李一凡
- 作品数：15 被引量：65H指数：5
- 供职机构：深圳市南山区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
- 李一凡刘戈飞宋旭红杜昆黄东阳
- 关键词：选择性剪接
- 深圳市5918例呼吸道感染患者9种呼吸道病原体IgM抗体检测分析被引量：16
- 2017年
- 目的分析深圳市患者9种呼吸道病原体的感染特点和流行趋势。方法收集该院就诊的具有急性呼吸道感染症状的患者5 918例,采用间接免疫荧光法检测9种呼吸道病原体的IgM抗体,包括嗜肺军团菌1型(LP1)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CPn)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)、乙型流感病毒(INFB)、副流感病毒(PIVs),并对结果进行统计学分析。结果 5 918份血清标本中共检出IgM抗体阳性1 376份,总阳性率为23.25%,其中MP阳性率最高(15.19%),其次为INFB(8.11%),其余几种病原体阳性率较低,混合感染阳性率为4.29%。女性患者中MP、INFB和PIVs IgM抗体的阳性率显著高于男性患者(P<0.001)。MP、INFB和PIVs在不同季节中的阳性率不同,其差异具有统计学意义(P<0.001)。0~14岁组MP、ADV和INFB IgM抗体阳性率显著高于>14~60岁组和>60岁(P<0.05)。婴幼儿(0~14岁)患者MP、CPn、ADV、RSV、INFB和PIVs的阳性率与年龄密切相关(P<0.05)。结论引起深圳市人群非典型肺炎的主要呼吸道病原体,以MP和INFB为主,9种病原体具有各自的感染特点和流行趋势。
- 龚慧杜冀晖高灵莉李一凡麦丽文周蓓王磊刘厚聪
- 关键词：呼吸道病原体IGM抗体检测间接免疫荧光
- 人神经母细胞瘤辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶选择性剪接亚型的研究
- 目的 全反式维甲酸是具有重要生理功能的激素类样物质,体内生理浓度很低。维甲酸是由 维生素A(Vitamin A)也称视黄醇(Retinol)经两步代谢而成,中间产物为视黄醛。辅酶 Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶/视黄醛还原酶(NA...
- 李一凡
- 关键词：选择性剪接
- 文献传递
- 神经母细胞瘤辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达与生物信息学分析被引量：7
- 2006年
- 目的探讨辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR)与神经母细胞瘤发生的关系。方法采用RACE方法从神经母细胞瘤细胞SK-N-SH和SY-5-Y中克隆NRDR全长cDNA,对获得的序列进行生物信息学分析,Northern杂交确定NRDR组织分布,免疫荧光染色鉴定NRDR细胞内定位,杆状病毒蛋白表达系统表达克隆的NRDR,反相高压液相色谱测定NRDR催化活性。结果从神经母细胞瘤细胞中克隆了一种新的NRDR全长cDNA片段(NCB I登录号为DQ344810),序列分析表明NRDR属短链醇脱氢酶家族。结论NRDR定位于细胞过氧化物酶体,具有辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶活性。神经母细胞瘤细胞中NRDR表达调控的改变,可能与神经母细胞瘤的发生有关。
- 刘戈飞李一凡宋旭红杜昆李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：神经母细胞瘤生物信息学
- 实时定量聚合酶链反应检测心血管活性多肽apelin方法的建立被引量：2
- 2004年
- 目的 :建立实时定量聚合酶链反应 (RQ PCR)检测心血管活性多肽的方法 ,为快速、准确地分析心脏组织中apelin基因表达奠定基础。方法 :根据心血管活性多肽apelin基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记TaqMan探针。将逆转录 聚合酶链式反应扩增的apelin基因片段克隆至pGEM Teasy载体 ,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后 ,作为阳性克隆标准品 ,用于标准曲线的制定 ,由此可定量检测出每一样品模板的起始拷贝数。结果 :阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系 (r =0 970 ) ,可用于apelin基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 :RQ PCR方法较常规PCR技术更为简便、准确、特异、灵敏 。
- 钟久昌黄东阳杨艳梅蒋纪恺李一凡胡盛平
- 关键词：心血管活性实时定量聚合酶链反应拷贝数阳性克隆
- 致婴幼儿腹泻的肠致病性大肠埃希菌血清分型和毒力基因检测被引量：5
- 2013年
- 目的了解引起婴幼儿腹泻的肠致病性大肠埃希菌血清分型情况及其毒力基因携带状况。方法采集2011年6月至2012年2月医院儿科婴幼儿腹泻患者的粪便标本进行大肠埃希菌的分离培养,通过血清凝集试验和细菌生化反应筛选出肠致病性大肠埃希菌,采用多重PCR检测毒力基因escV、bfpA、Stx1和Stx2。结果 503例粪便标本中共分离出47株肠致病性大肠埃希菌,检出率是9.34%。血清分型有9种,最多的血清型是O86:k61,占了阳性菌株的27.66%。毒力基因escV阳性合计22株,bfpB阳性合计17株,检出率分别是46.81%和36.17%,其中,(escV+bfpB)阳性14株,escV阳性8株,bfpB阳性3株,携带毒力基因的菌株阳性率为53.19%,未检出毒力基因Stx1和Stx2。结论肠致病性大肠埃希菌血清学分型与毒力基因携带有差异,有条件的实验室可以直接检测大肠埃希菌的毒力基因,为临床提供更准确的诊断依据。
- 潘伟光李一凡邓启文张健华
- 关键词：肠致病性大肠杆菌腹泻血清毒力
- 汕头市区幼儿伤害的现况调查
- 2002年
- 倪杨杨汉华李欣欣李湘武李一凡李丽萍
- 关键词：儿童学龄前统计学
- miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用被引量：18
- 2016年
- 目的:探讨miR-92a在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法:采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4种结直肠癌细胞(HCT116、SW620、SW480、HT29)中miR-92a的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度(microvessel density,MVD),Pearson相关性分析探讨miR-92a表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor上调或抑制结直肠癌细胞HCT116、SW620中miR-92a的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果:结直肠癌组织miR-92a的表达水平显著高于对应癌旁组织(P<0.01);4种人结肠癌细胞系miR-92a的表达水平均显著高于正常肠上皮组织(P<0.05);结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-92a表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关(r=0.580,P=0.01);上调miR-92a表达的HCT116细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成(P<0.05);上调miR-92a表达可以显著抑制HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-92a在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。
- 王秀杜冀晖黄虞龚慧王磊李一凡
- 关键词：结直肠癌血管新生PTEN
- 494例生精障碍患者的染色体核型分析
- 2018年
- 目的通过对生精障碍患者外周血染色体核型的分析,探讨染色体核型异常与男性不育的关系。方法常规制作外周血染色体G显带,对494例生精障碍患者进行染色体核型分析。结果在494例生精障碍患者中,共检出染色体异常30例,发生率为6.07%(30/494),其中无精症、严重少精症和少精症患者的发生率分别为11.86%(21/177)、3.39%(6/177)、2.08%(3/144)。在异常染色体核型中,有13例(13/30,43.33%)发生染色体数目异常,17例(17/30,56.67%)发生染色体结构异常,其中14例(14/30,46.67%)是性染色体异常,16例(16/30,53.33%)是常染色体异常。在所有核型中,Klinefelter综合征的发生率最高,占异常核型的43.33%。结论生精障碍功能越严重,染色体异常核型检出率越高。因此有必要对生精障碍的患者进行染色体核型分析,从而帮患者找出病因,明确诊断,为进行辅助生育的不育患者提供遗传咨询,避免将缺陷传给后代。
- 王田园肖晓素李一凡郑宝郝亚军徐丹
- 关键词：生精障碍男性不育染色体异常
- DHRS4L2非编码RNA调控CPNE6基因表达（英文）被引量：2
- 2014年
- DHRS4/NRDR基因编码一种属于SDR家族的酶,在维甲酸合成、类固醇代谢和苯甲基代谢中发挥生物合成催化作用.DHRS4基因定位于14q11.2,有两个相似的拷贝基因,分别为DHRS4L2和DHRS4L1.我们前期发现了DHRS4L2基因一个上游转录起始位点,命名为DHRS4L2-Ea.在本研究中,我们用RT-PCR和双脱氧测序法发现一个新的从DHRS4L2-Ea转录的选择性剪接亚型DHRS4L2-900a(KC237374).同时RT-PCR结果显示在SK-N-SH细胞DHRS4L2-Ea选择性剪接亚型中DHRS4L2-iso(AY616183)表达最多,为主要亚型.在SK-N-SH细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)使DHRS4L2-Ea基因下游CPNE6 mRNA表达下调.在HeLa细胞过表达DHRS4L2-800a(AY920361)或DHRS4L2-900a(KC237374)进一步表明DHRS4L2-Ea抑制CPNE6表达的作用.定量PCR结果显示si-RNA抑制DHRS4L2-Ea表达使CPNE6 mRNA表达上调.亚硫酸盐测序结果显示在SK-N-SH转染DHRS4L2-800a(AY920361)的样本中CPNE6基因DNA CpG甲基化增加.综上所述,本研究揭示DHRS4L2表达的非编码RNA抑制其下游基因CPNE6的表达.
- 李一凡黄东阳王磊杜冀晖刘戈飞王永周蓓李蓉麦丽文
- 关键词：选择性剪接转录调控人神经母细胞瘤
