李学俊
- 作品数：31 被引量：480H指数：10
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析被引量：7
- 2011年
- 以灵杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非特异性核酸酶(Non-specific nuclease,NU)基因,并克隆到pMAL-c4X载体上构建重组表达载体pMAL-c4X-NU。经测序及BLASTN发现其与灵杆菌Serratia marcescens核酸酶基因的同源性为97%。将构建的表达载体pMAL-c4X-NU转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导实现了胞内表达78 kDa的麦芽糖结合蛋白-NU融合蛋白(Maltose-binding protein-NU,MBP-NU),其最佳诱导表达条件为37℃,0.75 mmol/L IPTG诱导1.5 h。用Amylose resin纯化得到了目的蛋白。活性检测表明MBP-NU具有同时降解DNA和RNA的活性,在37℃、pH 8.0时活性最高,比活力为1.11×106 U/mg,目标蛋白的纯化效率可达10.875 mg/L。纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在。0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、1 mmol/L苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)以及150 mmol/L KCl对MBP-NU的活性几乎无影响,因此MBP-NU可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶。
- 陈鹏杨海艳李慧婧杨龙雨李学俊
- 关键词：融合蛋白
- 水稻N-糖酰胺酶基因(OsPNGase A)的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达
- 2018年
- N-聚糖酶是一类广泛应用于糖蛋白的N-糖基化修饰研究中的去糖基化酶。本研究通过RT-PCR从水稻中克隆了一个高GC含量(69.48%)的N-聚糖酶基因(Os PNGase A,XM_015775832),通过无缝克隆技术构建酵母分泌型表达载体p PICZ(α)A-Os PNGase A,在毕赤酵母SMD1168H中进行诱导表达,发酵液经DEAE Sepharose阴离子交换层析和His Trap HP金属离子螯合层析纯化,产量可达到12.3 mg/L,比活力为258 U/mg。SDS-PAGE结果显示,纯化的Os PNGase A为单一条带且与预期分子量一致。Os PNGase A能作用于水稻中重组表达的人转铁蛋白(TRF)、玉米中重组表达的鸡蛋抗生物素蛋白(Avidin)以及辣根过氧化物酶(HRP),并且对Avidin的酶切效果优于商业化的PNGase F。Os PNGase A反应的最适p H和温度分别为p H 6.0和40℃,在中性和碱性以及含有100 mmol/L还原剂β-ME和DTT的条件下仍具有活性。水稻Os PNGase A的成功表达为植物糖蛋白的研究提供一个新的工具酶,酵母分泌表达体系的建立为PNGase A的大量制备奠定了基础。
- 王媛贾鹏李学俊李玉红陈鹏
- 关键词：基因克隆分泌表达糖基化
- 六个猪苓菌株发酵能力及菌丝体多糖含量比较试验被引量：1
- 2007年
- 对引进的六个菌株进行了生长速度,液体发酵能力,以及菌丝体多糖含量比较,结果表明:猪苓4,猪苓5在固体平培养基上长势好,猪苓3、猪苓4、猪苓2发酵能力强,猪苓2菌丝体多糖含量明显高于其余菌株。最终确定猪苓2为筛选出的最佳菌株。
- 陈德育田广文李学俊
- 关键词：培养基
- 薏苡主要农艺性状的相关及通径分析被引量：22
- 2010年
- 对来自不同地区的12个薏苡种质资源的10个主要数量性状进行了相关、通径和主成分分析,结果表明:薏苡10个主要数量性状之间存在相关关系,其中生育期与株高、主茎小花数、节数、千粒重呈极显著正相关而与小花数和穗粒数呈极显著负相关;生育期长的品种正向效应大于负向效应。生育期、主茎小花数、小花结实数是影响单株产量的主要因素,且以主茎小花数影响和贡献最大。
- 李学俊舒志明
- 关键词：薏苡农艺性状通径分析
- 淋浆水中SOD提取工艺研究
- 2011年
- [目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件。[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料,比较甲苯、异丙醇和乙醇-氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果,研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响,采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化,并采用H2O2和乙醇-氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定。[结果]试验确定以80%的异丙醇为最佳粗酶液提取条件。丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品,其酶比活为1 026 U/mg,酶回收率达65.2%。该酶经H2O2和乙醇-氯仿敏感性鉴定为Cu.Zn-SOD,对热和酸碱度具有一定稳定性,在50℃以下,酶相对活性保持在91.2%～100%,pH为3.0～10.0时SOD活性保持在74.1%～93.6%。[结论]该提取工艺过程简便,易操作,是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺。
- 李学俊舒志明李仕生李虎威秦宝福
- 关键词：SOD活性测定
- 植物抗真菌病害基因工程研究进展被引量：12
- 2003年
- 从表达水解酶、植物病程相关蛋白、抗真菌蛋白、病原毒性因子失活蛋白、抗病基因、植保素合成限速酶、植物细胞壁结构修饰分子、植物抗性反应调节基因等角度综述了植物抗真菌病害基因工程的策略,并就各种策略的研究进展、存在问题和发展趋势进行了探讨。
- 陈鹏李学俊李振岐康振生
- 关键词：转基因植物
- 猪苓菌核代料栽培技术初探被引量：5
- 2007年
- 猪苓（Crifola umbellate Pilat），是一种药用真菌，其药用价值在我国古代早有记载，是重要的传统中药。随着医疗事业的发展，以猪苓为原料的成品药不断开发，有关猪苓人工栽培愈来愈受关注。但是，猪苓菌核生长缓慢以及缺乏有效保护，野生资源已濒临枯竭，近年来国际国内供需矛盾日益加剧。猪苓已被列人为重点保护的42种濒危中药材之一。因此保护猪苓野生资源，开展猪苓代料栽培势在必行。
- 陈德育李学俊田广文
- 关键词：代料栽培技术野生资源药用真菌传统中药人工栽培
- 冬小麦分蘖期氮素亏缺时间对某些生理特性的影响被引量：3
- 2002年
- 应用含 1/ 9强度氮素的 Hoagland营养液 ,对分蘖期小麦分别进行 5 ,10和 15 d的胁迫处理 ,以生长在正常 Hoagland营养液中的小麦为对照 ,探讨了氮素胁迫时间对冬小麦叶绿素、硝酸还原酶活性 (NRA)、可溶性蛋白、硝态氮、铵态氮以及根系活力的影响。结果表明 ,胁迫 15 d后 ,叶绿素含量下降 ;硝酸还原酶活性和可溶性蛋白变化趋势基本一致 ;胁迫后根系硝酸还原酶活性均低于对照水平 ;叶片与根的硝态氮含量在胁迫后均低于对照水平 ,但变化趋势一致 ;铵态氮含量在胁迫后 5 ,10 d高于对照水平 ;胁迫 5 d时根系活力和根系还原活性高于对照且达到最高值。
- 曹翠玲李生秀李学俊
- 关键词：分蘖期生理特性冬小麦
- 白灵菇生产菌株及配方筛选
- 2009年
- 白灵菇是一种名贵食(药)用菌,市场前景广阔.近年来随着栽培量的增大,生产中存在的问题越来越多,筛选适宜配方和与之适应菌株,是白灵菇生产需要解决的主要问题。试验选用三个不同的白灵菇菌株,以棉皮、木屑为主料,以玉米粉、麸皮及石灰为辅料,研究了三个白灵菇菌株,在六个不同配方培养基上的生长、发育、产量及商品性状,筛选出适合生产的优良菌株为天山二号,不同菌株,对玉米粉和麸皮的吸收利用不同,只有在二者比例合适,且石灰添加量为1%时,适合白灵菇的生长、发育。
- 李学俊陈德育党引莉
- 关键词：白灵菇菌株筛选栽培技术
- 猪苓多糖苯酚-硫酸法测定条件的优选被引量：28
- 2007年
- 【目的】建立猪苓多糖快速定量分析方法;【方法】苯酚-硫酸法,以葡萄糖含量为指标,检测波长490nm,用L9(34)正交试验设计优选测定条件;【结果】1.0ml样液,加5%苯酚液0.8ml、硫酸5.0ml,100℃水浴保温15min结果最佳;硫酸加量对结果影响最大,水浴温度次之,苯酚量影响最小;葡萄糖含量呈线性关系范围在5.0～40.0μg/ml;精密度RSD=1.58%(n=6);测定稳定性好(3h内);平均回收率99.22%,RSD=1.87%(n=3);实测猪苓菌丝多糖含量3.46%,RSD=2.07%(n=4)。【结论】本优选法灵敏度高、操作简便、数据稳定性好、误差小、重现性好,值得推广。
- 田广文陈德育李学俊舒志明
- 关键词：猪苓多糖苯酚-硫酸法
