李俊毅
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海出入境检验检疫局科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转基因油菜品系特异性检测方法研究及其标准分子研制
- 本研究对我国进口油菜籽进行转基因成分检测并分析了各品系组成情况,结果显示,我国农业部颁发农业转基因生物安全生产证书的七个转基因油菜品系(RT73、MS8×RF3、MS1×RF1、MS1×RF2、T45、Oxy235和To...
- 李俊毅
- 关键词：转基因油菜标准物质实时荧光PCR
- 文献传递
- 转基因油菜品系列特异性检测方法研究及其标准分子研制
- 本文通过分子生物学手段克隆了粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)ECU1010脂肪酶新基因lipB,并对其进行了可溶性表达优化,研究了该重组脂肪酶的发酵、纯化手段与相关酶学性质。此外,本文克隆了7个棒曲...
- 李俊毅
- 关键词：粘质沙雷氏菌脂肪酶酶学性质转基因油菜
- 进口油菜籽中不同转基因品系的检测与分析被引量：6
- 2011年
- 对我国27批进口油菜籽进行了转基因成分检测和转基因油菜品系组成情况分析。利用已知转基因油菜RT73、T45、Oxy235、Topas19/2、MS1、RF1、RF2、MS8和RF3的特异性检测体系,对初检为阳性的转基因油菜籽样品进行扩增,扩增基因包括bar、PAT、GOX和NPTII。结果共检出25批转基因油菜籽,检出率为92.6%。所有批次均检出品系RT73和MS8×RF3,表明二者为目前我国进口的主要转基因油菜籽。约40%的批次检出MS1×RF1和MS1×RF2,有少量批次检出T45、Oxy235和Topas19/2,每批次均为多品系混合样品。研究表明,列入农业转基因生物安全生产证书(我国农业部颁发)名单的7个转基因油菜品系均有进口,其中以RT73和MS8×RF3为主。
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- 转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子协同实验验证
- 2011年
- 对构建的适于转基因油菜RT73品系特异性检测标准分子pEASY-RT73在普通PCR和实时荧光PCR检测中的适用性进行了实验室间协同实验验证。对8家实验室结果的统计分析表明,标准分子pEASY-RT73对转基因油菜RT73品系特异性检测及油菜内源基因HMG和PEP检测具有高特异性。在普通PCR扩增中,标准分子对PEP和RT73品系特异性序列的检测下限均为20拷贝,对HMG基因的检测下限为50拷贝;在实时荧光PCR扩增中,HMG和RT73品系特异性序列的检测下限均为10拷贝,PEP检测下限为50拷贝。虽然各实验室所用仪器和试剂有较大差异,但对检测结果影响不大。因此,标准分子pEASY-RT73可稳定的作为新型标准物质用于转基因油菜RT73品系特异性普通PCR和实时荧光PCR检测。
- 李想褚庆华高琴吕蓉潘良文李俊毅张其刚
- 关键词：实时荧光PCR
- 适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子构建及其适用性鉴定被引量：3
- 2011年
- 针对目前转基因产品检测标准物质缺乏的难题,构建适于转基因油菜RT73品系特异性检测的标准分子pEASY-RT73,其包含转基因油菜RT73品系3'端侧翼序列,油菜内标准基因HMG和PEP片段。对其在定性和定量检测中的适用性进行了实验室内部验证,结果表明,标准分子pEASY-RT73高度特异于转基因油菜RT73品系。以标准分子为标准品的普通PCR扩增中,3个目标片段的检测下限(LOD)均为10拷贝。实时荧光PCR检测的LOD均为25拷贝,定量下限(LOQ)均为50拷贝。以标准分子为标准品构建的标准曲线反应效率介于0.96-1.02间,相关系数均大于0.999。分别以PEP和HMG为内标准基因对5个盲样的测试结果显示,测量值与设定值间偏差(Bias)介于-14.13%-14.29%间,SD小于0.20,RSD小于18.0%。因此,标准分子pEASY-RT73可很好地替代植物来源阳性标准品用于转基因油菜RT73及其来源产品品系特异性检测。
- 李俊毅李想褚庆华吕蓉张舒亚潘良文黄新朱水芳
- 关键词：PCR实时荧光PCR
