揣征然
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于性染色体定量检测的伴性遗传病无创性产前筛查方法的研究被引量：2
- 2014年
- 目的：利用孕妇血浆游离DNA对产前胎儿性别进行识别，为伴性遗传性疾病的无创性产前筛查提供参考。方法利用X、Y染色体的特异性引物和探针构建识别胎儿性别的实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测技术，并对灵敏度、准确性等方法学指标进行评价，然后将构建好的方法用于24例未孕健康女性及临床上50例16～20孕周的孕妇血浆DNA的检测。结果在母体DNA胎儿Y染色体定性检测方法的灵敏度检测中，当胎儿DNA丰度为3％～6％时，母体DNA模板量下限是50 pg。当母体DNA模板量在0．5～50 ng时，Y染色体最低检测丰度为1％，相当于胎儿DNA丰度为2％；当母体DNA模板量在0．05～0．5 ng时，Y染色体最低检测丰度为2％～4％，相当于胎儿DNA丰度为4％～8％；当无母体DNA时，Y染色体模板量下限为0．5 pg。标本定量检测中妊娠女性的血浆DNA浓度明显高于未孕健康女性（P＜0．05）。50例孕妇静脉血标本中，除1例标本因提取失败未作检测外，其余49例标本初次试验在未考虑母体血浆DNA模板起始用量时，检测结果为17例男性，32例女性，与胎儿出生后性别不完全一致；但是当加大母体血浆DNA模板起始用量（＞50 pg）后，结果为23例男性，26例女性，准确率为100％。结论该试验所构建的利用母体血浆游离DNA进行的早期无创性产前筛查方法具有较高的准确性，可以为伴性遗传出生缺陷性疾病的早期筛查和预防提供重要的参考价值。
- 揣征然黄庆黄君富陈栋苗杰杨昭赵娜王云云史大川王欢府伟灵
- 关键词：无创性产前诊断
- 基因甲基化聚合酶链反应检测体系的优化
- 2014年
- 目的优化甲基化敏感限制性内切酶的聚合酶链反应(PCR)检测体系。方法用甲基化敏感限制性内切酶-PCR技术对10例健康未孕女性的RASSF1A基因进行甲基化检测,并对反应的缓冲体系进行优化。结果未经纯化的酶切产物直接进行PCR时,PCR反应特异性降低,出现众多非特异PCR产物;纯化酶切产物或用PCR缓冲液替代酶切缓冲液后,PCR反应特异性变高。结论酶切缓冲液可影响后续PCR反应的特异性,采取纯化措施或以PCR缓冲液替代酶切缓冲液能够有效提高后续PCR特异性,首选PCR缓冲液替代更为简便。
- 揣征然黄庆黄君富府伟灵
- 关键词：纯化基因甲基化检测
- 基于颜色判定的环介导恒温扩增技术快速检测铜绿假单胞菌的研究被引量：3
- 2012年
- 目的建立了一种基于颜色判定的,能够快速准确地检测铜绿假单胞菌的LAMP方法。方法针对铜绿假单胞菌OprL基因设计3对LAMP引物,通过引物特异性识别OprL的8个独立区域来快速检测铜绿假单胞菌。如果在反应前添加荧光染料羟基萘酚蓝(HNB)或钙黄绿素(Calcein),其结果可以通过肉眼观察反应前后颜色变化来判定并经琼脂糖凝胶电泳验证。对该技术进行特异性、灵敏度分析,利用LAMP和PCR同时检测临床标本。结果设计出针对铜绿假单胞菌OprL基因的恒温扩增检测方法。本恒温扩增检测法只扩增铜绿假单胞菌DNA,对其他菌不扩增,显示出良好的特异性。其最低检测限为17.414 pg/μl,PCR方法最低检出限为174.414 pg/μl,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法检测灵敏度的10倍,灵敏度高。LAMP法对临床阳性标本检出率与PCR法相当(27/27)。结论 LAMP方法用于快速检测铜绿假单胞菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果肉眼可辨别、灵敏度高和特异性强的特点,适合用于现场和基层检疫及医疗单位的快速诊断。
- 王欢黄庆史大川揣征然府伟灵
- 关键词：铜绿假单胞菌
