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曾妮: 作品数：15 被引量：65H指数：5; 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立: 为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M)，采用RT-PCR方法从狂犬病病毒LEP-Flury株中扩增RV基质蛋白基因，双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)，构建重组质粒pET-M，经PCR和双酶切鉴定以及序列...; 宫苗苗曾妮李刚; 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达酶联免疫吸附试验蛋白纯化; 文献传递

狂犬病病毒G基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的初步建立与应用被引量：1: 2011年; 目的以重组G蛋白为检测抗原,应用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体。方法根据GenBank公布的狂犬病病毒LEP-Flury株基因序列设计引物,PCR扩增出目的基因,连接pGM-T载体,重组质粒经BamH I和XhoⅠ双酶切,连接到表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-G。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的蛋白,表达蛋白纯化后SDS-PAGE电泳分析并经Western blotting鉴定。纯化的G蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法检测93份犬血清抗体。结果成功构建了克隆载体pGM-G和表达载体pGEX-G,高效表达了狂犬病病毒G蛋白,融合蛋白分子量大小为79kDa,表达蛋白可与狂犬病病毒抗血清发生特异性反应。建立的检测方法灵敏度达到1∶1 600,与商品化的试剂盒相比符合率为96.8%。结论成功表达狂犬病病毒G蛋白,表达产物可作为检测抗原用于间接ELISA方法中狂犬病病毒抗体的检测。; 王净李刚史利军邱文英曾妮穆秀明高志花王慧文; 关键词：狂犬病病毒 G蛋白间接ELISA

狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：8: 2013年; 目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。; 宫苗苗曾妮程朝飞李刚; 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达蛋白纯化酶联免疫吸附试验

抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立: 狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的一种人兽共患传染病,一旦发病,死亡率几乎为100％。狂犬病呈全球性分布,每年大概有5.5万人死于该疾病。尽管在控制狂犬病方面做了很多努力,但在发...; 曾妮; 关键词：免疫学检测原核表达载体

犬细小病毒北京分离株VP2基因的表达与抗原性分析被引量：1: 2010年; 本研究基于犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2基因序列设计引物,利用PCR技术扩增该基因。扩增的VP2基因连入表达载体pET-32a(+),经PCR及双酶切鉴定基因连入正确。重组表达载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导,SDS-PAGE及Western blotting分析表明有特异蛋白的表达,分子质量大小为87 ku。将表达的蛋白包被酶标板后用抗犬细小病毒单抗与其反应,表明表达的VP2蛋白可以与相应抗体特异结合。; 曾妮李刚朱鸿飞侯绍华史利军; 关键词：犬细小病毒抗原性

狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用被引量：2: 2011年; 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。; 范晓娟李刚李伟曾妮宫苗苗; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统

犬细小病毒荧光定量PCR检测方法的建立与评价被引量：8: 2010年; 通过序列比对和Blast分析,选定犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白保守区基因为检测的目的基因,引物采用Primer Premier 5.0软件设计。利用灵敏度较高的TaqMan探针法建立CPV核酸检测方法。通过对标准品的扩增、测序及对标准扩增曲线的绘制,建立CPV核酸检测方法。同时对建立的检测方法进行了检测特异性、灵敏度和重复性分析。将阳性对照标准品进行10倍梯度稀释后可检测到102拷贝/μL样品,表明该检测体系具有较高的检测灵敏度。通过分析表明,本检测方法在用空白对照及类似的猪细小病毒、猪圆环病毒作为扩增对照时,没有发现非特异性产物的产生,表明该体系对于CPV的检测是特异的。通过6次批间重复检测,体系的变异系数小于3%,表明该检测体系具有良好的重复性。; 李英俊史利军李刚侯绍华曾妮章金刚朱鸿飞; 关键词：犬细小病毒实时荧光定量PCR

犬和猫狂犬病病毒抗体SPA-ELISA检测方法的建立被引量：4: 2010年; 采用RT-PCR方法扩增狂犬病病毒(RV)FluryLEP毒株N基因,将该片段克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将阳性重组质粒转化至宿主菌E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,RVN蛋白以包涵体形式表达,大小约为70ku,且该重组N蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为诊断抗原建立了检测犬、猫RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原的最佳包被浓度为6μg/mL,血清最佳稀释度为1:200,SPA-HRP的最佳稀释度为1:2000。用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对30份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为96.67%。表明基于重组N蛋白的间接ELISA方法可用于检测犬、猫RV抗体水平。; 范晓娟曾妮李刚; 关键词：狂犬病病毒 N蛋白原核表达酶联免疫吸附试验 SPA

小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定被引量：1: 2009年; 根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。; 李伟李刚邱文英贾凤芹曾妮吴素丽; 关键词：小反刍兽疫病毒 H基因原核表达

猪病毒性免疫抑制病的危害及防控: 近年来随着中国养猪业的发展,猪病已成为规模化养猪生产中所面临的一大难题,其重要原因在于猪群普遍存在免疫抑制性疾病。免疫抑制是指由于免疫功能系统受到损害而导致动物机体暂时性或永久性免疫应答功能不全以及对疾病的高度易感。猪病...; 李刚史利军贾凤芹吴翠娟邱文英曾妮李伟; 文献传递

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