胞淋巴瘤基因重排
- 人凝血因子IX在毕赤酵母中的表达及活性测定
- 2013年
- 目的人凝血因子Ix（hFIX蛋白）在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用。hFIX表达量绝对或相对不足会导致B型血友病。本研究用毕赤酵母生产重组hFIX。方法首先用RT-PCR将人肝脏hFIX的mRNA进行扩增、测序并插入到pPIC9K中载体，构建pPIC9K—hFIX酵母分泌表达载体，再将pPIC9K—hFIX电转化进入毕赤酵母SMDl168，然后通过G418抗药性能力的大小筛选获得高拷贝且表达量高的重组菌株。结果通过SDS—PAGE和免疫印迹分析表明本研究获得的重组毕赤酵母hFIX表达量达到100mg／L；经过阴离子交换和半透膜扩散透析得到纯化的蛋白。检测重组hFIX的比活力，约为天然hFIX凝血活性的5．5％。结论我们可以优化找到更好的生产条件，使用其他比SMDll68更好的菌株，以获取更好生产量和质量；另外，我们也有很多可以增强在酵母生产的hFIX的活性。
- 戴永刚刘新风
- 关键词：毕赤酵母蛋白表达
- 乳酸脱氢酶及同工酶在小儿心肌炎伴肝损害中的诊断价值
- 2011年
- 近年来,小儿心肌炎发病率日益增高,威胁儿童身心健康,4～12岁儿童多见〔1-2〕,其中30%～40%儿童发病早期心电图正常,而乳酸脱氢酶（LDH）及同工酶在发病早期即有变化,因此考虑LDH及同工酶为诊断早期心肌损伤的灵敏指标〔2〕。临床观察中还发现,
- 刘新风戴永刚陈淑琴刘秀荣
- 关键词：肝损害乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶同工酶丙氨酸氨基转移酶
